基因工程特訓(xùn)(教師版)

1、基因工程拔高訓(xùn)練一、選擇題1人的血紅蛋白中有一種一珠蛋白，它的基因有1700個堿基對，其中有3個外顯子，2個內(nèi)含子，能編碼146個氨基酸，下列敘述正確的有翻譯蛋白質(zhì)的信使RNA堿基數(shù)量多于438個 三個外顯子的堿基數(shù)量約占整個基因的26非編碼區(qū)是兩個基因之間沒有遺傳效應(yīng)的區(qū)段 內(nèi)含子將編碼區(qū)和非編碼區(qū)隔開RNA聚合酶的結(jié)合位點(diǎn)位于非編碼區(qū)A B C D答案 A2.基因工程常用的受體細(xì)胞有 大腸桿菌 枯草桿菌 支原體 動植物細(xì)胞A. B. C. D.答案 D3甲、乙兩圖表示從細(xì)菌細(xì)胞中獲取目的基因的兩種方法，以下說法中錯誤的是A甲方法可建立該細(xì)菌的基因組文庫 B乙方法可建立該細(xì)菌的cDNA文庫C

2、甲方法要以核糖核苷酸為原料 D乙方法需要逆轉(zhuǎn)錄酶參與答案C4 PCR技術(shù)通過對目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，可以得到大量的目的基因，下面對該技術(shù)的敘述，不正確的是A遵循的基本原理是DNA半保留復(fù)制和堿基互補(bǔ)配對B擴(kuò)增儀內(nèi)必須加入引物、原料和DNA聚合酶C每擴(kuò)增一次，溫度都要發(fā)生907555的變化D成指數(shù)式擴(kuò)增，約為2n（n為擴(kuò)增次數(shù)）答案 C5（10白牛高中模擬）下圖示真核生物染色體組成， 1、2、3、4分別表示（）A.胸腺嘧啶、非編碼區(qū)、內(nèi)含子、外顯子 B.胸腺嘧啶、非編碼序列、外顯子、內(nèi)含子C.尿嘧啶、非編碼區(qū)、外顯子、密碼子 D.尿嘧啶、非編碼序列、內(nèi)含子、外顯子答案A6.下列圖中關(guān)于P、Q、R、S

3、、G的描述，正確的是 AP代表的是質(zhì)粒RNA，S代表的是外源DNABQ表示限制性內(nèi)切酶的作用，R表示RNA聚合酶的作用CG是RNA與DNA形成的重組質(zhì)粒DG是轉(zhuǎn)基因形成的重組DNA質(zhì)粒答案D7DNA分子有兩條鏈組成，兩鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械?。每條鏈連接磷酸基團(tuán)的一端用5作標(biāo)記。另一端標(biāo)記為3，下列四條DNA分子片段中，可以和R片段之間通過粘性末端結(jié)合的是（ ）A B C D答案C8.下圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中依次表示限制性內(nèi)切酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是A、 B、 C、 D、答案 C.9.質(zhì)粒是基因工程中最常用的運(yùn)載體，它存在于許多細(xì)菌體內(nèi)。質(zhì)粒上有標(biāo)

4、記基因如圖所示，通過標(biāo)記基因可以推知外源基因（目的基因）是否轉(zhuǎn)移成功。外源基因插入的位置不同，細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長情況也不同，下表是外源基因插入位置（插入點(diǎn)有a、b、c），請根據(jù)表中提供細(xì)菌的生長情況，推測三種重組后細(xì)菌的外源基因插入點(diǎn)，正確的一組是 細(xì)菌在含青霉素培養(yǎng)基上生長情況細(xì)菌在含四環(huán)素培養(yǎng)基上生長情況能生長能生長能生長不能生長不能生長能生長A是c；是b；是a B是a和b；是a；是bC是a和b；是b；是a D是c；是a；是b答案 A.10.基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制酶I的識別序列和切點(diǎn)是GGATCC ，限制酶II的識別序列和切點(diǎn)是GATC

5、。根據(jù)圖示判斷下列操作正確的是 注：GeneI 和Gene 表示兩種標(biāo)記基因 表示限制酶僅有的識別序列放大GGATCCCCTAGGGATCCTAG目的基因GGATCCCCTAGGGene IGene IIGATCCTAGA質(zhì)粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割B質(zhì)粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割C目的基因和質(zhì)粒均用限制酶切割D目的基因和質(zhì)粒均用限制酶切割答案A11 “X基因”是DNA分子上一個有遺傳效應(yīng)的片段，若要用PCR技術(shù)特異性地拷貝“X基因”，需在PCR反應(yīng)中加入兩種引物，兩種引物及其與模板鏈的結(jié)合位置如圖1所示。經(jīng)4輪循環(huán)后產(chǎn)物中有五種不同的DNA分子，如圖2所示，其中第種DNA分

