儀器分析紫外-可見分光光度法ppt課件

1、 第一章第一章 紫外紫外- -可見分光光度法可見分光光度法v 掌握紫外掌握紫外-可見分光光度法的基本原理可見分光光度法的基本原理v 及其方法應(yīng)用；及其方法應(yīng)用；v 熟悉紫外熟悉紫外-可見分光光度計的結(jié)構(gòu)；可見分光光度計的結(jié)構(gòu)； 教學(xué)目標教學(xué)目標（一）、知識目標（一）、知識目標v 熟練操作各種型號的紫外熟練操作各種型號的紫外-可見分光光度計；可見分光光度計； v 能應(yīng)用紫外能應(yīng)用紫外-可見分光光度法進行樣品的可見分光光度法進行樣品的v 定性、定量分析。定性、定量分析。 （二）、能力目標（二）、能力目標 利用物質(zhì)對紫外利用物質(zhì)對紫外- -可見光的選擇性吸收，可見光的選擇性吸收，用紫外用紫外- -可

2、見分光光度計測定物質(zhì)對紫外可見分光光度計測定物質(zhì)對紫外- -可可見光的吸收程度并進行定性、定量分析。見光的吸收程度并進行定性、定量分析。紫外紫外- -可見分光光度法簡介可見分光光度法簡介1 1、光的波粒二象性、光的波粒二象性波動性波動性粒子性粒子性一、光的基本性質(zhì)一、光的基本性質(zhì) 波長 ：兩個相鄰波峰或波谷間的距離nm） 頻率 ：單位時間里通過一固定點處波的數(shù)目S-1） 光的波動性光的波動性光以波的形式傳播，可用波長、頻率來表示。光以波的形式傳播，可用波長、頻率來表示。 = c/ = c/ c = 3 c = 31010 cm/s1010 cm/s前往 E = hE = h = hc/ = h

3、c/ h h為普朗克常數(shù)為普朗克常數(shù) 6.636.6310-34J.s10-34J.s光的粒子性光的粒子性光由光子組成，具有能量。光由光子組成，具有能量。E E越大，越大， 越小。越小。E E越小，越小， 越大。越大。根據(jù)根據(jù)E=hc/E=hc/ 可知可知能能 量量 小小大大紫、藍、青、綠、黃、橙、紅紫、藍、青、綠、黃、橙、紅可見光波長范圍可見光波長范圍400-760nm400-760nm波波 譜譜 分分 區(qū)區(qū)書上書上P5光光 譜譜 分分 區(qū)區(qū)能能 量量 小小200nm400nm760nm 大大波波 長長光譜區(qū)域光譜區(qū)域紫外光區(qū)紫外光區(qū)可見光區(qū)可見光區(qū)中紅外中紅外分析方法分析方法紫外紫外可見分

4、光光度法可見分光光度法25um紅外光譜法紅外光譜法紫、藍、青、綠、黃、橙、紅2.5um各種可見光的波長各種可見光的波長顏顏 色色波波 段（段（nmnm）紫紫藍藍青藍青藍青青綠綠黃綠黃綠黃黃橙橙紅紅4004504004504504804504804804904804904905004905005005605005605605805605805806005806006006506006506507606507602、單色光、復(fù)合光與光的互補、單色光、復(fù)合光與光的互補 復(fù)合光：由不同波長的單色光按一定比例復(fù)合光：由不同波長的單色光按一定比例 組成的光，如白光。組成的光，如白光。單色光：具有單一波長的

5、光。單色光：具有單一波長的光。若兩種光可組成白光，則它們?yōu)榛パa光。若兩種光可組成白光，則它們?yōu)榛パa光。 光的互補：光的互補：互互 補補 光光 示示 意意 圖圖藍藍450-480紫紫400-450紅紅650-750青青藍藍480-490青青490-500綠綠500-580黃黃580-600橙橙600-650白光 物質(zhì)對光的吸收過程P7）二、溶液對光的選擇性吸收二、溶液對光的選擇性吸收 物質(zhì)對光的吸收具有選擇性完全吸收完全吸收完全透過完全透過吸收黃色光吸收黃色光光譜示意光譜示意表觀現(xiàn)象示意表觀現(xiàn)象示意溶液對光的吸收與溶液顏色的關(guān)系溶液對光的吸收與溶液顏色的關(guān)系1若溶液透明、均勻，人眼看到的溶液顏色

