高良姜配方顆粒的制備工藝與質(zhì)量控制

1、    高良姜配方顆粒的制備工藝與質(zhì)量控制作者：葉娟，高文遠(yuǎn)，孫立亞，劉新橋，張鐵軍，陳海霞，王書軍 【摘要】 目的確定高良姜配方顆粒的最佳制備工藝，建立高良姜配方顆粒中桉油精的含量測定 方法 。方法采用水蒸氣蒸餾法提取高良姜藥材中的揮發(fā)油，設(shè)計(jì)L9（34）正交實(shí)驗(yàn)確定最佳揮發(fā)油包合工藝，將水提液濃縮干燥與包合物制成配方顆粒，采用氣相色譜法，F(xiàn)ID檢測器測定配方顆粒中桉油精的含量。結(jié)果將藥材加水10倍量提取5 h，收集提取液和揮發(fā)油。揮發(fā)油最佳包合工藝：揮發(fā)油與-環(huán)糊精比例為19，包合溫度為45 ，包合時(shí)間為1 h。含量測定中回歸方程為y = 2 635

2、 4 x - 0.040 4，r = 0.999 8，平均回收率為100.72 %，RSD為2.58 % (n = 5)。結(jié)論 高良姜配方顆粒的制備工藝穩(wěn)定可行，評價(jià)指標(biāo)可靠、合理。 【關(guān)鍵詞】 高良姜配方顆粒； 桉油精； 揮發(fā)油； 氣相色譜法Abstract：ObjectiveTo optimize the preparation process of Alpinia officiarum formula granules and establish a determination method of eucalyptol in the formula granules. Methods T

3、he  volatile oil was extracted with steamdistillation method and included with cyclodextrin to avoid its volatilization. The granule was prepared by mixing the water extracts, volatile oil and starch. The content of eucalyptol in the granule was determined with the GC method.ResultsThe opt

4、imum extraction condition was as follows: the crude drug was extracted with 10 times amount of water for 5 hours to collect the volatile oil. The optimal inclusion condition selected by the L9（34）orthogonal design was as follows, the ratio of volatile oil to cyclodextrin was 1: 9（ml/g）, the inclusio

5、n time was 1h and the temperature of the inclusion was 45. The regression equation was y = 2 6 354 x0.040 4，r=0.999 8. The average recovery was 100.72% and RSD was 2.58%. ConclusionThe preparation process of Alpinia officiarum formula granules is stable and feasible. The GC method for quality contro

6、l is accurate and suitable.Key words：Alpinia officiarum; Formula granules; Eucalyptol; Volatile oil; GC高良姜是姜科山姜屬植物高良姜Alpinia officiarum Hance的干燥根莖，主產(chǎn)于福建、 臺(tái)灣 、廣東、廣西、海南、云南等地，具有溫胃散寒、消食止痛的功效，臨床常用于 治療 脘腹冷痛、胃寒嘔吐、噯氣吞酸等病癥1。 現(xiàn)代 藥理 研究 表明高良姜具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛止嘔2、抗?jié)?、利膽、抗腹瀉3、抗菌4、抗氧化5、抗癌6等作用。高良姜配方顆粒是高良姜飲片經(jīng)提取、濃縮、干燥、制粒等工序制成的

7、單味中藥配方顆粒劑。將傳統(tǒng)的高良姜飲片改變?yōu)轭w粒劑，可以有效地去除植物纖維等無活性成分，增加穩(wěn)定性，易儲(chǔ)存，服用方便。配方顆粒以其生產(chǎn)自動(dòng)化，生產(chǎn)條件恒定，人為因素小等優(yōu)勢被廣泛 應(yīng)用 于臨床。如黃連配方顆粒，無論批號是否相同，其鹽酸小檗堿的含量都在測定要求范圍之內(nèi)7。 目前 ，關(guān)于高良姜配方顆粒的制備工藝和含量測定未見報(bào)道，本文采用氣相色譜法控制顆粒中的桉油精的含量?，F(xiàn)報(bào)道如下。1 儀器與試藥Agilent 6820氣相色譜儀（美國安捷倫公司）；KQ218型超聲清洗器昆山市超聲儀器有限公司；DZG401電熱真空干燥箱天津天宇實(shí)驗(yàn)儀器公司；Sartorius BS210S型 電子 天平天津奧特

8、賽恩斯儀器有限公司。高良姜飲片（由天津中藥飲片廠提供），符合 中國 藥典2005年版要求；桉油精對照品（批號110748200507）購于中國藥品生物制品檢定所。正己烷，環(huán)已酮為色譜純，乙醇、環(huán)糊精，淀粉等其它試劑均為 分析 純。2 方法與結(jié)果2.1 高良姜配方顆粒揮發(fā)油提取工藝取高良姜200 g，加10倍量水提取，用揮發(fā)油測定器收集（輕油法）揮發(fā)油，每隔1 h量取揮發(fā)油的體積，考察提取時(shí)間與出油率的關(guān)系，結(jié)果見表1。從表1中可知，前5 h出油已達(dá)總量的95.1 %。因此提取時(shí)間為5 h。表1 提取時(shí)間的考察（略）2.2 高良姜揮發(fā)油的環(huán)糊精的包合2.2.1 揮發(fā)油包合工藝正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)