6、子有幾個：（ ）A、2 B、4 C、6 D、8答案D12.（10內(nèi)鄉(xiāng)一高月考）花粉粒通道法是指利用植物受精后花粉萌發(fā)形成的花粉管通道，將目的基因?qū)肷胁痪邆浼?xì)胞壁的合子，形成含有目的基因的胚。經(jīng)培養(yǎng)、篩選，可獲得有特定性狀的轉(zhuǎn)基因植株。下列有關(guān)說法中不正確的是( )A為了減少盲目性，可以通過人工合成的途徑來獲得目的基因B目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，通過植物組織培養(yǎng)才能獲得相應(yīng)的植株C所得轉(zhuǎn)基因植株個體發(fā)育的起點(diǎn)是受精卵，形成該植株時無脫分化過程D將目的基因?qū)肴~綠體DNA中，可避免目的基因通過花粉傳遞而造成“基因污染” 答案B13.基因工程技術(shù)也稱為DNA重組技術(shù)，其實(shí)施必須具備的四個必要條件是A

7、.目的基因 限制性內(nèi)切酶 運(yùn)載體 體細(xì)胞 B.重組DNA RNA聚合酶 限制性內(nèi)切酶 連接酶C.工具酶 目的基因 運(yùn)載體 受體細(xì)胞D.模板DNA 信使RNA 質(zhì)粒 受體細(xì)胞答案C14在DNA 測序工作中，需要將某些限制性內(nèi)切核酸酶的限制位點(diǎn)在 DNA上定位，使其成為 DNA 分子中的物理參照點(diǎn)。這項(xiàng)工作叫做“限制酶圖譜的構(gòu)建”。假設(shè)有以下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)：用限制酶 Hind，BamH和二者的混合物分別降解一個 4kb（1kb即1千個堿基對）大小的線性DNA 分子，降解產(chǎn)物分別進(jìn)行凝膠電泳，在電場的作用下，降解產(chǎn)物分開，如下圖所示。據(jù)此分析，這兩種限制性內(nèi)切核酸酶在該DNA 分子上的限制位點(diǎn)數(shù)目是以下哪

8、一組？AHind1個，BamH2 個 BHind2個，BamH3個CHind2個，BamH1 個 DHind和BamH各有2 個15下列有關(guān)“基因探針”的敘述，不正確的是 A基因探針的工作原理是堿基互補(bǔ)配對B待測的DNA分子首先要解旋變?yōu)閱捂?，才可用基因探針測序C待測的DNA分子可以直接用基因探針測序 D基因探針技術(shù)可用于疾病診斷和環(huán)境監(jiān)測答案C16細(xì)菌抗藥性基因存在于 A核區(qū)的DNA B RNA C質(zhì)粒 D小的直線型DNA答案C17在PCR擴(kuò)增前，需要將下列哪些物質(zhì)加入微量離心管中？（ ）模板DNA 模板RNA DNA解旋酶 耐高溫的DNA聚合酶 引物 PCR緩沖液 脫氧核苷酸貯備液 核苷酸

9、貯備液ABCD答案A18人的糖蛋白必須經(jīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體加工合成。通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，可以使人的糖蛋白基因得以表達(dá)的受體細(xì)胞是A大腸桿菌 B酵母菌 CT4噬菌體 D質(zhì)粒DNA答案B19質(zhì)粒是基因工程最常用的運(yùn)載體，它的主要特點(diǎn)是： ( )能自主復(fù)制不能自主復(fù)制結(jié)構(gòu)很小蛋白質(zhì)環(huán)狀RNA環(huán)狀DNA能“友好”地“借居”AB CD答案C20.水母發(fā)光蛋白由236個氨基酸構(gòu)成，其中Asp.Gly.Ser構(gòu)成發(fā)光環(huán)，現(xiàn)已將這種蛋白質(zhì)的基因作為生物轉(zhuǎn)基因的標(biāo)記，在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中，這種蛋白質(zhì)的作用是( )A.促使目的基因?qū)胨拗骷?xì)胞中 B.促使目的基因在宿主細(xì)胞中復(fù)制C.使目的基因容易被檢測出來 D.使目的基因容易

10、成功表達(dá)答案：C21限制性內(nèi)切酶能識別特定的DNA序列并進(jìn)行剪切，不同的限制性內(nèi)切酶可以對不同的核酸序列進(jìn)行剪切。現(xiàn)以3種不同的限制性內(nèi)切酶對6.2kb大小的線狀DNA進(jìn)行剪切后。用凝膠電泳分離各核酸片段，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示。請問：3種不同的限制性內(nèi)切酶在此DNA片段上相應(yīng)切點(diǎn)的位置是 答案：D22下圖是將人的生長激素基因?qū)爰?xì)菌D細(xì)胞內(nèi)，產(chǎn)生“工程菌”的示意圖。所用的載體為質(zhì)粒A。若已知細(xì)菌D細(xì)胞內(nèi)不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因，質(zhì)粒A導(dǎo)入細(xì)菌后，其上的基因能得到表達(dá)。能表明目的基因已與載體結(jié)合，并被導(dǎo)入受體細(xì)胞的結(jié)果是()A在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基上均能生長繁殖的細(xì)菌B在含

