沙門(mén)菌屬微生物學(xué)檢驗(yàn)

1、沙門(mén)菌屬微生物學(xué)檢驗(yàn) 1檢驗(yàn)程序沙門(mén)菌檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖16-2。 圖16-2沙門(mén)菌檢驗(yàn)程序 2標(biāo)本采集按照病種及病程不同采集不同的標(biāo)本。腸熱癥：第1,2周取血，第2、3周取糞便、尿液，全程均可取骨髓。胃腸炎：可取糞便、嘔吐物、可疑食物。敗血癥：取血液。血清學(xué)診斷在病程不同時(shí)期分離采集23份血標(biāo)本，檢測(cè)抗體。 3標(biāo)本挺直檢查將患者標(biāo)本或肉湯培養(yǎng)物挺直用商品膠乳凝集試劑舉行凝集實(shí)驗(yàn)，可迅速檢測(cè)。 4分別培養(yǎng)常用培養(yǎng)基有腸道挑選鑒別培養(yǎng)基麥康凱（mac）或伊紅亞甲藍(lán)(emb),ss等以及強(qiáng)挑選培養(yǎng)基（孔雀綠和等）。分別培養(yǎng)傷寒沙門(mén)菌，用效果較好，而其他沙門(mén)菌用孔雀綠瓊脂效果較好。對(duì)菌量較少的標(biāo)本，可用或

2、肉湯增菌。 (1）糞便及肛拭子標(biāo)本：接種于ss和mac，以提高標(biāo)本檢出率。 (2)血液和骨髓標(biāo)本：先增菌培養(yǎng)，有菌生長(zhǎng)后移種于血瓊脂或ss, mac平板，孵育1824 h后，取可疑菌落涂片、革蘭染色后鏡檢，報(bào)告結(jié)果，同時(shí)做系統(tǒng)鑒定。對(duì)增菌培養(yǎng)7天仍無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的報(bào)告陰性。 (3)尿液和體液標(biāo)本：無(wú)菌實(shí)行中段尿、膽汁、腦脊液、胸腹水等，經(jīng)3000 r/min離心30 min，取沉淀接種于增菌培養(yǎng)基、血平板、ss平板等培養(yǎng)基。 (4)可疑食物標(biāo)本：研磨后加10倍量的無(wú)菌生理鹽水混勻，接種于增菌培養(yǎng)基和ss平板。 5鑒定 (1)初步鑒定：取可疑菌落鑒定到腸桿菌科（表16-2)。選用分析系統(tǒng)繼續(xù)鑒定或用

3、手工法繼續(xù)鑒定（表16-9)。 表16-9埃希菌屬、屬、屬、枸櫞酸菌屬、愛(ài)德華菌屬的鑒別 (2)最后鑒定：經(jīng)生化反應(yīng)鑒定到沙門(mén)菌屬后，做血清學(xué)鑒定。按o抗原、vi抗原、h第1相和h第2相的挨次做凝集實(shí)驗(yàn)。臨床常見(jiàn)沙門(mén)菌95以上屬af組（群），臨床最常用的診斷血清為10種血清組合，包括af多價(jià)o血清、vi血清、4種o血清（o2,o4,o7,o9）和4種h(1相）血清（a,b,c,d)組成。先與沙門(mén)菌af組多價(jià)o診斷血清做玻片凝集，按照凝集結(jié)果再分離與代表每個(gè)0血清群的單價(jià)因子血清做玻片凝集，依凝集結(jié)果再挑選性與第1相h、第2相h單價(jià)因子血清做玻片凝集，綜合凝集結(jié)果按表16-8推斷沙門(mén)菌的血清型。

4、 玻片凝集注重事項(xiàng)：與多價(jià)診斷血清不凝集時(shí)，將待檢菌制成深厚菌懸液，隔水加熱1001530 min，冷卻后再做凝集實(shí)驗(yàn)，煮沸處理能破壞vi抗原；如多價(jià)診斷血清不凝集且vi抗原陰性者不考慮沙門(mén)菌；僅單相h（第1相或第2相）凝集時(shí)，需用位相分別的辦法誘導(dǎo)出另一相抗原，再舉行凝集實(shí)驗(yàn)；血清學(xué)難以區(qū)別的如c組，需進(jìn)一步做全面生化反應(yīng)。 6血清學(xué)診斷腸熱癥病程長(zhǎng)，目前用法抗生素普遍，癥狀常不典型，臨床標(biāo)本細(xì)菌分別陽(yáng)性率低，故檢測(cè)抗體（血清學(xué)實(shí)驗(yàn)）幫助診斷意義較大。血清學(xué)實(shí)驗(yàn)有肥達(dá)實(shí)驗(yàn)(widal test)、間接血凝法、elisa法等，其中肥達(dá)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用較為普遍。 肥達(dá)實(shí)驗(yàn)是用已知傷寒沙門(mén)菌菌體（o）抗原

5、、鞭毛（h）抗原及甲型副傷寒沙門(mén)菌h抗原、乙型副傷寒沙門(mén)菌的h抗原（診斷菌液）與受檢血清做定量凝集實(shí)驗(yàn)，測(cè)定受檢血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其效價(jià)。肥達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說(shuō)明必需結(jié)合臨床表現(xiàn)、病程、病史以及本地區(qū)流行病學(xué)狀況。 (1)正常值：因沙門(mén)菌隱性感染或預(yù)防接種，正常人血清中可含有一定量的沙門(mén)菌抗體，其效價(jià)有地區(qū)差異。若傷寒沙門(mén)菌o凝集效價(jià)1:80, h凝集效價(jià)l:160，副傷寒的沙門(mén)菌h凝集效價(jià)1:80才有診斷價(jià)值。 (2)動(dòng)態(tài)觀看：有時(shí)單次效價(jià)增高不能定論，可在病程中逐周復(fù)查。若效價(jià)逐次遞增或復(fù)原期效價(jià)比初次大于或等于4倍故意義。 (3) o與h抗體的診斷意義：o抗體為igm類(lèi)抗體，浮現(xiàn)較早，持續(xù)約半年，消逝后不易受非特異病原刺激而重臨。h抗體是igg類(lèi)抗體，浮現(xiàn)較晚，持續(xù)時(shí)光可長(zhǎng)達(dá)數(shù)年，消逝后易受非特異性病原刺激而短暫上升。因此，o, h凝集效價(jià)均超過(guò)正常值時(shí)，腸熱癥的可能性較大；如兩者均低，腸熱癥可能性較??；如o高h(yuǎn)不高，可能是感染早期或與傷寒沙門(mén)菌o抗原有交錯(cuò)反應(yīng)的其他沙門(mén)菌（如腸炎沙門(mén)菌）感染；若o不高h(yuǎn)高，有可能是預(yù)防接種或非特異性回憶反應(yīng)。 (4)其他：有少數(shù)病例，在囫圇