上呼吸道淋巴瘤的病理、免疫表型及其與EB病毒相關(guān)性的研究

1、    上呼吸道淋巴瘤的病理、免疫表型及其與EB病毒相關(guān)性的研究            關(guān)鍵詞：呼吸道腫瘤；淋巴瘤；皰疹病毒4型；人    中華病理學(xué)雜志980403 【摘要】 目的 研究中國(guó)北方人上呼吸道淋巴瘤的臨床病理學(xué)、免疫表型及與EB病毒的關(guān)系。方法 應(yīng)用單克隆抗體UCHL-1、L26、4KB5及CS1-4進(jìn)行免疫組化染色，EB病毒寡核苷酸探針(EBER1/2)原位雜交，觀察112例上呼吸

2、道淋巴瘤的免疫表型及EB病毒感染情況。結(jié)果 112例上呼吸道淋巴瘤病例中77例為T(mén)細(xì)胞淋巴瘤(68.8%)。35例為B細(xì)胞淋巴瘤(31.3%)。EBV-EBER1/2原位雜交101例中54例陽(yáng)性，各例中陽(yáng)性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的15.0%85.0%，陽(yáng)性病例中T細(xì)胞淋巴瘤48例(88.9%)，B細(xì)胞淋巴瘤6例(11.1%)。結(jié)論 中國(guó)北方人上呼吸道淋巴瘤以T細(xì)胞淋巴瘤為多見(jiàn)，且與EB病毒有較高的相關(guān)性。    Investigation of the clinicopathologic features, immunophenotype and Epstein

3、-Barr virus infection of the upper respiratory tract lymphomas in patients Gao Zifen*, Wang Honghai, Pan Zenggang, et al. *Department of Pathology, Beijing Medical University, Beijing 100083    【Abstract】 Objective To study the clinicopathologic features, immunophenotype and Epst

4、ein-Barr virus (EBV) infection of the upper respiratory tract lymphomas in patients from north China. Methods 112 cases of upper respiratory tract lymphomas in patients from north China were investigated. HE stain for histologic features. Immunohistochemistry studies were performed using monoclonal

5、antibodies, UCHL-1 for T-lymphocyte, L26 and 4KB5 for B lymphocyte, CS1-4 for latent membrane protein-1 (LMP-1). In situ hybridization for EBV encoded small nuclear RNA (EBER 1/2, Y017, DAKO). Results 77/112 cases (68.75%) were T-cell lymphomas, 35 cases (31.25%) were B cell lymphomas. EBV-EBER 1/2

6、in situ hybridization positive in 54/101 (53.46%) cases, including 48 T-cell lymphoma cases and 6 B-cell lymphoma cases. Conclusion Most upper respiratory tract lymphoma cases in patients from north China are T-cell lymphomas and are strongly associated with EBV.    【Key words】 R

7、espiratory tract neoplasms Lymphoma Herpsvirus 4, human    上呼吸道淋巴瘤為上呼吸道常見(jiàn)的惡性腫瘤，東方人的發(fā)病率明顯高于西方人，并與EB病毒有很高的相關(guān)性。我們收集一組中國(guó)北方人上呼吸道淋巴瘤病例，進(jìn)行臨床病理學(xué)分類(lèi)、免疫表型及與EB病毒相關(guān)性的研究，目的在于探討北方人上呼吸道淋巴瘤的特點(diǎn)，以進(jìn)一步比較研究中國(guó)北方人與南方人上呼吸道淋巴瘤的發(fā)生、分類(lèi)等問(wèn)題，為臨床預(yù)防、診斷和治療提供可靠的依據(jù)。    材料與方法   