11、氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基上都不能生長繁殖的細(xì)菌C在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生長繁殖，但在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能生長繁殖的細(xì)菌D在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能生長繁殖，但在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上能生長繁殖的細(xì)菌答案：C23(2011天津?qū)氎嬉荒?下列有關(guān)基因工程的敘述，錯誤的是()A從基因組文庫中獲取的某種生物的部分基因，可以實(shí)現(xiàn)物種間的基因交流B從cDNA文庫中獲取的目的基因，既無啟動子，又無內(nèi)含子C用人的胰高血糖素基因制成的DNA探針，檢測人胰島B細(xì)胞中的mRNA，可形成雜交分子D基因表達(dá)載體中的標(biāo)記基因。不能含有限制酶的切割位點(diǎn)答案：C24(2011北京東城示范校聯(lián)考二)降鈣素是一種

12、多肽類激素，臨床上用于治療骨質(zhì)疏松癥等。人的降鈣素活性很低，半衰期較短。某科學(xué)機(jī)構(gòu)為了研發(fā)一種活性高、半衰期長的新型降鈣素，從預(yù)期新型降鈣素的功能出發(fā)，推測相應(yīng)的脫氧核苷酸序列，并人工合成了兩條72個堿基的DNA單鏈，兩條鏈通過18個堿基對形成部分雙鏈DNA片段，再利用Klenow酶補(bǔ)平，獲得雙鏈DNA，過程如下圖：獲得的雙鏈DNA經(jīng)EcoR (識別序列和切割位 點(diǎn)GAATTC)和BamH (識別序列和切割位 點(diǎn)GGATCC)雙酶切后插入大腸桿菌質(zhì)粒中。下列有關(guān)分析錯誤的是()AKlenow酶是一種DNA聚合酶B合成的雙鏈DNA有72個堿基對CEcoR 和BamH 雙酶切的目的是保證目的基因和

13、運(yùn)載體的定向連接D篩選重組質(zhì)粒需要大腸桿菌質(zhì)粒中含有標(biāo)記基因答案：B25.利用生物工程改造生物特性，從而生產(chǎn)人類所需的產(chǎn)品。下列關(guān)于生物工程的相關(guān)知識，敘述正確的是 若要生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因抗病水稻，可將目的基因先導(dǎo)入到大腸桿菌中，再轉(zhuǎn)入水稻細(xì)胞中植物體細(xì)胞雜交，能克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，培育出的新品種一定不是單倍體基因治療主要是對具有缺陷的體細(xì)胞進(jìn)行全面修復(fù)利用基因突變原理培育成生產(chǎn)人干擾素的酵母菌利用基因工程手段培育成生產(chǎn)人胰島素的大腸桿菌利用細(xì)胞工程技術(shù)培育成生產(chǎn)單克隆抗體的細(xì)胞系A(chǔ). B. C. D. 答案：B26.下列關(guān)于生物工程中常見的幾種酶的敘述，正確的是 ADNA連接酶可把目的基因與載

14、體的黏性末端的堿基黏合，形成重組DNAB限制性核酸內(nèi)切酶將一個DNA分子片段切成兩個片段需消耗兩個水分子CTaq酶是用PCR儀對DNA分子擴(kuò)增過程中常用的一種耐高溫的DNA連接酶D纖維素酶和果膠酶處理植物細(xì)胞獲得原生質(zhì)體，便于植物雜交育種答案：B二、簡答題1下圖為一種限制酶切割DNA分子示意圖。請回答問題：(1)這種限制酶的切點(diǎn)是_，形成_個_末端，該末端的特點(diǎn)是 。(2)從題干中可知限制性核酸內(nèi)切酶識別序列的特點(diǎn)是 (3)如果G發(fā)生突變，可能發(fā)生 。答案：(1)G和A之間2黏性堿基序列互補(bǔ)(2)只能識別某種特定的核苷酸序列(3)限制酶不能識別切割位點(diǎn)2科學(xué)家通過基因工程培育抗蟲棉時，需要從蘇