6、是由透射光的波長決定的。2當入色光為白光復(fù)合光），溶液吸收的光與透射的光互補。光的互補：藍光的互補：藍 黃黃結(jié)論：結(jié)論： 溶液的顏色溶液的顏色（透射光）（透射光）吸收光吸收光顏顏 色色波波 段（段（nmnm）黃綠黃綠黃黃橙橙紅紅紫紅紫紅紫紫藍藍青藍青藍青青紫紫藍藍青藍青藍青青綠綠黃綠黃綠黃黃橙橙紅紅400450400450450480450480480490480490490500490500500560500560560580560580580600580600600650600650650760650760n溶液顏色與吸收光顏色和波段的關(guān)系溶液顏色與吸收光顏色和波段的關(guān)系三、紫外三、紫外-

7、 -可見分光光度法的基本原理可見分光光度法的基本原理v 朗伯朗伯比耳定律光吸收定律）比耳定律光吸收定律） 布格布格(Bouguer)(Bouguer)和朗伯和朗伯(Lambert)(Lambert)先后于先后于17291729年年和和17601760年闡明了光的吸收程度和吸收層厚度的關(guān)年闡明了光的吸收程度和吸收層厚度的關(guān)系。系。A b A b 1852 1852年比耳年比耳(Beer)(Beer)又提出了光的吸收程度和吸又提出了光的吸收程度和吸收物濃度之間也具有類似的關(guān)系。收物濃度之間也具有類似的關(guān)系。A c A c 二者的結(jié)合稱為朗伯二者的結(jié)合稱為朗伯比耳定律。比耳定律。 T-透過率透過率A

8、-吸光度吸光度 b-液層厚度光程長度）液層厚度光程長度）c-被測物濃度被測物濃度k-吸光系數(shù)吸光系數(shù) 吸光度吸光度A：表征物質(zhì)對光吸收程度的量。：表征物質(zhì)對光吸收程度的量。 A = lgI0/It = -lgT = kbc1、朗伯、朗伯比耳定律比耳定律注意注意k的符號與的符號與c的的對應(yīng)關(guān)系對應(yīng)關(guān)系c c的單位的單位K K的單位的單位名稱名稱符號符號mol/Lmol/LL/L/（molcmmolcm）摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù) g/Lg/LL/L/（gcmgcm）質(zhì)量吸光系數(shù)質(zhì)量吸光系數(shù) 摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)-吸光物質(zhì)的特征常數(shù)；在最大吸收波長吸光物質(zhì)的特征常數(shù)；在最大吸收波長maxmax處

9、，常以處，常以maxmax表表示示 。-在溫度和介質(zhì)條件一定時，在溫度和介質(zhì)條件一定時， 僅與吸光物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)，僅與吸光物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)，可作為定性鑒定的參數(shù)；可作為定性鑒定的參數(shù)；-不隨濃度不隨濃度c c 和光程長度和光程長度b b 的改變而改變：的改變而改變： A/b cA/b c。- 在數(shù)值上等于濃度為在數(shù)值上等于濃度為1 mol/L1 mol/L、液層厚度為、液層厚度為1cm1cm時該溶液在某時該溶液在某一波長下的吸光度。一波長下的吸光度。-吸光能力與測定靈敏度的度量；吸光能力與測定靈敏度的度量； maxmax越大表明該物質(zhì)的吸光能越大表明該物質(zhì)的吸光能力越強，測定的靈敏度

10、越高。力越強，測定的靈敏度越高。- 105 105：超高靈敏：超高靈敏 =(6 =(610)10)104104：靈敏：靈敏 104104：不靈：不靈敏敏例：用例：用1,10-二氮菲光度法測定鐵，已知二氮菲光度法測定鐵，已知Fe2+濃度為濃度為0.5584mg/L，比色皿厚度，比色皿厚度2厘米，在厘米，在=508nm測得配合物吸光度測得配合物吸光度A = 0.22，求，求 。 已知已知MFe = 55.84g / mol（1.1104L.mol-1-1 ） 2 2、應(yīng)用朗伯、應(yīng)用朗伯比耳定律時應(yīng)注意的問題比耳定律時應(yīng)注意的問題入射光為平行單色光，且垂直照射；入射光為平行單色光，且垂直照射；吸光質(zhì)