9、果表明，揮發(fā)油與環(huán)糊精的比例（A）、包合溫度（B）、包合時(shí)間（C）是 影響 包合結(jié)果的主要因素。在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，以包合物的產(chǎn)率和揮發(fā)油的包合率為指標(biāo)，對包合工藝的各參數(shù)進(jìn)行考察，因素水平設(shè)計(jì)見表2。表2 因素水平（略）2.2.2 揮發(fā)油包合物產(chǎn)率的考察稱取一定量的環(huán)糊精，按照正交實(shí)驗(yàn)的各因素水平搭配順序加入一定量的蒸餾水，加熱使溶解制成2%的溶液，于恒溫磁力攪拌器上攪拌至規(guī)定的溫度，緩緩滴加揮發(fā)油乙醇溶液，邊加邊攪拌至規(guī)定時(shí)間，放冷，置冰箱冷藏24 h，抽濾，繼用10 ml石油醚(3060 )洗滌，40 干燥3 h，研碎得包合物， 計(jì)算 包合物產(chǎn)率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。由表4方

10、差分析可知，揮發(fā)油與環(huán)糊精的比例對包合物產(chǎn)率的顯著性影響因素，而包合溫度和包合時(shí)間對包合物產(chǎn)率無顯著影響。2.2.3 揮發(fā)油包合率的考察為了考察不同條件下包合效果的優(yōu)劣，以揮發(fā)油包合率為指標(biāo)，分析包合產(chǎn)物中所含有的揮發(fā)油量。揮發(fā)油包合率(V1+V2)/V×100% ；V1從包合物中回收得到的揮發(fā)油量（ml）；V2空白回收實(shí)驗(yàn)中揮發(fā)油的損失量（ml）；V揮發(fā)油投料量（本實(shí)驗(yàn)中為1 ml）。由方差分析表4，可看出揮發(fā)油與環(huán)糊精的比例是影響揮發(fā)油包合率的顯著性因素，包合溫度和包合時(shí)間對揮發(fā)油包合率則無顯著性影響。表3 正交實(shí)驗(yàn)L9(34)方案和數(shù)據(jù)處理 %表4 方差分析由包合物的產(chǎn)率和揮發(fā)

11、油的包合率兩項(xiàng)分析指標(biāo)可以看出，設(shè)定適當(dāng)?shù)膿]發(fā)油與環(huán)糊精的比例是包合產(chǎn)物質(zhì)量優(yōu)劣的重要因素。根據(jù)包合率的直觀分析可見A3均值遠(yuǎn)高于A2和A1，根據(jù)包合物收得率的直觀分析可見A2均值高于A3和A1，綜合考慮，選擇揮發(fā)油與環(huán)糊精比例為19最為合適。包合溫度和包合時(shí)間都是非顯著性影響因素，結(jié)合直觀分析和成本選擇B2C1。因此，最佳包合工藝為A3B2C1。為驗(yàn)證最佳工藝，重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，得到平均包合率為89.9 %，平均揮發(fā)油包合率為88.8 %，證明上述包合工藝可靠。2.3 高良姜配方顆粒的制備以高良姜配方顆粒優(yōu)選后的工藝，即取高良姜飲片500 g，加10倍量水，微沸提取5 h，同時(shí)收集提取液和揮發(fā)油

12、。對揮發(fā)油按照最佳包合工藝包合、干燥、研碎，備用。將提取液減壓濃縮得干浸膏，真空干燥，按照干浸膏和淀粉質(zhì)量比為11的比例加入輔料，混勻，加入75%乙醇適量制成軟材，軟材過14號篩制成顆粒，60下真空干燥24 h。然后再按照藥材中原有的比例添加揮發(fā)油包合物，混勻，即得高良姜配方顆粒。2.4 高良姜配方顆粒的定性鑒別2.4.1 供試品溶液的制備取高良姜配方顆粒約0.5 g，精密稱定，置揮發(fā)油提取器中加水200 ml，并在揮發(fā)油提取器內(nèi)水液面上加約2 ml正己烷提取2 h，得到含油正已烷定容至5 ml，得供試品溶液。2.4.2 對照藥材溶液的制備取高良姜對照藥材5g，按2.5.4項(xiàng)下“供試品溶液的制