15、云金芽孢桿菌中提取出抗蟲基因，“放入”棉花的細(xì)胞中與棉花的DNA結(jié)合起來并發(fā)揮作用，請回答下列有關(guān)問題：（1）從蘇云金芽孢桿菌中切割抗蟲基因所用的工具是_ _，此工具主要存在于_中，其特點(diǎn)是_ _。（2）蘇云金芽孢桿菌一個DNA分子上有許多基因，獲得抗蟲基因常采用的方法是“鳥槍法”。具體做法是：用_酶將蘇云金芽孢桿菌的_切成許多片段，然后將這些片段_ _，再通過_轉(zhuǎn)入不同的受體細(xì)胞，讓它們在各個受體細(xì)胞中大量_，從中找出含有目的基因的細(xì)胞，再用一定的方法把_分離出來。（3）進(jìn)行基因操作一般要經(jīng)過的四個步驟是_、_、_、_。2（1）限制酶 微生物 一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列，并在特定

16、的位點(diǎn)切割（2）限制性內(nèi)切 DNA 分別與運(yùn)載體結(jié)合 運(yùn)載體 復(fù)制 帶有目的基因的DNA片段（3）提取目的基因 目的基因與運(yùn)載體結(jié)合 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 目的基因的檢測和表達(dá)3.根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理和材料用具，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)確定細(xì)菌質(zhì)粒的抗菌素基因所控制的抗菌素的類別。實(shí)驗(yàn)原理：作為運(yùn)載體的質(zhì)粒，需要有標(biāo)記基因，這一標(biāo)記基因是抗菌素抗性基因。有抗性基因的質(zhì)粒可用作運(yùn)載體。材料用具：青霉素、四環(huán)素各10萬單位溶液，菌種試管，滅菌的含細(xì)菌培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，酒精燈，接種環(huán)，一次性注射器，無菌水，恒溫箱方法步驟：第一步：取3個含培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，分別編號為1、2、3號，用三支注射器分別向3個培養(yǎng)基中注入1ml無菌水

17、，青霉素液、四環(huán)素液，并使之均勻分布之整個培養(yǎng)基表面。第二步： 。第三步： 。結(jié)果預(yù)期： 。答案：第二步：將接種環(huán)在酒精燈上灼燒，在酒精燈旁用接種環(huán)挑取等量菌種，分別培養(yǎng)在三個不同的培養(yǎng)基上，置于恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)一段時間。第三步：將接種后的培養(yǎng)基放在37的恒溫箱中培養(yǎng)24小時。預(yù)期結(jié)果：1號培養(yǎng)基內(nèi)細(xì)菌正常生長，2、3號內(nèi)的細(xì)菌死亡，說明細(xì)菌無抗青霉素基因，無抗四環(huán)素基因；1、2號培養(yǎng)基內(nèi)細(xì)菌正常生長，3號培養(yǎng)基內(nèi)細(xì)菌死亡，說明細(xì)菌有抗青霉素基因，無抗四環(huán)素基因；1、3號培養(yǎng)基內(nèi)細(xì)菌正常生長，2號培養(yǎng)基內(nèi)細(xì)菌死亡，說明細(xì)菌質(zhì)粒無抗青霉素基因，有抗四環(huán)素基因；1、2、3號培養(yǎng)基內(nèi)細(xì)菌都正常生長，說

18、明細(xì)菌質(zhì)粒既有抗青霉素基因，又有抗四環(huán)素基因。4.下圖為培育轉(zhuǎn)基因小鼠的部分過程示意圖。請回答下列問題：外源基因A細(xì)胞移植10-30個細(xì)胞到假孕母體內(nèi)的輸卵管中斷尾分離DNA檢測外源基因（1）若需在短時間內(nèi)獲得較多的外源基因，通常采用 技術(shù)。（2）圖中的A細(xì)胞通常為 細(xì)胞，將外源基因?qū)朐摷?xì)胞常用的方法是 。（3）仔鼠出生后可用其尾巴進(jìn)行DNA檢測，通過 方法，檢測出攜帶外源基因的小鼠。至于外源基因是否合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)，可從轉(zhuǎn)基因小鼠中提取蛋白質(zhì)，并用相應(yīng)的抗體進(jìn)行 雜交，若有雜交帶出現(xiàn)，則表明小鼠體內(nèi)的外源基因 。（4）在外源基因?qū)胄∈蟮腁細(xì)胞時，外源基因可能隨機(jī)地插入到該細(xì)胞的DNA中。

19、這些細(xì)胞有的能發(fā)育成轉(zhuǎn)基因小鼠，有的卻死亡。請分析外源基因插入后導(dǎo)致有些A細(xì)胞死亡的最可能原因 。（1）PCR （2）受精卵 顯微注射法 （3）DNA分子雜交 抗原抗體 已表達(dá) （4）外源基因的插入使受精卵內(nèi)生命活動必需的某些基因不能正常表達(dá)（2分）5.大腸桿菌與人類的生產(chǎn)生活密切相關(guān)。據(jù)圖表回答下列有關(guān)問題：圖：利用lacZ基因失活篩選重組質(zhì)粒示意圖（1）科研人員用放射線處理某大腸桿菌獲得兩個突變株A和B，然后對A和B進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如上表。突變株A不能在一般培養(yǎng)基上生長的直接原因是_。將突變株A和B混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中，卻能正常生長的最可能原因是_。（2）根據(jù)上表可知，營養(yǎng)物質(zhì)甲、乙

