九例成人T淋巴細(xì)胞白血病的臨床與實(shí)驗(yàn)研究

1、九例成人T淋巴細(xì)胞白血病的臨床與實(shí)驗(yàn)研究【摘要】目的探討成人T淋巴細(xì)胞白血病(ATL)的臨床、細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、血清學(xué)及分子生物學(xué)等特征。方法采用間接免疫熒光法及酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清HTLV-抗體，建立PCR和液相雜交法檢測前病毒基因序列，結(jié)合MIC特征確診ATL。結(jié)果和結(jié)論確診9例ATL，其臨床特征主要為淋巴結(jié)腫大,皮損及溶骨改變少見,外周血及骨髓出現(xiàn)典型的花瓣?duì)詈肆馨图?xì)胞，胞體大，核畸形，免疫表型為CD-1、CD+2、CD3+、CD4+、CD-8,還表達(dá)CD25等激活標(biāo)記，染色體核型及HLA分型未發(fā)現(xiàn)有規(guī)律性的變化。8例ATL中有7例血清HTLV-抗體陽性，應(yīng)用PCR及液相雜交

2、法可檢出整合到宿主細(xì)胞DNA中的HTLV-病毒序列，表明在我國HTLV-也是ATL的病因。9例中1例為淋巴瘤型，1例為慢性型，7例為急性型ATL，治療效果及預(yù)后均不良?！娟P(guān)鍵詞】白血病淋巴瘤，T細(xì)胞，急性，HTLV-相關(guān)HTLV-聚合酶鏈反應(yīng) Clinical and experimental study of 9 cases of adult T cell leukemiaHU Jianda, LU Lianhuang, CHEN Yuanzhong, et al.Union Hospital of Fujian Medical University, Fujian Institute of

3、 Hematology, Fuzhou350001【Abstract】ObjectiveIn order to clarify the clinical and laboratory features of adult T cell leukemia (ATL): morphology, immunology, cytogenetics, serology and molecular biology. MethodsIndirect immunofluorescence assay and ELISA were used to detect serum HTLV- antibody. The

4、HTLV- provirus sequence were amplified by PCR and confirmed by liquid hybridization. Results and Conclusion Nine cases of ATL were diagnosed. The major clinical manifestation was lymph node enlargement found in all patients. Skin involvement and osteolysis were not frequent. The characteristic findi

5、ng was leukemic cells with highly indented or lobulated flower-like nuclei in peripheral blood and bone marrow. ATL cells were CD2，CD3，CD4，CD25 positive and CD8 negative. No specific chromosome abnormality or HLA type was found. Seven of 8 patients examined had HTLV- antibody. The HTLV- provirus gen

6、ome sequence integrated into host cell DNA was amplified by PCR and confirmed by liquid hybridization. All of these results showed that HTLV- was also the etiological agent of ATL in China. One of the 9 cases of ATL was classified as lymphoma type, one as chronic-type, and the rest as acute type.【Ke

7、y words】Leukemia-Lymphoma,T-cell,acute,HTLV-associatedHTLV-Polymerase chain reaction成人T淋巴細(xì)胞白血?。╝dult T cell leukemia, ATL）是一種獨(dú)特類型的白血病，由型人類T細(xì)胞白血病病毒(human T cell leukemia virus type ,HTLV-)引起,最早由日本學(xué)者于1977年報(bào)告1,其特征性的表現(xiàn)是血及骨髓中出現(xiàn)花瓣?duì)詈肆馨图?xì)胞，免疫學(xué)表型為CD+2,CD+3,CD+4,CD-8，并有T細(xì)胞激活的現(xiàn)象。國內(nèi)于1989年報(bào)告福建沿海地區(qū)存在HTLV-小流行區(qū)2以來，又

8、陸續(xù)報(bào)告一些新的病例。我們將經(jīng)臨床結(jié)合各實(shí)驗(yàn)研究確診的9例ATL報(bào)告如下，并探討其特征。對象和方法1研究對象9例均為我院收診的患者，男5例，女4例，年齡3064歲，均為福建省籍居民，與日本人均無血緣關(guān)系，除1例曾去日本1周外，其余均無外出史，也無與日本人接觸史。按常規(guī)進(jìn)行檢查、診治。2細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測細(xì)胞化學(xué)染色及超微結(jié)構(gòu)觀察：ATL患者的外周血片和骨髓片做瑞氏染色,同時(shí)作糖原(PAS)染色、酸性磷酸酶(ACP)、過氧化物酶(POX)、非特異性酯酶(NAE)及氟化鈉抑制試驗(yàn)(NaF)、堿性磷酸酶(NAP)、熱鹽水溶解試驗(yàn)等細(xì)胞化學(xué)染色。部分患者行淋巴結(jié)活檢病理檢查。另外，分離患者外周血白血病細(xì)胞