13、備”方法，同法制成對照藥材溶液。2.4.3 陰性對照溶液的制備按照配方顆粒處方比例取淀粉、環(huán)糊精和藥材的水提物浸膏，按供試品溶液制備 方法 進(jìn)行制備，作為陰性對照溶液。2.4.4 薄層層析鑒別按照薄層色譜法（附錄B）試驗(yàn)，吸取陰性對照品溶液，揮發(fā)油，上述供試品溶液和對照藥材溶液各10 l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯醋酸乙酯（191）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)得位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。2.5 高良姜配方顆粒的含量測定2.5.1 氣相色譜條件色譜柱：HP5彈性石英毛細(xì)管(30 m×0.32

14、mm，0.25 m)；程序升溫條件：初始溫度50，保持1 min，以10·min 升至180，再以20 ·min 升至210，保持1 min；載氣N2；進(jìn)樣口溫度為220，F(xiàn)ID檢測器溫度250，進(jìn)樣1.4 l。2.5.2 對照品溶液制備精密稱定桉油精對照品，用正己烷溶解，制成14.096 mg/ml的溶液。2.5.3 內(nèi)標(biāo)溶液的制備精密稱定環(huán)已酮，用正己烷溶解，制成15.654 mg/ml的溶液。2.5.4 供試品溶液的制備取高良姜配方顆粒約0.5 g，精密稱定，置揮發(fā)油提取器中加水200 ml，并在揮發(fā)油提取器內(nèi)水液面上加約2 ml正已烷提取2 h，置含油正已烷溶液于容

15、量瓶中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液1.10 ml，定容至10 ml，搖勻，作為供試品溶液。2.5.5 線性關(guān)系考察分別取對照品溶液100, 140, 180, 220, 260 l，各加內(nèi)標(biāo)液150 l，定容至5 ml，進(jìn)行氣相測定。以桉油精量為橫坐標(biāo)，以桉油精峰面積/內(nèi)標(biāo)物蜂面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y = 2 6354x -0.040 4，r= 0.999 8。2.5.6 精密度實(shí)驗(yàn)取線性關(guān)系中的第5份樣品連續(xù)進(jìn)樣5次，測得RSD為 0.76 % (n = 5)。校正因子平均值為0.828 0。2.5.7 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)精密稱取同一批樣品5份，按供試品溶液的制備方法進(jìn)行操作，連續(xù)進(jìn)樣，

16、測得RSD 為0.845%。2.5.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密稱取一份樣品，按供試品溶液的制備方法平行操作，每隔2 h進(jìn)樣，連續(xù)8 h，結(jié)果測得RSD為1.59%。2.5.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn)以2.5.4項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備5份高良姜配方顆粒樣品溶液，加入一定濃度的對照品溶液及內(nèi)標(biāo)液，定容，測定，測得平均加樣回收率為100.72%，RSD為2.58% (n = 5)。表5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)（略）2.5.10 高良姜配方顆粒含量測定分別精密稱取3批高良姜配方顆粒，照2.5.4項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別測定， 計(jì)算 桉油精含量。結(jié)果見表6。表6 高良姜配方顆粒含量測定結(jié)果（略）3 討論3.1 本制

17、劑與傳統(tǒng)湯劑相比較的優(yōu)勢高良姜配方顆粒的主要有效成分為揮發(fā)油類，故按揮發(fā)油的提取方法進(jìn)行提取，而中醫(yī)傳統(tǒng)湯劑以水提液口服，配方顆粒作為中藥湯劑改革的一種形式一方面要發(fā)揮 現(xiàn)代  科學(xué) 技術(shù)的優(yōu)勢，另一方面也要保持與傳統(tǒng)湯劑的一致性，故先將提完揮發(fā)油的水溶液濃縮干燥，制粒，再按照藥材中原有的比例添加揮發(fā)油包合物，混勻，達(dá)到兼顧水溶性成分和揮發(fā)油的目的。3.2 揮發(fā)油的包合條件選擇在考察揮發(fā)油的包合條件時(shí)，分別以包合率和包合物產(chǎn)率為指標(biāo)時(shí)得到的最佳條件并不一致，但考慮到不一致的條件是非顯著性 影響 因素的各個(gè)水平，而且從直觀 分析 可以看出它們差別很小，故主要從 經(jīng)濟(jì) 成本方面對非顯著性影響因素的水平進(jìn)行了選擇。本實(shí)驗(yàn)方法簡便可行，重現(xiàn)性好，可作為控制產(chǎn)品質(zhì)量的方法?！?參考  文獻(xiàn) 】1國家藥典委員會(huì)， 中國 藥典S.北京：化學(xué) 工業(yè) 出版社，2005：202.2Daitetsu shin,Kauru Kinoshita,Kiyotaka Koyama, et al. Antiemetic principles of Alpinia officiarum. Kunio TJ.J Nat Prod, 2002，65：1 315