20、對突變株A、B來說屬于 （成分）（3）如圖是利用lacZ基因的插入失活篩選重組質(zhì)粒示意圖。大腸桿菌pUC118質(zhì)粒的某限制酶唯一酶切序列位于該質(zhì)粒的lacZ基因中。若lacZ基因完整，便可表達(dá)出b-半乳糖苷酶，并能將培養(yǎng)基中含有的IPTG和X-gal水解成藍(lán)色，形成藍(lán)色菌落；若lacZ基因中插入了外源基因，帶有pUC118質(zhì)粒的大腸桿菌便不能表達(dá)b-半乳糖苷酶，將形成白色菌落；pUC118還攜帶了氨芐青霉素抗性基因。據(jù)此可知，作為受體的大腸桿菌應(yīng) ，以便篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。圖中獲取人體基因時所用到的酶是 。試管中必需加入的酶是 。取用氯化鈣溶液處理（增加其細(xì)胞壁的通透性）過的受體

21、大腸桿菌，置于試管中，并加入 。（4）圖中的選擇培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機(jī)鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)加入_ _等物質(zhì)，用以篩選導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。（5）將上述處理后的大腸桿菌置于圖中選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以檢測受體大腸桿菌是否導(dǎo)入重組質(zhì)粒，請預(yù)測菌落的顏色，并分析結(jié)果： 。 ?！敬鸢浮浚?）突變株A中缺乏合成營養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶使甲不能合成 B可以提供A生長需要營養(yǎng)物質(zhì)甲，A可以提供B生長需要的營養(yǎng)物質(zhì)乙 （2）生長因子 （3）不含氨芐青霉素抗性基因（或?qū)Π逼S青霉素敏感） 限制酶 DNA連接酶 在試管中制備好的DNA （4）IPTG和X-gal、氨芐青霉素 （

22、5）如果長出藍(lán)色菌落，說明自連的運(yùn)載體pUC118質(zhì)粒已轉(zhuǎn)入受體菌，但目的基因沒有接入運(yùn)載體（或說明重組質(zhì)粒沒導(dǎo)入受體大腸桿菌） 如果長出白色菌落，說明重組質(zhì)粒已導(dǎo)入受體大腸桿菌6下圖表示利用基因工程培育抗蟲棉的過程，請據(jù)圖回答下列有關(guān)問題：（1）若限制酶的識別序列和切點(diǎn)是GATC，限制酶的識別下列和切點(diǎn)是GGATCC，那么在過程中，應(yīng)用限制酶 切割質(zhì)粒，用限制酶 切割抗蟲基因。過程在 （體內(nèi)/體外）進(jìn)行。（2）將通過過程得到的大腸桿菌涂布在含有 的培養(yǎng)基上，能夠生長說明已導(dǎo)入了普通質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒，反之則說明沒有導(dǎo)入，該培養(yǎng)基從功能方面屬于 培養(yǎng)基。（3）重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是 。（4）

23、經(jīng)篩選分析，該植株細(xì)胞中含有一個攜帶抗蟲基因的DNA片段，因此可以把它看作是雜合子。理論上，該轉(zhuǎn)基因植株自交產(chǎn)生的F1代中，仍具有抗蟲特性的植株占總數(shù)的 。（5）過程所用技術(shù)稱為 ，從遺傳學(xué)角度來看，根本原因是根細(xì)胞具有 。6（1） （和） 體外 （2）四環(huán)素 選擇 （3）大量復(fù)制目的基因（抗蟲基因）（4）3/4 （5）植物組織培養(yǎng) 發(fā)育成完整個體的全部遺傳物質(zhì)7.抗旱植物體內(nèi)的抗旱基因?yàn)镽，旱敏基因?yàn)閞。研究表明，多數(shù)抗旱性農(nóng)作物能通過細(xì)胞代謝，產(chǎn)生一種代謝產(chǎn)物，調(diào)節(jié)根部細(xì)胞內(nèi)的滲透壓，此代謝產(chǎn)物在葉肉細(xì)胞內(nèi)很難找到。（1）抗旱性農(nóng)作物的葉肉細(xì)胞內(nèi)難以找到與抗旱有關(guān)的代謝產(chǎn)物的原因是 。（2