9、用以電鏡下觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。3細(xì)胞免疫表型檢測采用活細(xì)胞間接免疫熒光法，分化抗原表達(dá)30為陽性。所用的單抗FITC標(biāo)記兔抗鼠IgG均由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所提供。4染色體核型分析對3例患者進(jìn)行染色體核型分析，采用G顯帶，按人類細(xì)胞遺傳學(xué)命名的國際體制分析。5HLA抗原分型4例ATL患者采用微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)方法進(jìn)行HLA-A、B或DR位點(diǎn)檢測。HLA抗血清板由上海中心血站提供。6血清HTLV-I抗體檢測采用間接免疫熒光法及ELISA法檢測。HTLV-I抗體的ELISA試劑盒為Diagnostic Biotechnology公司產(chǎn)品。7HTLV-病毒基因檢測應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)結(jié)合液相

10、雜交技術(shù)檢測整合到宿主細(xì)胞DNA中的前病毒基因pol區(qū)及tax序列。PCR及雜交的具體過程見文獻(xiàn)3。結(jié)果1ATL患者的臨床特點(diǎn)根據(jù)臨床表現(xiàn)、外周血和(或)骨髓出現(xiàn)典型的不規(guī)則或花瓣?duì)詈肆馨图?xì)胞,血清HTLV-抗體陽性，共診斷9例ATL，主要臨床特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)室檢查見表1。所有患者均有淋巴結(jié)腫大,4例肝脾腫大,僅1例患者出現(xiàn)皮膚損害。血象中血紅蛋白及血小板改變較少,白細(xì)胞數(shù)量為(2.6220.0)109/L，血象、骨髓象出現(xiàn)不同比例的花瓣?duì)詈肆馨图?xì)胞，檢測8例患者的血清HTLV-抗體,7例陽性,1例陰性。2ATL的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)及細(xì)胞遺傳學(xué)(MIC)特征9例患者均可見ATL特異的花瓣?duì)詈肆馨图?xì)胞

11、，外周血比例為0.020.92，骨髓為00.575。這些ATL細(xì)胞胞體較大，胞核不規(guī)則，表現(xiàn)為深切跡，分葉狀或花瓣?duì)?。POX、熱鹽水陰性，PAS及ACP陽性，NAP陰性或陽性,NAE陽性者不被NaF抑制。電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察，大部分淋巴細(xì)胞體積較大，核型不規(guī)則，大畸形較多，呈不對稱分葉狀，胞質(zhì)細(xì)胞器簡單。1例ATL患者頸淋巴結(jié)病理活檢結(jié)合免疫組化示彌漫性T細(xì)胞淋巴瘤（如1）。免疫學(xué)表型主要為CD-1、CD+2、CD3+、CD+4、CD-8，CD4+、CD+8及CD-4、CD-8者各1例。不同程度表達(dá)T細(xì)胞激活標(biāo)記，如CD25、CD38、CD71、DR等。分析3例ATL患者染色體核型有2例出現(xiàn)畸變,

12、分別為48,XX,+2,+14及48，XX,+14,+mar，4例患者HLA分型未發(fā)現(xiàn)有規(guī)律性的表型。表1ATL患者的臨床特點(diǎn)例號性別年齡(歲)籍貫臨床體征實(shí)驗(yàn)室檢查皮損淋巴結(jié)腫大肝脾腫大溶骨損害Hb(g/L)BPC(109/L)WBC(109/L)血ATL細(xì)胞骨髓ATL細(xì)胞Ca2LDHHTLV-抗體1女41福建平潭65121220.00.700.5752女31福建莆田7410229.00.600.2353女45福建福州11818020.40.2004女30福建福安1081202.60.0205男58福建南平10513832.00.406男37福建平潭12516829.00.530.1957男

13、36福建福安1101408.0濃縮片易找到8男61福建福安974787.80.920.3459男64福建莆田1001204.50.100.030 3PCR檢測HTLV-基因共對6例患者進(jìn)行HTLV-前病毒基因檢測，pol區(qū)及tax片段均能被擴(kuò)增，并能與相應(yīng)的32P標(biāo)記的寡核苷酸探針雜交，敏感性及特異性均好。這6例中5例即例15血清HTLV-抗體陽性，1例(例9)陰性。通過檢測HTLV-病毒基因，從分子水平上確診ATL。49例患者除例9臨床表現(xiàn)較輕外，其余進(jìn)展較快，化療療效差，預(yù)后不良，在發(fā)病后數(shù)月內(nèi)相繼死亡。 討論HTLV-是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的人類逆轉(zhuǎn)錄病毒，已知它是ATL的外源性致病因子4。AT

