羅制精品-31菊花組織培養(yǎng)

1、舞鋼市一高舞鋼市一高 羅瑞鋒羅瑞鋒菊花的組織培養(yǎng)菊花的組織培養(yǎng)課題背景課題背景植物細(xì)胞或組織，發(fā)育成完植物細(xì)胞或組織，發(fā)育成完整植株，需要什么條件？整植株，需要什么條件？什么叫植物細(xì)胞的全能性什么叫植物細(xì)胞的全能性？（1 1）概念）概念：具有某種生物全部遺傳信息具有某種生物全部遺傳信息的的任何一個(gè)細(xì)胞任何一個(gè)細(xì)胞，具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。 . .植物細(xì)胞全能性表現(xiàn)的條件：植物細(xì)胞全能性表現(xiàn)的條件：離體、適宜營(yíng)養(yǎng)、一定比例的激素、離體、適宜營(yíng)養(yǎng)、一定比例的激素、無菌條件、適宜溫度、光照無菌條件、適宜溫度、光照當(dāng)植物細(xì)胞，脫離了原來所在的植物體的器官或組織，而處當(dāng)植物細(xì)

2、胞，脫離了原來所在的植物體的器官或組織，而處于于離體狀態(tài)離體狀態(tài)時(shí)，在一定的時(shí)，在一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素激素和和其它外界條件其它外界條件的作的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整植株完整植株。. .植物細(xì)胞具有全能性植物細(xì)胞具有全能性（3 3）（2 2）原因）原因：細(xì)胞內(nèi)，含有：細(xì)胞內(nèi)，含有某種生物全部遺傳信息某種生物全部遺傳信息植物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)為什植物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)為什么一定需要離體條件？么一定需要離體條件？（一）植物組織培養(yǎng)的過程：（一）植物組織培養(yǎng)的過程：生物的全部遺傳信息，仍具有發(fā)生物的全部遺傳信息，仍具有發(fā)育成完整新個(gè)體的育成完整新個(gè)體的

3、。離體的植物離體的植物組織或細(xì)胞組織或細(xì)胞外植體外植體有絲分裂有絲分裂脫分化脫分化愈傷愈傷組織組織長(zhǎng)出叢芽長(zhǎng)出叢芽生根生根移栽成活移栽成活長(zhǎng)成植株長(zhǎng)成植株再分化再分化（二）影響植物組織培養(yǎng)的因素：（二）影響植物組織培養(yǎng)的因素：菊花組織培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)操作程序1.1.配制各種母液配制各種母液大量元素：濃縮大量元素：濃縮1010倍；倍；微量元素：濃縮微量元素：濃縮100100倍；倍；二者均常溫保存二者均常溫保存激素、維生素類激素、維生素類用量少的有機(jī)物用量少的有機(jī)物按按1mg/mL1mg/mL配成母液配成母液（1 1）一般要求）一般要求（2 2）配制母液的意義：）配制母液的意義： 減少工作量；減少工作量

4、； 減少微量試劑稱量所減少微量試劑稱量所造成的誤差造成的誤差 （3 3）配制母液流程：）配制母液流程：稱量稱量溶解溶解混合混合定容定容標(biāo)記標(biāo)記保存（保存（4 4O OC C）（2 2）配制母液的意義：）配制母液的意義： 減少工作量；減少工作量； 減少微量試劑稱量所造成的誤差減少微量試劑稱量所造成的誤差 微量元素微量元素 大量元素大量元素有機(jī)物有機(jī)物鐵鹽鐵鹽2.2.配制培養(yǎng)基，高壓蒸汽滅菌配制培養(yǎng)基，高壓蒸汽滅菌 依次加入大量元素、微量元素、有機(jī)物、激素依次加入大量元素、微量元素、有機(jī)物、激素母液母液根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算計(jì)算用量用量將稱好的將稱好的瓊脂瓊脂加入加入

5、800mL800mL蒸餾水，加熱，蒸餾水，加熱，熔化熔化瓊脂瓊脂加入加入30g30g蔗糖蔗糖，攪拌均勻，攪拌均勻加蒸餾水加蒸餾水定容定容到到1000mL1000mL調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pHpH 分裝分裝到錐形瓶中到錐形瓶中（每瓶（每瓶50mL50mL100mL100mL）高壓蒸汽高壓蒸汽滅菌滅菌立式高壓滅菌鍋立式高壓滅菌鍋要兼顧要兼顧藥劑的消毒效果和外植物體的耐受力藥劑的消毒效果和外植物體的耐受力幼葉、幼莖（枝）、花瓣、嫩芽等生長(zhǎng)旺盛的幼幼葉、幼莖（枝）、花瓣、嫩芽等生長(zhǎng)旺盛的幼嫩組織嫩組織 花藥（花粉）花藥（花粉）進(jìn)行消毒進(jìn)行消毒外植體外植體消毒液要完全消毒液要完全浸沒外植體浸沒外植體 消毒液：消毒液：