24、）現(xiàn)已制備足夠多的R探針和r探針，通過探針來檢測某植物相關(guān)的基因型。請據(jù)圖分析回答：某植物總DNAA B C擴(kuò)增處理R或r基因單鏈DNA轉(zhuǎn)移到濾膜上與濾膜上的探針進(jìn)行DNA分子雜交R探針r探針在濾膜上形成的雜交斑圖中擴(kuò)增基因常用的方法是 。若已提取到某抗旱植物Rr的葉肉細(xì)胞總DNA， （能或不能）以DNA為模板直接擴(kuò)增抗旱基因，擴(kuò)增過程中尋找抗旱基因的位置依靠 。圖中處理基因獲取單鏈DNA常用的方法有 。濾膜上DNA分子雜交發(fā)生在 兩者之間。若被檢植物只發(fā)生A現(xiàn)象，則被檢植物的基因型為 。7.（1）基因選擇性表達(dá) （2）PCR技術(shù) 能 引物 解旋酶處理或加熱 探針與R或r基因 RR 8.為實(shí)現(xiàn)

25、目的基因與載體結(jié)合，以便在大腸桿菌中大量表達(dá)相應(yīng)的蛋白質(zhì)，研究人員進(jìn)行了如圖所示操作。請分析回答下列問題： （1）將_同時用BamH I切割并混合，加入_進(jìn)行連接，再與大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞混合，最后，將混合物接種在含有_的平板培養(yǎng)基上。（2）切割后的載體用堿性磷酸酶處理，除去末端的5磷酸，可防止載體自我連接，目的基因片段不用堿性磷酸酶處理，仍然能與用堿性磷酸酶處理過的載體連接。在5組平板培養(yǎng)基上接種了不同操作的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，如下表所示。組別平板培養(yǎng)基上接種的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞結(jié)果（菌落數(shù)）1未進(jìn)行操作（只接種大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞）02導(dǎo)入未切割的載體10003導(dǎo)入切割并連接的載體4354導(dǎo)入

26、切割后用堿性磷酸酶處理并連接的載體255導(dǎo)入切割后用堿性磷酸酶處理，并與目的基因連接的載體34 第1組實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖谴_認(rèn)_是否符合實(shí)驗(yàn)要求。第2組平板培養(yǎng)基菌落數(shù)目最大，說明大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞能夠_。第3組實(shí)驗(yàn)用來檢驗(yàn)_酶是否具有活性。第4組實(shí)驗(yàn)用來檢驗(yàn)_酶是否具有活性。實(shí)驗(yàn)中用堿性磷酸酶處理載體可以降低僅有載體的菌落數(shù)，增加攜帶_ _的菌落比例。8.（1）含目的基因的DNA與載體（或質(zhì)粒）（2分） DNA連接酶（1分） 氨芐青霉素（2分）（2）大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞和平板培養(yǎng)基（2分） 攝取載體（或質(zhì)粒、外源DNA）（2分） DNA連接酶和限制（2分） 堿性磷酸（2分） 重組質(zhì)粒（或重組DNA）（2

27、分）9.圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列。現(xiàn)有Msp I、BzmH I、Mbo I、Sma I4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。請回答下列問題 (1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由 連接。(2)若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是 末端，其產(chǎn)物長度為 。(3)若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T-A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對應(yīng)的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，產(chǎn)物中共有 種不同

28、長度的DNA片段。(4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是 。在導(dǎo)人重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加 的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是 。9答案（1）脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖（2）平 537bp、790bp、661bp（3）4 （4）BamH I 抗生素B 同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向鏈接10將動物致病菌的抗原基因?qū)腭R鈴薯制成植物疫苗，飼喂轉(zhuǎn)基因馬鈴薯可使動物獲得免疫力。以下是與植物疫苗制備過程相關(guān)的圖和表。請根據(jù)以上圖

29、表回答下列問題。（1）在采用常規(guī)PCR方法擴(kuò)增目的基因的過程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA聚合酶，其最主要的特點(diǎn)是 。（2）PCR過程中退火（復(fù)性）溫度必須根據(jù)引物的堿基數(shù)量和種類來設(shè)定。表1為根據(jù)模板設(shè)計(jì)的兩對引物序列，圖2為引物對與模板結(jié)合示意圖。請判斷哪一對引物可采用較高的退火溫度？_。（3）圖1步驟所用的DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列是否有專一性要求？ 。（4）為將外源基因轉(zhuǎn)入馬鈴薯，圖1步驟轉(zhuǎn)基因所用的細(xì)菌B通常為 。（5）對符合設(shè)計(jì)要求的重組質(zhì)粒T進(jìn)行酶切，。假設(shè)所用的酶均可將識別位點(diǎn)完全切開，請根據(jù)圖1中標(biāo)示的酶切位點(diǎn)和表2所列的識別序列，對以下酶切結(jié)