14、L患者表現(xiàn)獨(dú)特的臨床病理學(xué)特征，如皮膚損害,高鈣血癥,溶骨破壞,肝、脾、淋巴結(jié)腫大,乳酸脫氫酶(LDH)升高及出現(xiàn)特異的花瓣?duì)詈肆馨图?xì)胞，血清HTLV-抗體陽性，免疫表型為CD+4、CD8-。我們共報(bào)告9例ATL患者，男女比例為1.251，發(fā)病年齡為3064歲，平均44.8歲，職業(yè)以農(nóng)民為主，均為福建籍，與日本人無血緣關(guān)系，除例5曾于1984年去過日本1周外，余未到過國外，也無接觸史，臨床上所有患者均有淋巴結(jié)腫大，4例肝、脾腫大，皮損、溶骨改變及高鈣血癥少見，血象、骨髓象中白細(xì)胞計(jì)數(shù)及花瓣?duì)詈薃TL細(xì)胞比例高低不一，骨髓中ATL細(xì)胞比例較外周血低，與日本報(bào)告的臨床表現(xiàn)有一定的差異。Takats

15、uki等5調(diào)查187例ATL,平均年齡55歲,皮損及高鈣血癥較常見。國外根據(jù)臨床表現(xiàn)等將ATL分成5個(gè)類型：急性型、慢性型、冒煙型、危象型及淋巴瘤型6。我們報(bào)告的9例ATL患者中例4為淋巴瘤型，例9可診為慢性型ATL，其余均為急性型。ATL細(xì)胞是較成熟的淋巴細(xì)胞，核畸變，免疫表型常為CD+4、CD8-,少數(shù)為CD+4、CD8+或CD-4、CD8-，還表達(dá)CD25等T細(xì)胞激活標(biāo)記。ATL細(xì)胞常會出現(xiàn)染色體畸變,但未見特征性畸變的報(bào)告7,在對HLA分型的研究中也未發(fā)現(xiàn)肯定的證據(jù)支持其發(fā)病與遺傳因素有關(guān)8。本組9例中除例4淋巴瘤型ATL出現(xiàn)數(shù)量較少的ATL細(xì)胞外,其余患者均有相當(dāng)比例的ATL細(xì)胞，免

16、疫學(xué)表型主要為CD4+、CD-8，還不同程度表達(dá)CD25等，染色體核型分析顯示無明顯規(guī)律的畸變，HLA分型4例中有3例表達(dá)A2位點(diǎn)，A9及B75位點(diǎn)各2例，但因例數(shù)少，不足以說明問題。以上臨床病理學(xué)特征亦不總是ATL所特有，特別是在非流行區(qū)，一些與HTLV-I無關(guān)的T細(xì)胞腫瘤也會表現(xiàn)出一些或全部特征9，血清學(xué)抗體檢測可以確定HTLV-I感染的個(gè)體，但會有假陰性或假陽性結(jié)果，因此，僅以臨床及血清學(xué)證據(jù)來確定T細(xì)胞腫瘤是否與HTLV-I有關(guān)，尚缺乏足夠的特異性和靈敏性。ATL確診有賴于患者細(xì)胞DNA檢出整合的HTLV-I基因，本研究中例4臨床表現(xiàn)不典型，ATL細(xì)胞比例少，例9血清抗體陰性，最后均經(jīng)

17、PCR及液相雜交技術(shù)檢出HTLV-I基因而獲確診。本課題受福建省衛(wèi)生廳科研基金(94147)資助作者單位：350001福州,福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院,福建省血液病研究所參考文獻(xiàn)1 Uchiyama T, Yodoi J, Sagawa K, et al. Adult T-cell leukemia:clinical and hematologic features of 16 cases.Blood,1977,50:481-492.2 呂聯(lián)煌,葉榆生,黃淑樺,等.福建省沿海地區(qū)人類T淋巴細(xì)胞白血病病毒小流行區(qū)的發(fā)現(xiàn). 中華血液學(xué)雜志,1989,10:225-227.3 胡建達(dá),呂聯(lián)煌,張萍容,

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