肝癌組織及血清中細(xì)胞間粘附分子-1表達(dá)的研究

1、    肝癌組織及血清中細(xì)胞間粘附分子-1表達(dá)的研究        【摘要】 目的 研究細(xì)胞間粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)作為判斷肝癌發(fā)展程度及轉(zhuǎn)移狀態(tài)指標(biāo)的可能性。方法 以免疫組化的方法檢測(cè)ICAM-1在肝癌組織和正常肝組織中的表達(dá)，觀察了ICAM-1表達(dá)在細(xì)胞的定位。以點(diǎn)免疫印跡法測(cè)定不同患者血清和不同肝組織中ICAM-1的表達(dá)。分析ICAM-1表達(dá)與腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、腫瘤特性的關(guān)系。結(jié)果 肝癌細(xì)胞ICA

2、M-1表達(dá)陽(yáng)性（陽(yáng)性率為80.0%），主要分布在細(xì)胞膜，正常肝細(xì)胞則為陰性。肝癌患者血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1(sICAM-1)水平高于正常人(P<0.01)及肝良性腫瘤患者(P<0.05)，肝癌伴轉(zhuǎn)移者高于無(wú)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。肝癌組織中ICAM-1含量明顯高于癌旁組織(P<0.01)及正常肝組織(P<0.01)，而與腫瘤大小及有無(wú)包膜無(wú)關(guān)(P>0.05)；轉(zhuǎn)移組肝癌中ICAM-1的表達(dá)明顯高于非轉(zhuǎn)移組(P<0.05)，兩組癌旁組織中ICAM-1表達(dá)無(wú)差別(P>0.05)。結(jié)論 血清及組織中ICAM-1的水平在一定程度上可以反映肝癌發(fā)展程

3、度及轉(zhuǎn)移狀態(tài)，有可能作為預(yù)測(cè)肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的指標(biāo)?！娟P(guān)鍵詞】 肝癌 腫瘤轉(zhuǎn)移 細(xì)胞間粘附分子1STUDY ON THE RELATIONSHIP BETWEEN INTERCELLULAR ADHESION MOLECULE-1 AND LIVER CANCER METASTASIS Sun Jingjing, Zhou Xinda, Feng Jiuxian, et al. Liver Cancer Institute Zhongshan Hospital, Shanghai Medical University, Shanghai 200032【Abstract】 Objective To

4、study the relationship between intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and liver cancer metastasis and to search an index that can reflect the growth and the metastasis of liver cancer. Methods ICAM-1 expression in fresh tissue of normal liver and liver cancer was examined by immunoperoxidase sta

5、ining. Serum soluble intercellular adhesion molecule-1 (sICAM-1) from patients with liver cancer, benign tumor and normal control, and the expression of ICAM-1 in hepatoma, tumor surrounding liver and normal liver were semi-quantitatively analyzed by Dot immuno-blot. Results The expression of ICAM-1

6、 was positive (80.0%, 36/45) in the cell of hepatoma, meanwhile was negative in normal. SICAM-1 content was the highest in patients with liver cancer comparing with that in patients with benign tumor (P<0.05) or normal control(P<0.01), and was higher in patients with metastasis than those with

7、out metastasis (P<0.05). Tissue ICAM-1 was higher in liver cancer than in tumor surrounding liver (P<0.01) and in normal tissue (P<0.01), and was also higher in liver cancer with metastasis than in liver cancer without metastasis(P>0.05). Conclusion ICAM-1 could be a marker of the stage

8、and metastasis of liver cancer and may play a role in the biological character of hepatoma cell.【Key words】 Liver cancer Tumor metastasis Intercellular adhesion molecule-1肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移是術(shù)后復(fù)發(fā)和影響預(yù)后的主要原因之一，與細(xì)胞間異嗜粘附有關(guān)的細(xì)胞間粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)在此過(guò)程中起重要作用1。資料與方法一、臨床資料1. 用于免疫組化ICAM-1測(cè)定的