30、果作出判斷。采用EcoR和Pst酶切，得到_種DNA片斷。采用EcoR和Sma酶切，得到_種DNA片斷。10答案：（1）耐高溫 2）引物對B （3）否 （4）農(nóng)桿菌 （5）2 111如圖所示，若用兩種識別切割序列完全不同的限制酶E和F從基因組DNA上切下目的基因，并將之取代質(zhì)粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000對堿基)上相應(yīng)的EF區(qū)域 (0.2kb)，形成重組質(zhì)粒pZHZ2。（1）所形成的重組質(zhì)粒pZHZ2_。A既能被E也能被F切開 B能被E但不能被F切開C既不能被E也不能被F切開 D能被F但不能被E切開（2）已知在質(zhì)粒pZHZl中，限制酶G切割位點(diǎn)距限制酶E切割位點(diǎn)08kb，限制酶H切

31、割位點(diǎn)距限制酶F切割位點(diǎn)O5kb。若分別用限制酶G和H酶切兩份重組質(zhì)粒pZHZ2樣 品，據(jù)表4所列酶切結(jié)果判斷目的基因的大小為 kb；并將目的基因內(nèi)部的限制酶G和H切割位點(diǎn)標(biāo)注在圖19中。（3）若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，則需將重組質(zhì)粒pZHZ2導(dǎo)入至山羊的_細(xì)胞中。若pZHZ2進(jìn)入細(xì)胞后插入在一條染色體DNA上，那么獲得轉(zhuǎn)基因純合子山羊的方式是_ _。（4）上述目的基因模板鏈中的。TGA序列對應(yīng)一個密碼子，翻譯時識別該密碼子的tRNA上相應(yīng)的堿基序列是_。一般而言，一個核糖體可同時容納_分子的tRNA。（5）下列四幅圖中能正確反映目的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物內(nèi)部結(jié)構(gòu)的是_。TSS：轉(zhuǎn)錄

32、起始位點(diǎn)，TTS：轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)，STC：起始密碼子，SPC：終止密碼子【答案】（1）A（2）1.2 見右圖 （3）受精卵 轉(zhuǎn)基因山羊間相互交配 （4）UGA 2（或3） （5）B中（3端加上一個50200個的多聚腺苷酸序列，即 polyA尾，在5端加上一個7-甲基鳥苷三 磷酸的“帽”結(jié)構(gòu)）12.請回答基因工程方面的有關(guān)問題：（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基本因，其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似（如下圖所示）。圖中引物中為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。從理論上推測，第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占比例為 。在第 輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。（2）設(shè)計(jì)引物是

33、PCR技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。某同學(xué)設(shè)計(jì)的兩組引物（只標(biāo)注了部分堿基序列）都不合理（如上圖），請分別說明理由。第一組： ； 。（3）PCR反應(yīng)體系中含有熱穩(wěn)定DNA聚合酶，下面的表達(dá)式不能反映DNA聚合酶的功能，這是因?yàn)開 。（4）用限制酶EcoRV、MboI單獨(dú)或聯(lián)合切割同一種質(zhì)粒，得到DNA片段長度如下圖（1kb即1000個堿基對），請?jiān)诖痤}卡的指定位置畫出質(zhì)粒上EcoRV、MboI的切割位點(diǎn)。12. （1）15/16 三 （2）引物I和引物II局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對而失效 引物I自身折疊后會出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對而失效 （3）DNA聚合酶只能將單個脫氧核苷酸連續(xù)結(jié)合到雙鏈DNA片段的引物鏈上 （4

34、）見右圖13重疊延伸PCR技術(shù)是一種通過寡聚核苷酸鏈之間重疊的部分互相搭橋、互為模板，通過多次PCR擴(kuò)增，從而獲得目的基因的方法。該技術(shù)在擴(kuò)增較長片段的DNA、不同來源的DNA片段拼接、基因的定點(diǎn)誘變等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。右圖是利用重疊延伸PCR技術(shù)擴(kuò)增某目的基因的過程。其主要設(shè)計(jì)思路是用具有互補(bǔ)配對片段的引物(圖中引物2、引物3)，分別PCR，獲得有重疊鏈的兩種叫A片段，再在隨后的擴(kuò)增反應(yīng)中通過重疊鏈的延伸獲得目的基因。結(jié)合所學(xué)知識，分析下列問題：(1)引物中G+C的含量影響著引物與模板DNA結(jié)合的穩(wěn)定性，引物中G+C的含量越高，結(jié)合穩(wěn)定性 。(2)在第一階段獲得兩種具有重疊片段DNA的

35、過程中，必須將引物1、2和引物3、4置于不同反應(yīng)系統(tǒng)中，這是因?yàn)?。(3)引物1、引物2組成的反應(yīng)系統(tǒng)和引物3、引物4組成的反應(yīng)系統(tǒng)中均進(jìn)行一次復(fù)制，共產(chǎn)生 種雙鏈DNA分子。(4)在引物1、引物2組成的反應(yīng)系統(tǒng)中，經(jīng)第一階段形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過 次復(fù)制。(5)若利用微生物擴(kuò)增該目的基因，其基本步驟包括： 、 、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取目的基因。14.下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點(diǎn)，圈l、圈2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請回答下列問題： （1）一個圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)Sma 切割前后，分別含有 個游離的磷酸基團(tuán)。 （2）若對圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的Sma酶切位點(diǎn)

