實驗十流感病毒的分離鑒定二ppt課件

1、實驗十實驗十流感病毒的分別鑒定二流感病毒的分別鑒定二1、血細胞凝集實驗、血細胞凝集實驗2、血細胞凝集抑制實驗、血細胞凝集抑制實驗 目的：熟習病毒血凝、血凝抑制實驗的方法及其運用。目的：熟習病毒血凝、血凝抑制實驗的方法及其運用。 原理：流感病毒顆粒外表有血凝素原理：流感病毒顆粒外表有血凝素,具有使雞、豚鼠具有使雞、豚鼠等血細胞凝集的才干。把一定濃度的雞紅細胞加到待等血細胞凝集的才干。把一定濃度的雞紅細胞加到待檢的雞胚尿囊液或羊水中，如出現(xiàn)血細胞凝集景象，檢的雞胚尿囊液或羊水中，如出現(xiàn)血細胞凝集景象，即表示有病毒存在；如血凝陽性，那么可進一步用血即表示有病毒存在；如血凝陽性，那么可進一步用血凝抑制

2、實驗進展病毒鑒定，流感病毒的血凝性，可被凝抑制實驗進展病毒鑒定，流感病毒的血凝性，可被免疫血清中的特異性抗體所抑制，使其失去凝集作用，免疫血清中的特異性抗體所抑制，使其失去凝集作用，借此可用知抗體鑒定未知病毒及病毒的型、亞型。借此可用知抗體鑒定未知病毒及病毒的型、亞型。 實驗資料實驗資料 (1)接種流感病毒的雞胚。接種流感病毒的雞胚。 (2)質量分數(shù)為質量分數(shù)為05的雞紅細胞懸液。的雞紅細胞懸液。 (3)流感病毒型與亞型免疫血清。流感病毒型與亞型免疫血清。 (4)碘酒，酒精消毒棉球。碘酒，酒精消毒棉球。 (5)滅菌的鑷子、剪刀。滅菌的鑷子、剪刀。 (6)無菌小試管，毛細滴管，吸管。無菌小試管，

3、毛細滴管，吸管。 (7)生理鹽水。生理鹽水。 (8)試管、試管架。試管、試管架。 實驗方法：實驗方法： 1、血細胞凝集實驗、血細胞凝集實驗 (1)收獲尿囊液：雞胚孵育收獲尿囊液：雞胚孵育3d后后,放放4度冰箱過夜度冰箱過夜,次次日取出雞胚日取出雞胚,消毒氣室端卵殼消毒氣室端卵殼,用小鑷子在無大血管用小鑷子在無大血管處撕破卵膜處撕破卵膜,以無菌毛細管汲取尿囊液以無菌毛細管汲取尿囊液,放入無菌試放入無菌試管中。管中。 (2)取尿囊液取尿囊液01mL,作作1：10稀釋。稀釋。(3)取取10支小試管，按給各管參與生理鹽水支小試管，按給各管參與生理鹽水0.2mL。(4)取取1：10稀釋的尿囊液稀釋的尿囊

4、液02mL，加人第，加人第1個試管個試管中，混勻后，再吸出中，混勻后，再吸出02mL參與第參與第2個試管中；個試管中；混勻后，從第混勻后，從第2個試管吸出個試管吸出02mL參與第參與第3個試個試管管依次作倍比稀釋至第九管，混勻后自第依次作倍比稀釋至第九管，混勻后自第9個試管中取出個試管中取出02mL棄掉。這樣各管液體量均棄掉。這樣各管液體量均為為02mL，從第，從第1-9個試管的尿囊液稀釋度為個試管的尿囊液稀釋度為1:20，1:40，1:5120，第，第10個試管為生理個試管為生理鹽水對看管。鹽水對看管。 (5)稀釋終了后加人體積分數(shù)為稀釋終了后加人體積分數(shù)為05的壓積雞紅的壓積雞紅細胞懸液，

