“針刺五臟俞穴調(diào)五臟神”針?lè)▽?duì)失眠大鼠腦內(nèi)細(xì)胞因子調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制的研究

1、    【摘要】  目的：觀察針刺五臟俞穴對(duì)失眠大鼠腦內(nèi)細(xì)胞因子的影響。方法：Wistar大鼠，雄性，體重180220 g，40只隨機(jī)分為4組，空白組：空白對(duì)照；模型組：腹腔注射PCPA；安定組：腹腔注射PCPA后，連續(xù)5個(gè)周期給予安定灌胃治療；針刺組：腹腔注射PCPA后，連續(xù)5個(gè)周期給予針刺治療。分別觀察各組大鼠下丘腦內(nèi)IL1、TNF含量的變化。結(jié)果：模型組腦內(nèi)IL1、TNF含量明顯降低，與空白組比較有顯著性差異(P0.05)。安定組腦內(nèi)IL1、TNF含量均有明顯升高，與模型組比較有顯著性差異(P0.05)。針刺組腦內(nèi)IL1、TNF

2、含量有明顯升高，與模型組比較有顯著性差異(P0.05)。結(jié)論：針刺五臟俞穴對(duì)失眠大鼠腦內(nèi)細(xì)胞因子的影響顯著,針刺五臟俞是治療失眠癥的一種有效方法。 【關(guān)鍵詞】  失眠 針刺療法 細(xì)胞因子 穴 背俞 大鼠    基金項(xiàng)目:吉林省科學(xué)技術(shù)廳課題(課題編號(hào)20050574)    失眠癥中醫(yī)稱(chēng)之不寐、不得臥，是臨床常見(jiàn)病癥之一，常因臟腑功能紊亂、氣血虧虛、陰陽(yáng)失調(diào)導(dǎo)致。持續(xù)失眠可影響自主神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)和免疫功能。白細(xì)胞介素1(IL1)和腫瘤壞死因子(TNF)是具有多種生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，現(xiàn)已證明，IL1和TNF是參與睡眠的免疫調(diào)節(jié)中

3、有代表性的細(xì)胞因子，內(nèi)源性的IL1和TNF隨著睡眠的變化而呈現(xiàn)節(jié)律性的含量改變，外源性的IL1和TNF則均可誘發(fā)動(dòng)物睡眠1。筆者在總結(jié)導(dǎo)師東貴榮教授“調(diào)五臟神治療失眠”經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上2，觀察了“針刺五臟俞穴調(diào)五臟神”針?lè)▽?duì)失眠大鼠下丘腦內(nèi)IL1和TNF含量的影響，進(jìn)一步研究了“針刺五臟俞調(diào)五臟神”針?lè)ǜ深A(yù)失眠的機(jī)制，為“調(diào)五臟神治療失眠”學(xué)說(shuō)提出實(shí)驗(yàn)依據(jù)。    1  實(shí)驗(yàn)材料    1.1  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物  健康Wistar大鼠，雄性，體重180220 g長(zhǎng)春高新動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，為普通級(jí)動(dòng)物，許可

4、證號(hào)：SCKE(吉)2003。在長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院新藥研究開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)室常溫下飼養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。    1.2  動(dòng)物分組  空白組不做任何處置，每日空抓，反映未做任何處置大鼠下丘腦內(nèi)IL1、TNF的含量。模型組腹腔注射PCPA造模成功后，不作任何處理，反映大鼠治療前下丘腦內(nèi)IL1、TNF的水平。安定組腹腔注射PCPA后，給予安定灌胃治療，觀察造模后安定對(duì)大鼠下丘腦內(nèi)IL1、TNF的影響。針刺組取肺俞(雙)、心俞(雙)、脾俞(雙)、腎俞(雙)，觀察針刺對(duì)失眠大鼠下丘腦內(nèi)IL1、TNF的影響。    2

5、0; 實(shí)驗(yàn)方法    2.1  造模方法  采用PCPA腹腔注射的方法，臨用前按大鼠450 mg/kg用量，用弱堿性生理鹽水配置成混懸液備用。除空白組外，其余3組腹腔注射PCPA混懸液，連續(xù)注射2 d，空白組不做任何處理，于第1次腹腔注射2830 h后，大鼠出現(xiàn)晝夜節(jié)律消失，白天夜晚活動(dòng)不停，表示模型復(fù)制成功。    2.2  針刺療法  參照華興邦大鼠穴位圖譜，于第3胸椎棘突下旁開(kāi)7 mm取肺俞(雙)，于第5胸椎棘突下旁開(kāi)7 mm取心俞(雙)，于第12胸椎棘突下旁

6、開(kāi)7 mm取脾俞(雙)，于第2腰椎棘突下旁開(kāi)7 mm取腎俞(雙)。    操作：常規(guī)消毒后，采用0.35 mm×20 mm不銹鋼毫針，直刺6 mm，將Hj68051型經(jīng)穴治療儀，正極接肺俞的毫針，負(fù)極接腎俞的毫針，疏密波(8/80 Hz，疏密波轉(zhuǎn)換14次/min，電壓強(qiáng)度從1V隨針刺時(shí)間和次數(shù)逐漸增加，保持局部輕微抖動(dòng)為度，終強(qiáng)度為3V電流為1mA)。通電時(shí)間為10 min，留針20 min為一個(gè)針刺周期，連續(xù)重復(fù)5個(gè)針刺周期共計(jì)2.5 h，出針后0.5 h處死大鼠。    2.3  西藥療法  安定片，

