血清脂蛋白的快速離心分離法

1、血清脂蛋白的快速離心分離法利用不同容量的角式轉(zhuǎn)頭及很容易配制的梯度液，在各種型號的超速離心機(jī)上都能得到滿意的分離結(jié)果。下面舉了幾個分離實例，實際上還可以應(yīng)用于各種型號各種容量的固定角式轉(zhuǎn)頭。（一） 梯度液A液：11.40gNacl，0.1g EDTA-Na2，置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1ml 1N NaOH，混勻至全部溶解。加重蒸水至1000ml最后再加3ml重蒸水（Nacl：0.195mol）。終密度1.006g/cm3，PH10.37。B液：加24.98g NaBr 到100ml A液中。終密度1.182g/cm3。（Nacl：0.195mol， NaBr：7.65mol

2、），PH9.72。C液：加78.32g NaBr 到100ml A液中。終密度1.478g/cm3。（Nacl：0.195mol， NaBr：7.65mol），PH8.86。（二） 離心機(jī)及轉(zhuǎn)頭 離心機(jī)：Hitachi CP-MX系列超速離心機(jī)或其他類似機(jī)組。Hitachi CS-150GXL微量超速離心機(jī)。 轉(zhuǎn)頭，離心管；S 140 AT：140,000rpm,1,050,000×g，10×2ml，K=5，1PC厚壁管。S 80 AT3：80,000rpm,415,000×g，8×8ml，K=23，6PC厚壁管。S 70 AT：70,000rpm,50

3、5,000×g，8×40ml，K=44，40PA管。（三） 血漿-血球分離：全血，角轉(zhuǎn)頭或甩平轉(zhuǎn)頭3000rpm×20min，沉淀為血細(xì)胞，上清血漿待用。（四） 乳糜粒分離： 離心參數(shù)：各種轉(zhuǎn)頭均可用，4×106（g×min），10 梯度液：離心管下部3/4容積為血漿，上部1/4容積為0.15MNacl+0.3MEDTA。PH7.4。 離心結(jié)果：乳糜粒上浮，離心管傾斜，吸管貼管壁慢吸出（約占血漿容積的26%。禁令12小時以上供血者血漿中乳糜含量很低，食后供血者含量較高。（五） 血清脂蛋白分離：轉(zhuǎn)頭離心管內(nèi)液體分布離心參數(shù)結(jié)果S140AT(CS-

4、150GXL機(jī)組)下部600l血漿上部300l A液140，000rpm×50min16 加速：5 減速：7可見明顯分層上部約1/3VLDL吸出S80AT3(CS-150GXL機(jī)組)下部3.4ml血漿上部1.7mlA液80，000rpm×4.5hrs16 加速：5 減速：7同上P70AT(CP-MX機(jī)組)下部24ml血漿上部11.7ml A液70，000rpm×8hrs16 加速：5 減速：7同上（）VLDL分離（<1.006g/cm3）（）LDL（含IDL）分離（1.006g/cm3<<1.063g/cm3）轉(zhuǎn)頭離心管內(nèi)液體分布離心參數(shù)結(jié)果S1

5、40AT(CS-150GXL機(jī)組)第一次離心后上部VLDL取出，下部600l移入另一離心管，加入300l B液，充分混合140，000rpm×80min16 加速：9 減速：7上部1/3體積LDL+IDL吸出S80AT3(CS-150GXL)第一次離心后上部VLDL吸出，下部3.4ml移入另一離心管，加入1.7ml B液并充分混合80，000rpm×5.5hrs16 加速：9減速：7同上P70AT(CP-MX系列超速機(jī)或類似機(jī)型)第一次離心后上部11.7ml吸出，下部約24ml 移入另一離心管，加入11.7ml B液，充分混合70，000rpm×10hrs16加速

6、：9 減速：6同上（）HDL分離（1.063g/cm3<<1.21g/cm3）轉(zhuǎn)頭離心管內(nèi)液體分布離心參數(shù)結(jié)果S140AT(CS-150GXL機(jī)組)第二次離心后吸出上部300l后，下部600l移入另一離心管，加入300l C液，充分混合140，000rpm×140min16 加速：9減速：7可見較明顯分層，上部為HDL，下部為血清白蛋白及球蛋白 S80AT3(CS-150GXL機(jī)組)第二次離心后吸出上部約1.7ml、下部3.4ml移入另一離心管，加入1.7ml C液，充分混合80，000rpm×8小時16 加速：9減速：7同上P70AT(CP-MX系列機(jī)或其他類型機(jī)組)第二次離心后吸出上部1/3、下部2/3移入另一離心管，加入約12ml C液，充分混合70，000rpm×15小時16 加速：9減速：6同上（本文部分實驗由上海長海醫(yī)院 賈鳳玉完成）參考文獻(xiàn)