11、點之間無相互作用；吸光質(zhì)點之間無相互作用；吸光度具有加和性吸光度具有加和性A總總=A1+A2+ ）。）。v 吸收曲線吸收光譜）吸收曲線吸收光譜）v 規(guī)范任務(wù)曲線規(guī)范任務(wù)曲線3 3、朗伯、朗伯比耳定律的應(yīng)用比耳定律的應(yīng)用 繪制方法：在c、b固定的情況下,測定某一濃度的標準溶液在各個波長下的吸光度，作A-圖。吸吸 收收 曲曲 線線吸光度隨波長變化的曲線吸光度隨波長變化的曲線（P6P6）XXXXXX的吸收曲線的吸收曲線4005006000.1000.2000.3000.400(nm)0.000圖例：圖例：吸收曲線的繪制練習(xí)吸收曲線的繪制練習(xí)（nm）480490500505510 A0.1930.22

12、50.3380.3850.405（nm）515520525530540 A0.3900.3070.3270.2820.143XXX的吸收曲線實驗數(shù)據(jù)表的吸收曲線實驗數(shù)據(jù)表吸收曲線的特點吸收曲線的特點同一物質(zhì)同一物質(zhì) 不同的物質(zhì)不同的物質(zhì)因其結(jié)構(gòu)不同而具有不同的吸收曲線；因其結(jié)構(gòu)不同而具有不同的吸收曲線；濃度不同，其吸收曲線的形狀和濃度不同，其吸收曲線的形狀和max的的位置不變，但在同一波長下吸光度隨濃位置不變，但在同一波長下吸光度隨濃度的增大而增大。度的增大而增大。連續(xù)光譜寬譜帶）連續(xù)光譜寬譜帶）吸收曲線的意義吸收曲線的意義v為定量分析選擇測量波長；為定量分析選擇測量波長；v 定性分析。定性分

13、析。前往前往 在在、b b固定的情況下固定的情況下, ,測定一系列不同測定一系列不同濃度的標準溶液的吸光度，作濃度的標準溶液的吸光度，作A-cA-c圖。圖。規(guī)范任務(wù)曲線規(guī)范任務(wù)曲線 繪制方法：繪制方法：吸光度隨濃度變化的曲線吸光度隨濃度變化的曲線注意濃度的不同表示方法注意濃度的不同表示方法鐵的標準曲線鐵的標準曲線規(guī)范任務(wù)曲線的繪制練習(xí)規(guī)范任務(wù)曲線的繪制練習(xí) 濃度濃度 （mg/Lmg/L）0.100.200.300.400.500.60吸光度吸光度A A0.0970.2000.3040.4080.5100.613XXX的標準曲線實驗數(shù)據(jù)表的標準曲線實驗數(shù)據(jù)表濃度濃度mg/Lmg/L）吸光度吸光度

14、A A為何有些點偏低？為何有些點偏低？有些點偏高？有些點偏高？朗伯朗伯比耳定律的偏離比耳定律的偏離吸光度吸光度A濃度濃度 c 正偏離正偏離負偏離負偏離偏離原因偏離原因非單色光引起的偏離：非單色光引起的偏離：LB定律要求入射光定律要求入射光為單色光，但目前儀器提供的入射光是由波為單色光，但目前儀器提供的入射光是由波長范圍較窄的光帶組成的復(fù)合光。長范圍較窄的光帶組成的復(fù)合光。非平行入射光引起的偏離非平行入射光引起的偏離介質(zhì)不均勻引起的偏離介質(zhì)不均勻引起的偏離化學(xué)因素引起的偏離：高濃度時引起溶液中化學(xué)因素引起的偏離：高濃度時引起溶液中吸光粒子之間相互作用上升，使吸光能力發(fā)吸光粒子之間相互作用上升，使

15、吸光能力發(fā)生變化；化學(xué)反應(yīng)引起的偏離。生變化；化學(xué)反應(yīng)引起的偏離。如何評價？如何評價？標準曲線的線性標準曲線的線性如何保證？如何保證？-線性相關(guān)系數(shù)線性相關(guān)系數(shù)-儀器、濃度范圍、基本操作儀器、濃度范圍、基本操作通過人眼比較溶液顏色深淺來測定其中待測物質(zhì)含量通過人眼比較溶液顏色深淺來測定其中待測物質(zhì)含量比色管架1、目視比色法四、紫外四、紫外- -可見分光光度法分類可見分光光度法分類（1 1優(yōu)點：設(shè)備簡單、操作快速、靈敏度較高。優(yōu)點：設(shè)備簡單、操作快速、靈敏度較高。（2 2缺陷：準確性差，主觀誤差約達缺陷：準確性差，主觀誤差約達5-20%5-20%。（3 3適用于準確度要求不高的常規(guī)樣品分析，適用

