載脂蛋白E基因啟動(dòng)子多態(tài)性與年齡相關(guān)性黃斑變性的關(guān)系

1、載脂蛋白E基因啟動(dòng)子多態(tài)性與年齡相關(guān)性黃斑變性的關(guān)系                        【摘要】  目的：探討載脂蛋白E(APOE)基因啟動(dòng)子(_219G/T)多態(tài)性與年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)發(fā)病危險(xiǎn)性的關(guān)系。方法：用聚合酶鏈反應(yīng)_限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性分析法對(duì)AMD組(50例)和對(duì)照組(95例)的APOE _219G/T基因型做出鑒

2、定。結(jié)果：兩組間不存在_219G/T基因型頻率分布的差異(P>039)。結(jié)論：APOE基因_219G/T多態(tài)性與AMD發(fā)病危險(xiǎn)性無(wú)關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  年齡相關(guān)性黃斑變性 載脂蛋白E 多態(tài)性    Relationship between the Apolipoprotein E Promoter Polymorphisms and the Risk of Age_related Macular DegenerationSHAO Yun_liang1，QIN Yan_li1，YI Xiao_guang1，SONG Yue1，YAN Yi_nong2（

3、1STU/CUHK Joint Shantou International Eye Center，Shantou 515041，China;2Zhanjiang ALLAD Eye Center， Zhanjiang 524043，China）    AbstractObjective: To study the relationship between apolipoprotein E(APOE)promoter(_219G/T)polymorphisms and the risk of age_related macular degeneration(AMD)

4、. Methods: APOE _219G/T genetype in AMD group(50 cases)and control group(95 persons)was identified by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism genotyping technique. Results: No significant difference was found between two groups on the distribution of APOE _219G/Tgenoty

5、pe. Conclusion: The APOE _219G/T polymorphisms do not contribute to AMD risk.    Key Wordsage_related macular degeneration；apolipoprotein E；polymorphism    在西方發(fā)達(dá)國(guó)家，年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)是導(dǎo)致老年人視力嚴(yán)重?fù)p害甚至失明的一種常見(jiàn)疾病，病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)它的發(fā)生與異常脂肪代謝及轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)。遺傳學(xué)的研究證實(shí)它的發(fā)生與載脂蛋白E(APOE)基因密切相關(guān)1，2。APOE蛋白是神經(jīng)系

6、統(tǒng)重要的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，APOE基因及基因啟動(dòng)子(_219G/T)具有多態(tài)性,啟動(dòng)子的突變顯著降低APOE基因的表達(dá)并進(jìn)而影響APOE蛋白的功能3，4。目前還未見(jiàn)有關(guān)APOE基因啟動(dòng)子多態(tài)性與AMD發(fā)病危險(xiǎn)性關(guān)系的報(bào)道，本研究旨在用聚合酶鏈反應(yīng)_限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR_RFLP)分析法探討APOE基因啟動(dòng)子多態(tài)性與AMD發(fā)生危險(xiǎn)性的關(guān)系。    1資料與方法    11一般資料根據(jù)AMD診斷標(biāo)準(zhǔn)5選取AMD 50例(AMD組，男性22例，女性28例。年齡最小55歲，最大78歲，平均65歲)和對(duì)照組95例(來(lái)自排除眼底病的白內(nèi)障患者及其

7、他眼科患者。男性45例，女性50例。 年齡最小58歲， 最大82歲， 平均68歲)。    12 方法抽兩組空腹靜脈血3mL，-80凍存。用DNA試劑盒(QIAamp DNA mini kits)從200L血中提取DNA。用引物(正向：5_AGAATGGAGGAGGGTGTCCG_3，反向：5_ACTTGTCCAATTATAGGGCTCC_3)擴(kuò)增包括_219G/T位點(diǎn)的目標(biāo)DNA片段，PCR反應(yīng)條件：變性溫度94，40s，退火溫度58，60s，延伸溫度72，40s共35個(gè)循環(huán)。用Nad酶對(duì)包含_219G/T位點(diǎn)堿基片段進(jìn)行酶切，溫度37，時(shí)間3h。用質(zhì)