36、越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越 。 （3）用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用Srna 切割，原因是 。 （4）與只使用EcoR I相比較，使用BamH 和Hind 兩種限制酶同時處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止 。 （5）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入 酶。 （6）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了 。 （7）為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測。14【答案】（1）0、2（2）高（3）Sma會破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因（4）質(zhì)粒和

37、含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化（5）DNA連接（6）鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞 （7）蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)15.蘇云金桿菌(Bt)能產(chǎn)生具有殺蟲能力的毒素蛋白。下圖是轉(zhuǎn)Bt毒素蛋白基因植物的培育過程示意圖(為抗氨芐青霉素基因)，據(jù)圖回答下列問題。 (1)將圖中的DNA用HindIII、BamH I完全酶切后，反應(yīng)管中有 種DNA片段。 (2)圖中表示HindIII與BamH I酶切、DNA連接酶連接的過程，此過程可獲得 種重組質(zhì)粒；如果換用Bst l與BamH l酶切，目的基因與質(zhì)粒連接后可獲得 種重組質(zhì)粒。 (3)目的基因插入質(zhì)粒后，不能影響質(zhì)粒的 。 (4)圖中的Ti質(zhì)粒調(diào)控合成的

38、vir蛋白，可以協(xié)助帶有目的基因的TDNA導(dǎo)入植物細(xì)胞，并防止植物細(xì)胞中 對TDNA的降解。 (5)已知轉(zhuǎn)基因植物中毒素蛋白只結(jié)合某些昆蟲腸上皮細(xì)胞表面的特異受體，使細(xì)胞膜穿孔，腸細(xì)胞裂解，昆蟲死亡。而該毒素蛋白對人類的風(fēng)險相對較小，原因是人類腸上皮細(xì)胞 。 (6)生產(chǎn)上常將上述轉(zhuǎn)基因作物與非轉(zhuǎn)基因作物混合播種，其目的是降低害蟲種群中的 基因頻率的增長速率。15(1)4 (2)2 1 (3)復(fù)制 (4)DNA水解酶 (5)表面無相應(yīng)的特異性受體(6)抗性16下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，圖1中Cmlr表示氯霉素抗性基因，Ner表示新霉素抗

39、性基因。請回答下列問題：(1)將提取的質(zhì)粒與外源DNA分別加入緩沖液中，選用相應(yīng)的限制酶處理時，影響處理效果的外界因素主要是 等(寫出兩點(diǎn))。(2)用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒時，能否使用MspI與BamHI同時切割質(zhì)粒與外源DNA?答： ，原因是 。(3)可選用 (兩種)限制酶同時酶切質(zhì)粒與外源DNA，酶切并連接后可獲得 種含目的基因的重組質(zhì)粒，篩選含有該重組質(zhì)粒的大腸桿菌時，需要在含 的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。(4)研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)CCGG序列在X酶作用下，其內(nèi)部胞嘧啶殘基發(fā)生變化后，MspI仍能識別并切割，但Hpa則不能識別，而BamHI和SmaI對類似變化也十分敏感，KpnI則不敏感。若在含有

40、圖1所示質(zhì)粒和X酶的緩沖液中，同時加入KpnI、Hpa、MspI和SmaI并完全酶切后，則最可能得到 種DNA序列。(5)為了從基因文庫中分離獲取T1噬菌體抗性基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入對T1噬菌體敏感的大腸桿菌，然后將含有該大腸桿菌的菌液分別接種在預(yù)先涂有 的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，從而初步檢測目的基因的表達(dá)。16(1)溫度、pH (2)不能(1分) MspI會切割破壞質(zhì)粒上的兩個標(biāo)記基因(1分)，而BamHI會切割破壞目的基因(1分) (3)KpnI、Smal 2 新霉素 (4) 4 (5)Tl，噬菌體1718右圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性核酸內(nèi)切酶EcoR、BamH的酶切位點(diǎn)，amp

41、R為青霉素抗性基因，tctR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別有包括EcoR、BamH在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖回答：(1)將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒表達(dá)載體分別用EcoR酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進(jìn)行連接后，其中由兩個DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有_、_、_三種。若要從這些連接產(chǎn)物中分離出重組質(zhì)粒，需要對這些連接產(chǎn)物進(jìn)行_。(2)用上述3種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。之后將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是_；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是_。(3)目的基因表達(dá)時，RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點(diǎn)是_，其合成的產(chǎn)物是_。(4)在上述實(shí)驗(yàn)中，為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應(yīng)選用的酶是_。答案：(1