16、于準確度要求不高的常規(guī)樣品分析， 如鋼鐵爐前分析、水質(zhì)分析中的色度分析。如鋼鐵爐前分析、水質(zhì)分析中的色度分析。目視比色法的優(yōu)缺點目視比色法的優(yōu)缺點2 2、分光光度法、分光光度法 通過儀器測定被測溶液對某一波長光的吸收通過儀器測定被測溶液對某一波長光的吸收而確定其中物質(zhì)的含量。而確定其中物質(zhì)的含量。1 1、靈敏度高：試樣中、靈敏度高：試樣中1%-0.001%1%-0.001%微量成分微量成分2 2、準確度高：相對誤差、準確度高：相對誤差2%-5%2%-5%（1%-2%1%-2%）3 3、儀器結(jié)構(gòu)簡單、操作簡便、性價比高、儀器結(jié)構(gòu)簡單、操作簡便、性價比高4 4、應(yīng)用廣泛：幾乎所有的無機離子及許多有

17、、應(yīng)用廣泛：幾乎所有的無機離子及許多有機物機物紫外紫外- -可見分光光度法的特點可見分光光度法的特點五、紫外五、紫外- -可見分光光度計可見分光光度計 光 源吸收池檢測器單色器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)1、儀器結(jié)構(gòu)框圖、儀器結(jié)構(gòu)框圖工作原理及儀器結(jié)構(gòu)示意圖工作原理及儀器結(jié)構(gòu)示意圖 2、紫外、紫外-可見分光光度計的類型可見分光光度計的類型 單波長單光束單波長單光束P15） 單波長雙光束單波長雙光束雙波長雙波長3 3、紫外、紫外- -可見分光光度計可見分光光度計 主要部件主要部件v 光源光源 在儀器工作的波長范圍內(nèi)，提供連續(xù)、有在儀器工作的波長范圍內(nèi)，提供連續(xù)、有足夠發(fā)射強度和良好穩(wěn)定性的復(fù)合光，而且發(fā)足夠發(fā)射

18、強度和良好穩(wěn)定性的復(fù)合光，而且發(fā)射光的強度隨波長的變化應(yīng)盡可能小。射光的強度隨波長的變化應(yīng)盡可能小?？梢妳^(qū)：鎢絲燈或碘鎢燈，波長范圍可見區(qū)：鎢絲燈或碘鎢燈，波長范圍320-3200nm320-3200nm。紫外區(qū)：氫燈或氘燈，波長范圍紫外區(qū)：氫燈或氘燈，波長范圍200-375nm200-375nm。基本要求基本要求常用光源常用光源紫外光源紫外光源-氘燈氘燈(185-375 nm)(185-375 nm)可見光源可見光源-鎢燈鎢燈(320-1000nm)(320-1000nm)v 單色器單色器單色器作用：從光源發(fā)出的復(fù)合光中分出單色器作用：從光源發(fā)出的復(fù)合光中分出所需要的單色光。所需要的單色光。

19、單色器組成：由入射狹縫、準光器透鏡單色器組成：由入射狹縫、準光器透鏡或凹面反射鏡使入射光成平行光）、色散或凹面反射鏡使入射光成平行光）、色散元件、聚焦元件和出射狹縫等組成。元件、聚焦元件和出射狹縫等組成。單色器的核心部分是色散元件如玻璃棱單色器的核心部分是色散元件如玻璃棱鏡和光柵），起分光的作用。鏡和光柵），起分光的作用。 吸收池用于盛放分析試樣；吸收池用于盛放分析試樣； 可見光區(qū)可用玻璃吸收池，可見光區(qū)可用玻璃吸收池， 紫外區(qū)用石英吸收池；紫外區(qū)用石英吸收池； 吸收池的光學(xué)面必須完全垂直于光束方向；吸收池的光學(xué)面必須完全垂直于光束方向； 吸收池要配對。因為吸收池材料本身吸光吸收池要配對。因為