8、量分?jǐn)?shù)12%的聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)對(duì)酶切產(chǎn)物進(jìn)行電泳，電壓250mV，時(shí)間40min。溴乙啶染色凝膠5min，紫外線燈下觀察并拍照。    2 結(jié)果   兩組間不存在APOE基因 _219G/T基因型頻率分布的差異(2=185，df=2，P>039)(表1)。兩組PCR_RFLP檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1。表1兩組APOE基因 _219G/T多態(tài)性分布                 &

9、#160;              3 討論    AMD是涉及視細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、脈絡(luò)膜的一種疾病。彌散性drusen、軟性drusen、脈絡(luò)膜新生血管、盤(pán)狀瘢痕是AMD的4個(gè)病理特征6。臨床上Drusen被看作是AMD發(fā)展的一種風(fēng)險(xiǎn)因子，用組織化學(xué)的方法也證實(shí)drusen中有磷脂和中性脂肪的存在。APOE基因位于19q132，含4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子，共有3個(gè)(2、3和4)等位基因，并由此產(chǎn)生6種基因型。APOE是含有29

10、9個(gè)氨基酸的磷脂糖蛋白,是組成脂蛋白的重要成分，其在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、維持膽固醇平衡方面起著重要作用，同時(shí)也參與神經(jīng)系統(tǒng)的正常生長(zhǎng)和損傷后的修復(fù)過(guò)程。研究顯示，不同APOE基因型與AMD發(fā)生危險(xiǎn)性之間密切相關(guān)，APOE基因的2對(duì)AMD發(fā)生有促進(jìn)作用,而4對(duì)AMD發(fā)生有保護(hù)作用1，2。研究還發(fā)現(xiàn)APOE基因啟動(dòng)子的3個(gè)(_491A/T,_427T/C,_219G/T)位點(diǎn)具有多態(tài)性，而APOE基因啟動(dòng)子堿基的突變可顯著降低APOE基因的轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而影響APOE蛋白的功能3_4。本文探討了APOE基因 _219G/T位點(diǎn)多態(tài)性與AMD發(fā)生危險(xiǎn)性，結(jié)果提示無(wú)論GG、GT還是TT，兩組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，AP

11、OE基因的啟動(dòng)子區(qū)域_219G/T多態(tài)性可能并不參與構(gòu)成AMD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，_219G/T的多態(tài)性對(duì)AMD的發(fā)生可能無(wú)關(guān)。這與APOE基因啟動(dòng)子的多態(tài)性在老年性癡呆癥發(fā)生、發(fā)展中起不同作用7，同時(shí)我們的結(jié)果也間接印證了Haddad等8的觀點(diǎn)，即APOE基因可能在AMD的發(fā)病機(jī)制中起次要作用。AMD的發(fā)生與環(huán)境因素(吸煙，飲食習(xí)慣、慢性光損害)及遺傳因素(APOE,ABCR和ARMD1基因)有關(guān)。最近的研究也證實(shí)補(bǔ)體因子H、PLEK_HA1/LOC387715、BF/C2區(qū)域可能是導(dǎo)致AMD發(fā)生的主要區(qū)域810，未來(lái)我們將就這些新發(fā)現(xiàn)的基因及位點(diǎn)在AMD發(fā)病機(jī)制中的作用作進(jìn)一步的探討。 

12、【參考文獻(xiàn)】  1Klaver CC， Kliffen M， van Duijn CM， et al. Genetic association of apolipoprotein E with age_related macular degenerationJ. Am J Hum Genet， 1998， 63(1)： 200-206.2Souied EH， Benlian P， Amouyel P， et al. The epsilon4 allele of the apolipoprotein E gene as a potential protective factor for

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