8、0;1.材料：作者共收集19801996年138例上呼吸道淋巴瘤標(biāo)本，來(lái)自北京醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)系(44例)、解放軍空軍總醫(yī)院病理科(60例)、齊齊哈爾鐵路醫(yī)院病理科(12例)、北京醫(yī)科大學(xué)人民醫(yī)院病理科(11例)、山西省大同市第五醫(yī)院病理科(7例)、北京市和平里醫(yī)院病理科(2例)、內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室(2例)，對(duì)其中112例(3例為當(dāng)?shù)爻錾蜕L(zhǎng)的兒童，分別為3歲，4歲和13歲)在當(dāng)?shù)厣?0年以上的成年人為中選病例進(jìn)行了研究。所有標(biāo)本均經(jīng)過(guò)10%中性福馬林固定，石蠟包埋。只有1例有冰凍組織提供。全部病例依Kiel分類(lèi)進(jìn)行組織學(xué)類(lèi)型和免疫表型的分類(lèi)。   

9、60;2.方法：(1) HE染色：石蠟切片5 m厚，HE染色，光鏡觀察，進(jìn)行組織學(xué)分型。(2)免疫組織化學(xué)染色：選擇抗T細(xì)胞的單克隆抗體UCHL-1(香港大學(xué)病理學(xué)系饋贈(zèng)，DAKO公司)，抗B細(xì)胞的單克隆抗體L26、4KB5(香港大學(xué)病理學(xué)系饋贈(zèng)，DAKO公司)，對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行免疫表型分析。單克隆抗體CS1-4(DAKO公司)對(duì)EB病毒潛在膜蛋白(LMP-1)的表達(dá)進(jìn)行研究。采用標(biāo)準(zhǔn)LSAB法進(jìn)行免疫組化染色，3,3二氨基聯(lián)苯二胺鹽酸鹽(DAB，購(gòu)自美國(guó)Sigma公司)顯色。檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的免疫表型和病毒的基因產(chǎn)物。LMP-1的染色切片先經(jīng)過(guò)0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液微波預(yù)處理。所有一抗

10、4 過(guò)夜1。(3) 原位雜交：探針為DAKO公司的EB病毒寡核苷酸試劑盒。有FITC標(biāo)記的EB病毒寡核苷酸探針(Y017)，標(biāo)有堿性磷酸酶的抗FITC抗體和五溴-四氯-三吲哚磷酸酯/氮藍(lán)四唑(BCIP/NBT)顯色系統(tǒng)(K046)。每張切片加探針5 l，37 雜交2小時(shí)1。以EBV陽(yáng)性的Hodgkin病為對(duì)照。    結(jié)果    1.臨床特點(diǎn)：112例原診斷為中線惡性網(wǎng)織細(xì)胞增生癥(MMR)58例、淋巴瘤23例和韋格納肉芽腫病18例，炎癥13例。病變部位以鼻腔最多，52例，鼻咽為30例，咽部17例，扁桃體9例，軟腭

11、、會(huì)厭、舌根和喉部各1例。男性82例，女性30例，男女比例2.731。病人年齡在378歲之間，平均42.3歲。臨床上以局部表現(xiàn)為主，很少有全身癥狀。局部表現(xiàn)多為長(zhǎng)期鼻堵，睡眠打鼾，鼻涕帶血或鼻衄，面部腫脹，咽痛，肉芽樣新生物形成等。嚴(yán)重者可見(jiàn)鼻梁塌陷，鼻竇破壞，全身轉(zhuǎn)移。這些臨床表現(xiàn)均與文獻(xiàn)報(bào)道相似。    2.組織學(xué)分型和免疫表型：上呼吸道淋巴瘤由于取材困難，往往得到的組織甚少，加上常有嚴(yán)重的壞死、滲出和繼發(fā)感染，所以診斷有一定的困難。腫瘤細(xì)胞有明顯的異型性，且常有較多反應(yīng)性淋巴細(xì)胞增生浸潤(rùn)。按照KIEL的分類(lèi)法進(jìn)行分類(lèi)，112例中有77例(68.8%