6、75%75%酒精、酒精、0.1%HgCl0.1%HgCl、 10%10%次氯酸鈉次氯酸鈉消毒時(shí)間依消毒時(shí)間依據(jù)材料而定據(jù)材料而定外植體外植體啟動(dòng)超凈工作啟動(dòng)超凈工作臺(tái)臺(tái)，如打開吹風(fēng)和照明燈，如打開吹風(fēng)和照明燈開關(guān)等等。開關(guān)等等。做好接種準(zhǔn)備工作做好接種準(zhǔn)備工作在等待外植體消毒的同時(shí)，做好接種準(zhǔn)備工作：在等待外植體消毒的同時(shí)，做好接種準(zhǔn)備工作：用酒精進(jìn)行用酒精進(jìn)行桌面消毒。桌面消毒。用酒精棉球?qū)τ镁凭耷驅(qū)ε囵B(yǎng)基和培養(yǎng)培養(yǎng)基和培養(yǎng)基瓶口進(jìn)行消基瓶口進(jìn)行消毒。毒。準(zhǔn)備無菌紙準(zhǔn)備無菌紙點(diǎn)燃酒精燈點(diǎn)燃酒精燈灼燒接種工具時(shí)，要注意安全灼燒接種工具時(shí)，要注意安全瓶外壁貼上標(biāo)簽：植物名稱、接種日期、姓名等瓶

7、外壁貼上標(biāo)簽：植物名稱、接種日期、姓名等接種后，在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動(dòng)灼燒瓶口，加蓋接種后，在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動(dòng)灼燒瓶口，加蓋貼標(biāo)簽：貼標(biāo)簽：植物名稱植物名稱接種日期接種日期姓名等姓名等珍珠巖珍珠巖：是一種火山噴發(fā)的酸性熔巖，是一種火山噴發(fā)的酸性熔巖，經(jīng)急劇冷卻經(jīng)急劇冷卻而成的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形裂隙，而成的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形裂隙，如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被命名為珍珠巖。如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被命名為珍珠巖。是一種天然、無毒，在高溫作用下會(huì)膨是一種天然、無毒，在高溫作用下會(huì)膨脹比較少見的礦物質(zhì)。屬于硅酸鹽。脹比較少見的礦物質(zhì)。屬于硅酸鹽。 蛭蛭 石：石：六、煉苗、移栽六、煉苗、移栽移栽前打開封口膜，

8、讓試管苗在培養(yǎng)間生長(zhǎng)一段時(shí)間后再移栽移栽前打開封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長(zhǎng)一段時(shí)間后再移栽愈傷組織開始分化愈傷組織開始分化愈傷組織愈傷組織四、放在培養(yǎng)室培養(yǎng)四、放在培養(yǎng)室培養(yǎng)1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈、接種的無菌操作（酒精、酒精燈灼燒）灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。在整個(gè)操作過程中，在整個(gè)操作過程中， 是如何來實(shí)現(xiàn)是如何來實(shí)現(xiàn)無菌無菌環(huán)境的？環(huán)境的？2.外植體的生理狀態(tài)外植體的生

9、理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。件之一。 生長(zhǎng)旺盛的嫩枝生理狀況好生長(zhǎng)旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導(dǎo)，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。脫分化和再分化。1. 1. 植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料，植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料，體積小、抗體積小、抗性差，對(duì)培養(yǎng)條件的要求性差，對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高較高。用于植物組織培養(yǎng)。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，同樣的培養(yǎng)基，同樣適合于某些微生物的生長(zhǎng)適合于某些微生物的生長(zhǎng)，如一些，如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄，因此要進(jìn)行嚴(yán)格的污染，就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡

10、棄，因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。無菌操作。因?yàn)椋ɑ芙M織培養(yǎng)是在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，因?yàn)?，花卉組織培養(yǎng)是在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，條件是可控的。條件是可控的。此時(shí)的組織或細(xì)胞為離體的，即細(xì)胞所生活的環(huán)境此時(shí)的組織或細(xì)胞為離體的，即細(xì)胞所生活的環(huán)境為液體有機(jī)物營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，而不是能體現(xiàn)其整個(gè)植物為液體有機(jī)物營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，而不是能體現(xiàn)其整個(gè)植物體的光能自養(yǎng)體的光能自養(yǎng)在培養(yǎng)過程中，是脫分化、再分化的過程，隨著芽在培養(yǎng)過程中，是脫分化、再分化的過程，隨著芽和根的形成，就具有了自養(yǎng)的能力，是由細(xì)胞到一和根的形成，就具有了自養(yǎng)的能力，是由細(xì)胞到一個(gè)個(gè)體的演變過程個(gè)個(gè)體的演變過程1、高等植物是光能自養(yǎng)型生物，為什么在植物組、高等植物是光能自養(yǎng)型生物，為什么在植物組織培養(yǎng)過程中還需要提供有機(jī)物培養(yǎng)基？織培養(yǎng)過程中還需要提供有機(jī)物培養(yǎng)基？2、培養(yǎng)過程中為什么需要進(jìn)行光照、培養(yǎng)