9、組織標(biāo)本來(lái)自1996年8月1997年6月間在上海醫(yī)科大學(xué)中山醫(yī)院手術(shù)的患者51例，經(jīng)病理證實(shí)為肝細(xì)胞癌45例。有轉(zhuǎn)移組（門(mén)靜脈有癌栓或肝內(nèi)有轉(zhuǎn)移灶）22例，無(wú)轉(zhuǎn)移組23例。正常組6例，取經(jīng)病理證實(shí)為肝良性腫瘤周?chē)鸁o(wú)硬化的肝組織。2.用于血清中ICAM-1測(cè)定的患者為1996年8月10月間的住院者共39例。肝癌33例，31例經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為原發(fā)性肝細(xì)胞癌，2例臨床診斷為原發(fā)性肝癌。肝良性腫瘤6例，其中肝血管瘤4例，肝腺瘤1例，肝囊腫1例，均經(jīng)病理證實(shí)。正常對(duì)照組36例，為體檢中肝功能和肝臟B超檢查均正常者。3.用于組織中ICAM-1測(cè)定的患者為1995年8月1996年10月在中山醫(yī)院行手術(shù)治療者

10、48例，肝癌40例，均經(jīng)病理證實(shí)為原發(fā)性肝細(xì)胞癌，其中轉(zhuǎn)移組16例，非轉(zhuǎn)移組24例。正常肝8例，取自經(jīng)病理證實(shí)為肝良性腫瘤周?chē)鸁o(wú)硬化的肝組織。二、實(shí)驗(yàn)材料ICAM-1單抗抗體購(gòu)于英國(guó)R&D公司，濃度為1 g/L。ALP標(biāo)記的兔抗鼠IgG購(gòu)于華美公司。生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG, ABC試劑盒購(gòu)于Vector公司。MIAS-300全自動(dòng)像分析儀（四川大學(xué)生產(chǎn)）。三、實(shí)驗(yàn)方法1.免疫組織化學(xué)方法： 樣本切片經(jīng)空氣干燥后丙酮固定，馬血清封閉，ICAM-1單抗抗體(150)過(guò)夜，PBS沖洗，生物素標(biāo)記的二抗抗體(1200)371h，加入等量混合的親合素與生物素辣根過(guò)氧化物的混合物(1100)，D

11、AB顯色，蘇木素復(fù)染。2.點(diǎn)免疫印跡法(Dot immuno-blot)： 患者入院后于術(shù)前空腹采靜脈血2ml，取血清置-70保存待測(cè)。手術(shù)切除的新鮮肝癌標(biāo)本快速液氮(-196)冷凍后置-70保存。測(cè)量前取組織塊約0.6cm×0.6cm×0.6cm大小，以含1%Triton X-100懸浮緩沖液1.5ml進(jìn)行組織勻漿，離心取上清液。將血清50ml及組織勻漿上清液30ml點(diǎn)到硝酸纖維素膜上，以生理鹽水為對(duì)照。5%脫脂奶粉封閉，PBS洗膜，ICAM-1單抗抗體1500室溫孵育2h，二抗抗體1200室溫孵育2h，顯色劑顯色。結(jié)果由上海醫(yī)科大學(xué)像分析中心采用MIAS-300全自動(dòng)像

12、分析儀分析，ICAM-1采用相對(duì)定量。即sICAM-1量（樣品灰度本底灰度）×樣品面積，組織ICAM-1量(樣品灰度本底灰度)×樣品面積/蛋白含量。四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。計(jì)量資料采用兩組樣本的t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布時(shí)直接運(yùn)算，非正態(tài)分布時(shí)先行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后再運(yùn)算。結(jié) 果一、肝組織中ICAM-1的免疫組化染色正常肝細(xì)胞未見(jiàn)陽(yáng)性染色顆粒。肝癌組織中ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞膜，鏡下呈蜂窩狀，肝癌組織總陽(yáng)性率為80.0%(36/45)，“+”（陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)030%）為58.3%(21/36)，“+”（陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)30%70%）為41.7%。癌栓組織ICAM-1表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)