7、按成人催眠劑量10 mg/d，用大鼠給藥劑量體表面積公式算出大鼠給藥劑量為0.92 mg/kg，連續(xù)5 d給藥后處死。    2.4  測(cè)定方法  用放射免疫檢測(cè)法測(cè)定各組大鼠下丘腦內(nèi)的IL1、TNF的含量。    3  實(shí)驗(yàn)結(jié)果    各組大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用(±s)表示，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果采用SPSS 11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。    3.1  針刺對(duì)失眠大鼠下丘腦內(nèi)IL1含量的影響  見(jiàn)表1。表1 

8、; 針刺對(duì)失眠大鼠下丘腦內(nèi)IL1含量的影響注：與模型組比較，P0.05    由表1可見(jiàn)，模型組下丘腦內(nèi)IL1含量與空白組比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。針刺組下丘腦內(nèi)IL1含量升高明顯，與模型組比較有顯著性差異(P0.05)。安定組下丘腦內(nèi)IL1含量亦略有升高，但與模型組比較也無(wú)顯著性差異(P0.05)。    3.2  針刺對(duì)失眠大鼠下丘腦內(nèi)TNF含量的影響  見(jiàn)表2。表2  針刺對(duì)失眠大鼠下丘腦內(nèi)TNF含量的影響 注：與模型組比較P0.05    由表2可見(jiàn)，

9、模型組下丘腦內(nèi)TNF含量與空白組比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。針刺組下丘腦內(nèi)TNF含量升高明顯，與模型組比較有顯著性差異(P0.05)。安定組下丘腦內(nèi)TNF含量亦略有升高，但與模型組比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。    4  討論    細(xì)胞因子是機(jī)體免疫細(xì)胞產(chǎn)生的，是一小分子多肽類(lèi)糖蛋白質(zhì)，極微量就能發(fā)揮作用，有靶細(xì)胞的特異性。近年對(duì)睡眠的免疫調(diào)節(jié)研究甚多，均證實(shí)人在睡眠中其免疫功能也發(fā)生了許多改變，剝奪睡眠會(huì)影響免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子的活性3。細(xì)胞因子不但是重要的免疫調(diào)節(jié)因子，而且具有廣泛的中樞調(diào)節(jié)作用，它們?cè)趯?duì)神經(jīng)活性和影響輸入

10、、輸出關(guān)系的反應(yīng)環(huán)路中產(chǎn)生誘導(dǎo)局部狀態(tài)的改變，同時(shí)也影響突觸的可塑性。細(xì)胞因子不僅在外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞中釋放并存在，而且外周神經(jīng)和大腦中也存在，因此細(xì)胞因子能通過(guò)不同線路影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的睡眠過(guò)程4。目前研究較多的細(xì)胞因子主要有IL1、TNF。    IL1和TNF是具有多種生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，在炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用，是神經(jīng)內(nèi)分泌免疫三大系統(tǒng)的共同語(yǔ)言信號(hào)。TNF促進(jìn)大鼠、小鼠腦內(nèi)5HT的合成，提高5HT及其代謝產(chǎn)物5HIAA的含量，這可能是它促進(jìn)SWS(慢波睡眠)的機(jī)制5。    許多免疫增強(qiáng)劑及免疫調(diào)節(jié)劑具有調(diào)節(jié)睡眠時(shí)相，改善睡眠質(zhì)量

11、的作用。異丙肌苷、轉(zhuǎn)移因子、胞壁酰二肽等免疫增強(qiáng)劑在使腦內(nèi)IL1、TNF分泌增加的同時(shí)，也延長(zhǎng)了家兔的睡眠時(shí)間；應(yīng)用免疫抑制劑環(huán)磷酰胺降低家兔免疫功能的同時(shí)，可明顯抑制SWS6。    腹腔注射PCPA后，模型組下丘腦內(nèi)IL1含量略低于空白組，模型組下丘腦內(nèi)TNF含量略高于空白組，但組間比較不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。安定對(duì)腹腔注射PCPA所致失眠大鼠下丘腦內(nèi)IL1和TNF含量的影響不明顯，說(shuō)明安定治療失眠的機(jī)理不是通過(guò)提高免疫細(xì)胞因子的活性實(shí)現(xiàn)的，其治療作用途徑較為單一。    “針刺五臟俞調(diào)五臟神”針?lè)ㄌ岣吡薎L1和TNF的含量，說(shuō)明該針?lè)ň哂姓{(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的作用，進(jìn)一步證實(shí)免疫細(xì)胞因子參與了睡眠調(diào)節(jié)過(guò)程，為驗(yàn)證“調(diào)五臟神治療失眠”學(xué)說(shuō)提供了實(shí)驗(yàn)證明?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1Recht schaffen A,Bergmann BM.Sleep deprivation and host de2 fenseJAm J Physiol Regul Integr Comp Physiol,2001,280(2):6 021.2胡金鳳.從五臟藏神的理論內(nèi)涵探討膀胱經(jīng)五臟俞穴治療失眠癥的立法原則J.中國(guó)針灸,2006,