20、吸收池材料本身吸光 特征以及吸收池的光程長度的精度等對特征以及吸收池的光程長度的精度等對 分析結(jié)果都有影響。分析結(jié)果都有影響。v 吸收池吸收池 檢測器的功能：檢測透射光強度、將光學(xué)檢測器的功能：檢測透射光強度、將光學(xué) 信號轉(zhuǎn)變成電信號。信號轉(zhuǎn)變成電信號。 常用的檢測器有光電池、光電管和常用的檢測器有光電池、光電管和 光電倍增管等。光電倍增管等。 v 檢測器檢測器功能：放大信號、顯示或記錄信號。功能：放大信號、顯示或記錄信號。常用的檢測器有數(shù)字顯示、自動記錄儀等。常用的檢測器有數(shù)字顯示、自動記錄儀等。 v 信號處理及顯示系統(tǒng)信號處理及顯示系統(tǒng)各部件作用及材料各部件作用及材料光源光源單色器單色器吸

21、收池吸收池檢測器檢測器材料材料氫燈氫燈/ /氘氘燈燈鎢絲燈鎢絲燈棱鏡（玻璃、棱鏡（玻璃、石英）石英）光柵光柵比色皿（玻比色皿（玻璃、石英）璃、石英）光電管光電管光電池光電池光電倍增管光電倍增管作用作用發(fā)出連續(xù)發(fā)出連續(xù)光源光源將復(fù)合光分為將復(fù)合光分為單色光單色光盛放盛放溶液溶液 將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)閷⒐庑盘栟D(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘栯娦盘栃吞栃吞柌ㄩL波長/nm/nm分光器件分光器件數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理指示指示產(chǎn)地產(chǎn)地721721340-1000340-1000光柵光柵微機微機數(shù)顯數(shù)顯上海天普上海天普722722325-1000325-1000光柵光柵微機微機數(shù)顯數(shù)顯上海天普上海天普S22PCS22PC 34034010

22、001000光柵光柵微機微機數(shù)顯數(shù)顯 上海棱光上海棱光 755B 755B 190-1100190-1100光柵光柵微機微機/ /打印打印數(shù)顯數(shù)顯上海天普上海天普T6T6系列系列 190-1100 190-1100光柵光柵微機微機/ /打印打印數(shù)顯數(shù)顯北京普析北京普析 UV2300 UV2300 200800200800光柵光柵微機微機液晶顯示器液晶顯示器 上海天美上海天美 U1800U1800190-1100190-1100光柵光柵微機微機液晶顯示器液晶顯示器 日本日立日本日立UV2450 UV2450 190190900900衍射光柵衍射光柵 微機微機/ /打印打印液晶顯示器液晶顯示器 日

23、本島津日本島津 常用紫外可見分光光度計常用紫外可見分光光度計721型分光光度計型分光光度計722型分光光度計型分光光度計4 4、分光光度計的使用、分光光度計的使用 預(yù)熱預(yù)熱20min。 調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)T = 0。 調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)T = 100% （A=0）。）。 測定溶液的吸光度測定溶液的吸光度A。六、紫外六、紫外- -可見分光光度法的應(yīng)用可見分光光度法的應(yīng)用n 無機物、有機物吸收光譜的特點無機物、有機物吸收光譜的特點一、定性分析一、定性分析n 定性分析的方法定性分析的方法定性分析的方法定性分析的方法n 純物質(zhì)對照純物質(zhì)對照n 與標準譜圖對照與標準譜圖對照前往back標準吸收光譜譜圖標準吸收光譜譜圖BSa

24、dtler. Sdandard Spectra (Ultraviolet). Heyden, Sadtler. Sdandard Spectra (Ultraviolet). Heyden, London, 1978. London, 1978. 共收集了共收集了4600046000種化合物的紫外吸收光譜種化合物的紫外吸收光譜BR. A. Friedel and M. Orchin, Ultraviolet Spectra of R. A. Friedel and M. Orchin, Ultraviolet Spectra of Aromatic Compounds, Wiley, New

25、York, 1951. Aromatic Compounds, Wiley, New York, 1951. 共收集了共收集了579579種芳香化合物的紫外吸收光譜種芳香化合物的紫外吸收光譜BKenzo. Hirayama, Handbook of Ultraviolet and Visible Kenzo. Hirayama, Handbook of Ultraviolet and Visible Absorption Spectra of Organic Compounds, New York, Absorption Spectra of Organic Compounds, New Yo