13、性。大肝癌、有包膜、轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性細(xì)胞率較高，但在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異沒(méi)有顯著性(P均>0.05)。二、各組血清可溶性ICAM-1(sICAM-1)的半定量測(cè)定結(jié)果肝癌患者血清sICAM-1含量約是正常人的3.5倍，是良性腫瘤患者的2.24倍。sICAM-1含量與肝癌轉(zhuǎn)移與否有關(guān)，而與包膜有無(wú)及腫瘤大小無(wú)關(guān)(表1)。表1 各組sICAM-1含量()/100組別例數(shù)sICAM-1含量P正常363.3±1.6*良性腫瘤65.2±2.3*肝癌3311.6±1.1有轉(zhuǎn)移肝癌712.2±0.2P<0.05無(wú)轉(zhuǎn)移肝癌9.8±0.1有包膜11.0±

14、0.3P>0.05無(wú)包膜12.9±0.4大肝癌11.5±0.2P>0.05小肝癌10.4±0.1*與肝癌組織相比P<0.01 表2 各組組織中ICAM-1含量()/1000例數(shù)sICAM-1含量P正常肝組織84.3±0.2*癌旁肝組織405.9±0.3*有轉(zhuǎn)移組166.8±0.1P>0.05無(wú)轉(zhuǎn)移組214.8±0.1肝癌組織4013.4±0.1有轉(zhuǎn)移肝癌1620.2±0.3P<0.05無(wú)轉(zhuǎn)移肝癌2410.2±0.1包膜完整1713.6±0.2P>0.

15、05包膜不完整1412.9±0.3大肝癌2114.5±0.3P>0.05小肝癌1214.8±0.1*與肝癌組織相比P<0.01 三、肝癌組織、癌旁肝組織與正常肝組織中ICAM-1含量表2所示，肝癌組織中的ICAM-1含量高于正常肝組織和癌旁肝組織，癌旁肝組織與正常肝組織中含量相近。肝癌組織中ICAM-1含量?jī)H與肝癌是否轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與有無(wú)包膜及腫瘤大小無(wú)關(guān)。討 論ICAM-1表達(dá)在正常肝組織為陰性。45例肝細(xì)胞肝癌中36例為陽(yáng)性，ICAM-1主要分布于細(xì)胞膜上，2例癌栓組織ICAM-1均為陽(yáng)性(+)。肝癌患者sICAM-1顯著高于正常人(P<0.0

16、1)和良性腫瘤患者(P<0.05)，正常人與良性腫瘤患者相比含量無(wú)差別(P>0.05)，可見(jiàn)sICAM-1可反映患者的帶瘤狀態(tài)。肝癌組織中ICAM-1的含量明顯高于正常肝組織(P<0.01)與癌旁組織(P<0.01)，說(shuō)明ICAM-1的變化是肝癌組織有別于其它肝組織的特征性變化，可能與肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)歸有直接關(guān)系。轉(zhuǎn)移組與非轉(zhuǎn)移組相比肝癌組織及血清中ICAM-1含量均明顯增加，提示ICAM-1含量可反映肝癌患者的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)狀態(tài)，癌旁組織中ICAM-1含量?jī)山M無(wú)差別，因此與ICAM-1有關(guān)的轉(zhuǎn)移特性主要取決于肝癌細(xì)胞，而與癌旁肝組織關(guān)系不大。血清和肝癌組織中ICAM-1含量均與腫瘤大小及腫瘤有無(wú)包膜無(wú)關(guān)，故認(rèn)為組織和血清中ICAM-1的表達(dá)與患者是否帶瘤有關(guān)，與腫瘤轉(zhuǎn)移狀態(tài)有關(guān)，與腫瘤特性關(guān)系不大。結(jié)果提示：細(xì)胞膜上ICAM-1的表達(dá)與肝癌細(xì)胞有別于正常肝細(xì)胞的生物學(xué)特性有關(guān)，肝癌患者組織和血清中ICAM-1的檢測(cè)一定程度上可以反映肝腫瘤的惡性程度及肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力，據(jù)此可以把它做為判斷肝腫瘤發(fā)展程度及轉(zhuǎn)移狀態(tài)的一個(gè)推測(cè)指標(biāo)。本課題受?chē)?guó)家自然科學(xué)基金(396706)、國(guó)家“九五”攻關(guān)課題基金(96-906-01-15)、美國(guó)中華醫(yī)學(xué)基金會(huì)(CMB93-583)資助作者單位：200032上