5、每管細胞懸液，每管02mL,室溫放置室溫放置3060mn。 流感病毒血凝實驗試管號試管號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10生理鹽水生理鹽水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2病毒液病毒液 (1:10) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 棄棄0.2病毒稀釋度病毒稀釋度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 對對照照0.5%雞紅細胞雞

6、紅細胞 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 搖勻置室溫搖勻置室溫6090分鐘分鐘結結 果果 + + + + + + + 試管號試管號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10生理鹽水生理鹽水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2病毒液病毒液 (1:10) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 棄棄0.2病毒稀釋度病毒稀釋度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 1:20 1:40 1:80 1:160 1:

7、320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 對照對照0.5%雞紅細胞雞紅細胞 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 搖勻置室溫搖勻置室溫6090分鐘分鐘結結 果果 + + + + + + + (6)結果察看結果察看察看時要輕拿、勿搖，首先察看對看管應無凝集，然察看時要輕拿、勿搖，首先察看對看管應無凝集，然后再察看實驗管，各管出現(xiàn)的凝集程度以后再察看實驗管，各管出現(xiàn)的凝集程度以“+、“+、“+、“+、“表示，判別規(guī)范如下：表示，判別規(guī)范如下： “+：全部紅細胞凝集，凝集的紅細胞鋪滿管底，：全部紅細胞凝集，凝集的紅細胞鋪滿管底，邊緣不整齊

8、。邊緣不整齊。 “+：大部分紅細胞凝集，在管底鋪成薄膜狀，但尚有少數(shù)紅細胞不：大部分紅細胞凝集，在管底鋪成薄膜狀，但尚有少數(shù)紅細胞不凝，在管底中心構成小紅點。凝，在管底中心構成小紅點。 “+：約有半數(shù)紅細胞凝集，在管底鋪成薄膜，面積較小，不：約有半數(shù)紅細胞凝集，在管底鋪成薄膜，面積較小，不凝集的紅細胞在管底中心聚成小圓點。凝集的紅細胞在管底中心聚成小圓點。 “+：只需少數(shù)紅細胞凝集，不凝集的紅細胞在管底中心聚成?。褐恍枭贁?shù)紅細胞凝集，不凝集的紅細胞在管底中心聚成小圓點，凝集的紅細胞在小圓點的周圍。圓點，凝集的紅細胞在小圓點的周圍。 “：不凝集，紅細胞沉于管底，呈一邊緣整齊的致密圓點。：不凝集，

9、紅細胞沉于管底，呈一邊緣整齊的致密圓點。 凝集效價：能使紅細胞呈“+凝集的病毒最高稀釋度為凝集效價，表示含有一個單位血凝抗原。 如表，第6個試管為“+，且病毒稀釋度最高，那么該病毒懸液效價為1:640，即該病毒懸液稀釋到1：640時，每02mL中含有一個血凝單位，配制4個血凝單位的病毒懸液時，病毒液應稀釋成(1：640)X4，即1：160。2、血細胞凝集抑制實驗 試試 管管1 待測待測 2 待測待測3 血清對照血清對照4 抗原對照抗原對照5 紅細胞對照紅細胞對照 生理鹽水生理鹽水1：5血清血清4u病毒液病毒液0.5雞紅雞紅細胞細胞0.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.40.2按表參與資料和試劑按表參與資料和試劑 結果察看結果察看先察看先察看3支對看管，如抗原對看管出現(xiàn)完全凝集，血清對照和紅支對看管，如抗原對看管出現(xiàn)完全凝集，血清對照和紅細胞對照不發(fā)生凝集，再察看實驗管。細胞對照不發(fā)生凝集，再察看實驗管。血凝抑制效價：完全抑制紅細胞凝集的血清最高稀釋度，即該血凝抑制效價：完全抑制紅細胞凝集的血清最高稀釋度，即該血清的抑制效價。血清的抑制效價。鑒定病