26、rk, Plenum, 1967Plenum, 1967BM. J. Kamlet, Organic Electronic Spectra Data, Vol. M. J. Kamlet, Organic Electronic Spectra Data, Vol. 1,19461952, Interscience1,19461952, Interscience，19601960前往前往有機化合物的紫外吸收特性有機化合物的紫外吸收特性常用術(shù)語常用術(shù)語1）、生色團：能吸收近紫外光、可見光引）、生色團：能吸收近紫外光、可見光引起電子躍遷的基團。起電子躍遷的基團。 如：含如：含鍵的基團三鍵、雙鍵）鍵的

27、基團三鍵、雙鍵）2）、助色團：能使有機物吸收峰向長波方）、助色團：能使有機物吸收峰向長波方向移動并使吸收強度增強的基團。向移動并使吸收強度增強的基團。 如：含有孤電子對的氧、氮、鹵素等基團如：含有孤電子對的氧、氮、鹵素等基團留意：對留意：對“色的理解色的理解3）、紫藍移和紅移：因取代基的變）、紫藍移和紅移：因取代基的變更或溶劑的改變使吸收峰波長發(fā)生移動。更或溶劑的改變使吸收峰波長發(fā)生移動。 紅移：波長變長紅移：波長變長 藍紫移：波長變短藍紫移：波長變短幾類有機化合物的紫外吸收特性幾類有機化合物的紫外吸收特性1、飽和烴類及其衍生物、飽和烴類及其衍生物 烷烴（烷烴（ - *，在遠紫外區(qū)產(chǎn)生吸收，一

28、，在遠紫外區(qū)產(chǎn)生吸收，一般作溶劑）般作溶劑） 鹵代烷烴（鹵代烷烴（ n-*，因助色團的作用，吸，因助色團的作用，吸收光譜紅移，在遠紫外和近紫外區(qū)產(chǎn)生吸收）收光譜紅移，在遠紫外和近紫外區(qū)產(chǎn)生吸收）v2、不飽和烯烴及共軛烯烴、不飽和烯烴及共軛烯烴 簡單烯烴遠紫外區(qū)）簡單烯烴遠紫外區(qū)） 共軛烯烴含多生色團，近紫外區(qū)及可見共軛烯烴含多生色團，近紫外區(qū)及可見區(qū)產(chǎn)生吸收，且強度強，有實際意義）區(qū)產(chǎn)生吸收，且強度強，有實際意義） 化合物化合物溶劑溶劑 maxmax/nm /nm maxmax L/molcm L/molcmN=1N=1己烯己烯氣氣 體體1621621000010000N=2N=21,3-1,

29、3-丁二烯丁二烯 己己 烷烷 2172172090020900N=3N=31,3,5-1,3,5-己三烯己三烯 異辛烷異辛烷 2682684270042700N=4N=41,3,5,7-1,3,5,7-辛四烯辛四烯 環(huán)己烷環(huán)己烷 304304醛、酮醛、酮3、羰基化合物（、羰基化合物（ -*， n-*）羧酸類及其衍生物羧酸類及其衍生物210nm）4、芳香族化合物（、芳香族化合物（ -*） 苯三個特征吸收峰）苯三個特征吸收峰） 取代苯吸收峰紅移或紫移）取代苯吸收峰紅移或紫移） 雜環(huán)化合物雜環(huán)化合物 （1五元雜環(huán)兩個吸收峰）五元雜環(huán)兩個吸收峰） （2六元雜環(huán)三個吸收峰）六元雜環(huán)三個吸收峰）化合物化合

30、物 1max/n1max/nmm 1max 1max L/mol.cmL/mol.cm 2max/2max/nmnm 2max 2max L/mol.cmL/mol.cm 3max/3max/nmnm 3max 3max L/mol.cmL/mol.cm苯苯184184600006000020420479007900256256200200萘萘22022011000011000027527556005600312312289289蒽蒽25225220000020000037537579007900菲菲25225250000500002952951300013000330330250250芘芘2

