《中和抗體測定》PPT課件

1、中和抗體實(shí)驗(yàn)中和抗體實(shí)驗(yàn)2021-12-15SDEPI :liyan7516163毒分別技術(shù)四 中和抗體測定u目的u評價人群中抗脊灰病毒的免疫形狀。u評價OPV的有效性和免疫效果。u適用范圍u人群脊髓灰質(zhì)炎中和抗體效價的測定。u免疫勝利率的監(jiān)測。病毒分別技術(shù)四 中和抗體測定u必備資料u待檢血清滅活處置u稀釋液MMu細(xì)胞懸液510104/mlu規(guī)范血清WHO CDC/EPIu規(guī)范病毒Sabin u 滴度106.0CCID50/mlu必備資料u96孔微量板u微量可調(diào)式移液器u無菌吸尖/無菌吸管u無菌1.5ml離心管/試管u封板膠帶uCO2孵箱病毒分別技術(shù)四 中和抗體測

2、定u待檢血清稀釋1 41 1024u每份待檢血清的稀釋在型板的第1排進(jìn)展。u0.15ml稀釋液，參與 0.05ml的血清，吹吸均勻后，將這個稀釋度的血清向下一個稀釋度移0.05ml，至最高稀釋孔吹吸均勻后，棄去0.05ml。u 在微量板上進(jìn)展，板子標(biāo)志和稀釋詳見附錄1型板型板 血清血清1血清血清2血清血清3血清血清4血清對照血清對照1414 血清稀釋血清稀釋1414 116116 164164 12561256 1102411024 血清對照血清對照1414 血清稀釋血清稀釋1414 116116 164164 12561256 1102411024 血清血清5血清血清6血清血清7血清血清8病

3、毒分別技術(shù)四 中和抗體測定稀釋度稀釋度 1 1：4 14 1：16 116 1：64 164 1：256 1256 1：10241024稀釋液稀釋液 0.15 0.15 0.15 0.15 0.150.15 0.15 0.15 0.15 0.15 血血 清清 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 廢廢0.050.05 移入它孔移入它孔 （每孔（每孔5 5） 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 n待檢血清稀釋方法例如：病毒分別技術(shù)四 中和抗體測定u待檢血清稀釋u用排槍向第2排

4、孔及、型板的相應(yīng)稀釋度的兩排孔中，每孔移入0.025ml，原稀釋孔保管0.025ml。u規(guī)范血清稀釋根據(jù)血清效價而定ustandard serum: 18000ustandard serum : 12000ustandard serum : 12000病毒分別技術(shù)四 中和抗體測定u規(guī)范毒株稀釋200CCID50/0.025mlu 病毒滴定及攻擊病毒含量的計(jì)算與稀釋見附錄2、3u中和實(shí)驗(yàn)時所用抗原量過大或過小都會影響血清抗體滴度。每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)病毒對照，核對所用病毒劑量，普通應(yīng)在32320CCID50/0.025ml的用量時其結(jié)果才被認(rèn)可。u 病毒滴定對照見附錄4病毒分別技術(shù)四 中和抗體測定u中和

5、作用，u向血清板上參與已稀釋好的規(guī)范毒株懸液0.025ml 200CCID50 。u 留意型別的區(qū)分和對應(yīng)u輕搖混勻后，放入CO2孵箱，培育24小時u參與事先預(yù)備好的細(xì)胞懸液0.1ml/孔u(yù)Hep-2 : 510104/mlu再次搖勻，密封好放在36.5培育57天。病毒分別技術(shù)四 中和抗體測定u對照的設(shè)立u血清對照 14，規(guī)范血清和待檢血清同時設(shè)立u細(xì)胞對照、稀釋液對照u100CCID50的抗原對照u每個對照設(shè)兩孔，血清、抗原的量各為0.025ml/孔，補(bǔ)加稀釋液0.025ml/孔，細(xì)胞對照孔的稀釋液應(yīng)為0.05ml，然后全部加細(xì)胞懸液0.1ml/孔，密封后放34.5培育57天。病毒分別技術(shù)四

6、 中和抗體測定u結(jié)果斷定u當(dāng)100CCID50的抗原對照出現(xiàn)完全病變時，斷定最終結(jié)果 u當(dāng)最高稀釋度的血清病毒混合液接種的2孔細(xì)胞中有1孔不出現(xiàn)CPE，該稀釋度的倒數(shù)即為該血清標(biāo)本的中和抗體滴度。 型板型板 血清血清1血清血清2血清血清3血清血清4血清對照血清對照1414 血清稀釋血清稀釋1414 116116 164164 12561256 1102411024 血清對照血清對照1414 血清稀釋血清稀釋1414 116116 164164 12561256 1102411024 血清血清5血清血清6血清血清7血清血清8病毒分別技術(shù)四 中和抗體測定CCID50100Sabine1010.11

7、00Sabine1010.1100Sabine1010.1病毒滴定結(jié)果判別表示圖1001病毒分別技術(shù)四 中和抗體測定uSpearsmanKarber公式：uLogCCID50=Xm1/2ddPi/100u Xm=所用病毒最低稀釋度最高濃度的對數(shù)u d=稀釋度系數(shù)倍數(shù)的對數(shù)。u Pi=各稀釋度出現(xiàn)CPE百分?jǐn)?shù)的總和。病毒分別技術(shù)四 中和抗體測定u病毒滴定結(jié)果的斷定uSabine：u LogCCID50=0+0.5-1100+100+100+25/100=-2.75uSabine：u LogCCID50=0+0.5-1100+75+25/100=-1.50uSabine：u LogCCID50=0+0.5-1100+100+50/100=-2.00病毒分別技術(shù)四 中和抗體測定u病毒滴定對照結(jié)果的判別uSabine：取2.75的反對數(shù)，即得到攻擊病毒的含量：562CCID50/0.025ml。uSabine：取1.50的反對數(shù)，即得到攻擊病毒的含量：31.6CCID50/0.025ml。uSabine：取2.00的反對數(shù)，即得到攻擊病毒的含量：100CCID50/0.025ml。病毒分別技術(shù)四 中和抗體測定u簡單的斷定能否有效的方法：u32320 CCID50/0.025ml 的對數(shù)：u 1.5052