12、)異形淋巴細(xì)胞呈UCHL-1陽(yáng)性，L26和4KB5陰性，確診為T(mén)細(xì)胞性淋巴瘤(1)，包括2例原來(lái)診斷為B細(xì)胞性淋巴瘤的病例。77例中10例為低度惡性的小T細(xì)胞性淋巴瘤，67例為高度惡性的中-大T細(xì)胞性淋巴瘤(2)。T細(xì)胞性淋巴瘤細(xì)胞體積較大，胞界不清，核淡染，明顯多形性。45例有瘤細(xì)胞浸潤(rùn)血管現(xiàn)象(3)，血管壁部分或全部被腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)破壞，少數(shù)病例看見(jiàn)血栓形成。35例(31.3%)B細(xì)胞淋巴瘤中33例異形淋巴細(xì)胞UCHL-1陰性，而L26和4KB5陽(yáng)性，確診為B細(xì)胞性淋巴瘤。有2例形態(tài)為典型的漿細(xì)胞性淋巴瘤，免疫染色均為陰性。13例為中心母-中心細(xì)胞型(4)，2例為伯基特淋巴瘤，3例為免疫母細(xì)

13、胞型，淋巴母細(xì)胞型1例，均為高度惡性。7例中心母-中心細(xì)胞型，淋巴細(xì)胞型4例，淋漿細(xì)胞型3例，漿細(xì)胞型2例均為低度惡性。11例有血管浸潤(rùn)，未見(jiàn)血栓形成。    3.EB病毒核酸和潛在膜蛋白檢測(cè)：我們對(duì)101例進(jìn)行了EB病毒的檢測(cè)。75例確診為T(mén)細(xì)胞性淋巴瘤的病例中，EB病毒編碼的小RNA(EBER1/2)探針原位雜交48例陽(yáng)性，陽(yáng)性率為64.0%，各例中陽(yáng)性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的15.0%85.0%(5)。EBER陽(yáng)性的病例中只有5例LMP-1陽(yáng)性(6)，占48例中的10.4%。26例B細(xì)胞性淋巴瘤中EBER 1/2檢出6例，陽(yáng)性率為23.1%，LMP-1全為

14、陰性。    討論    1.北方上呼吸道淋巴瘤患者絕大多數(shù)為T(mén)細(xì)胞性淋巴瘤。我們研究的112例上呼吸道淋巴瘤病例，其中77例為T(mén)細(xì)胞性淋巴瘤，35例為B細(xì)胞性淋巴瘤，這和國(guó)內(nèi)外的文獻(xiàn)報(bào)道一致25。T細(xì)胞性淋巴瘤又以高度惡性的中-大細(xì)胞型為主，腫瘤細(xì)胞多形性明顯，核折疊、扭曲，彌漫浸潤(rùn)。以前根據(jù)形態(tài)學(xué)診斷一直將其診斷為MMR。由于單克隆抗體的問(wèn)世，現(xiàn)認(rèn)識(shí)到腫瘤細(xì)胞幾乎均來(lái)源于淋巴細(xì)胞。本組收集的病例經(jīng)單克隆抗體標(biāo)記無(wú)1例組織細(xì)胞性腫瘤，這與國(guó)內(nèi)其他作者報(bào)道一致69。中線部位的T細(xì)胞淋巴瘤以高度惡性為多，也有的病例瘤

15、細(xì)胞體積較小，形態(tài)比較一致，異型性不明顯，加上壞死和炎癥的背景，故難以確診，以往多數(shù)誤診為炎癥。我們的經(jīng)驗(yàn)是，在此時(shí)必須與臨床醫(yī)師密切聯(lián)系或親自檢查病人，反復(fù)取材，切勿輕易診斷炎癥。作者近期遇到2例病人，均取材3次才明確診斷為T(mén)細(xì)胞性淋巴瘤。在我們收集的病例里有1例先后活檢4次，當(dāng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞浸潤(rùn)神經(jīng)才得到明確診斷。此部位的T細(xì)胞性淋巴瘤多數(shù)有明顯浸潤(rùn)血管現(xiàn)象，即腫瘤細(xì)胞圍繞血管生長(zhǎng)以及在管壁和管腔中浸潤(rùn)，造成血管壁壞死5，所以組織學(xué)分型又稱(chēng)為血管中心型淋巴瘤。本文77例T細(xì)胞淋巴瘤中45例可見(jiàn)不同程度的血管浸潤(rùn)，少數(shù)病例并有血栓形成。皮膚、睪丸、上呼吸道等部位的淋巴瘤以及肺的淋巴瘤性肉芽腫(ly