31、4024089000890003343345000050000352352630630丁苜丁苜2782781300001300004734731100011000 溫度溫度 溶劑溶劑 pH值值n影響紫外吸收光譜的因素影響紫外吸收光譜的因素A230250270290310pH=7pH=2胞苷三磷酸在胞苷三磷酸在pH=2pH=2和和pH=7pH=7的吸收光譜的吸收光譜（nm）紫外紫外- -可見分光光度法的應(yīng)用可見分光光度法的應(yīng)用二、檢查物質(zhì)的純度二、檢查物質(zhì)的純度n 無紫外無紫外-可見吸收的物質(zhì)溶劑中可見吸收的物質(zhì)溶劑中n 雜質(zhì)組分的檢查雜質(zhì)組分的檢查紫外紫外- -可見分光光度法的應(yīng)用可見分光光度

32、法的應(yīng)用三、定量分析三、定量分析n 單組分定量分析的方法單組分定量分析的方法n 多組分定量分析的方法多組分定量分析的方法規(guī)范任務(wù)曲線的應(yīng)用規(guī)范任務(wù)曲線的應(yīng)用測定某水樣中微量鐵含量測定某水樣中微量鐵含量0.100.100.500.500.300.300.400.400.200.200.60 0.60 (mg/L)(mg/L) 在在、b b固固定的情況定的情況下，選擇下，選擇使用分光使用分光光度計測光度計測標準系列、標準系列、未知樣品未知樣品的吸光度的吸光度A A。 濃度濃度 （mg/Lmg/L）0.100.200.300.400.500.60標準系列標準系列吸光度吸光度A A0.097 0.20

33、00.304 0.408 0.5100.613未知樣未知樣吸光度吸光度A A0.348記錄實驗數(shù)據(jù)記錄實驗數(shù)據(jù) 繪制標準曲線繪制標準曲線 查出測定液的濃度并計算查出測定液的濃度并計算濃度濃度c c）吸光度吸光度A A0.3480.3480.35mg/L0.35mg/LGoback?設(shè)工作曲線方程為設(shè)工作曲線方程為y = a + bxy = a + bx?x x為標準溶液的濃度；為標準溶液的濃度；y y為相應(yīng)的吸光度；為相應(yīng)的吸光度；a a、b b稱稱回歸系數(shù)。回歸系數(shù)。?可以通過計算公式直接得到可以通過計算公式直接得到a a、b b與與 的數(shù)值。的數(shù)值。?相關(guān)系數(shù)接近相關(guān)系數(shù)接近1 1，說明工

34、作曲線線性好。，說明工作曲線線性好。xbynxbyainiini11211)()(xxyyxxbiniiini2121)()(yyxxbiniini測定時，為避免使用時出差錯，所作工作曲線上必須標明標準曲線的名稱、所測定時，為避免使用時出差錯，所作工作曲線上必須標明標準曲線的名稱、所用標準溶液或標樣名稱和濃度、坐標分度和單位、測量條件儀器型號、用標準溶液或標樣名稱和濃度、坐標分度和單位、測量條件儀器型號、入射光波長、吸收池厚度、參比液名稱以及制作日期和制作者姓名。入射光波長、吸收池厚度、參比液名稱以及制作日期和制作者姓名。 為保證測定準確度，標樣與試樣溶液的組成應(yīng)保持一致，為保證測定準確度，標

35、樣與試樣溶液的組成應(yīng)保持一致，待測試液的濃度應(yīng)在工作曲線線性范圍內(nèi)，最好在工作曲待測試液的濃度應(yīng)在工作曲線線性范圍內(nèi)，最好在工作曲線中部。線中部。 工作曲線應(yīng)定期校準，如果實驗條件變動如更換標準溶工作曲線應(yīng)定期校準，如果實驗條件變動如更換標準溶液、所用試劑重新配制、儀器經(jīng)過修理、更換光源等情液、所用試劑重新配制、儀器經(jīng)過修理、更換光源等情況），工作曲線應(yīng)重新繪制。況），工作曲線應(yīng)重新繪制。 如果實驗條件不變，那么每次測量只需帶一個標樣，校驗如果實驗條件不變，那么每次測量只需帶一個標樣，校驗一下實驗條件是否符合，就可直接用此工作曲線測量試樣一下實驗條件是否符合，就可直接用此工作曲線測量試樣的含量。的含量。 0.0000.0500.1000.1500.2000.2500.3000.3500.4000.4500.1.2.3.4.5.6.7.8.9.10系列1Axy12以兩組分為例以兩組分為例1 1、當吸收光譜不重疊即、當吸收光譜不重疊即a a）1 1 處處x x 組分有吸收組分有吸收 y y 無吸收無吸收b b）2 2