16、mphomatoid granulomatosis)都有和鼻咽部T細(xì)胞性淋巴瘤相似的血管浸潤(rùn)特點(diǎn)，所以    1 高度惡性的中-大T細(xì)胞性淋巴瘤UCHL-1陽(yáng)性 LSAB法 ×200 2 高度惡性的中-大T細(xì)胞性淋巴瘤，腫瘤細(xì)胞體積大，核扭曲折疊呈多形性，染色質(zhì)細(xì) HE×200 3 高度惡性的中-大T細(xì)胞性淋巴瘤，表面壞死，異形淋巴細(xì)胞彌漫性浸潤(rùn)，腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)血管壁，內(nèi)皮完整() HE×100 4 高度惡性的生發(fā)中心母細(xì)胞型淋巴瘤，瘤細(xì)胞體積大，圓形，核圓，核染色質(zhì)粗呈顆粒狀，可見(jiàn)2-3個(gè)核仁靠近核膜下()，核分裂相多見(jiàn) H

17、E×200 5 鼻咽部T細(xì)胞性淋巴瘤EBV-EBER原位雜交，腫瘤細(xì)胞核陽(yáng)性 原位雜交×200 6 EBV-EBER原位雜交陽(yáng)性病例，EBV LMP-1染色，胞膜及胞漿陽(yáng)性() LSAB法×200也容易誤診為韋格納肉芽腫病。此時(shí)觀察細(xì)胞的多形性很重要，增生細(xì)胞的免疫標(biāo)記更顯示出必要性。韋格納肉芽腫病增生浸潤(rùn)的炎細(xì)胞為混合性且成熟，即B淋巴細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞，組織細(xì)胞等，而T細(xì)胞性淋巴瘤為T(mén)細(xì)胞的克隆性增生。1994年10月在香港大學(xué)舉行的國(guó)際淋巴瘤專(zhuān)題討論會(huì)上，經(jīng)過(guò)東西方如中國(guó)(包括香港地區(qū)、臺(tái)灣省)、美國(guó)、德國(guó)、秘魯、英國(guó)和法國(guó)等國(guó)專(zhuān)家的論證和病例的閱片討論后，正

18、式提出鼻咽部T/NK細(xì)胞性淋巴瘤這一診斷名詞5，并強(qiáng)調(diào)東方發(fā)病率明顯高于西方，本組病例臨床特點(diǎn)及病理組織學(xué)特點(diǎn)與之一致。作者也曾試從細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)，背景變化來(lái)判斷T細(xì)胞淋巴瘤。根據(jù)為：(1) 血管增生明顯，內(nèi)皮細(xì)胞肥胖。(2) 腫瘤細(xì)胞漿淡染或透明。(3) 瘤細(xì)胞核多形性，扭曲，折疊，核染色質(zhì)細(xì)，呈淡灰色。(4) 瘤細(xì)胞浸潤(rùn)血管。本組77例T細(xì)胞淋巴瘤中依據(jù)細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)(核圓、染色質(zhì)粗、核仁清楚等)59例被定為T(mén)細(xì)胞淋巴瘤，與免疫組化對(duì)照符合率為76.6%，35例B細(xì)胞淋巴瘤中29例被定為B細(xì)胞淋巴瘤，與免疫組化對(duì)照符合率為82.9%。高度惡性的病例細(xì)胞分化較差，根據(jù)形態(tài)學(xué)分類(lèi)，無(wú)論T細(xì)胞或B細(xì)

19、胞正確率都較高。錯(cuò)誤的判斷發(fā)生在低度惡性的病例，如小T細(xì)胞淋巴瘤容易與中心細(xì)胞型B細(xì)胞淋巴瘤混淆。盡管正確率較高，但需要豐富的診斷經(jīng)驗(yàn)。作者認(rèn)為在現(xiàn)階段還是應(yīng)該依靠單克隆抗體來(lái)進(jìn)行免疫表型的劃分為好。    2.中國(guó)北方上呼吸道T細(xì)胞性淋巴瘤與EB病毒相關(guān)性很高。EB病毒可以引起傳染性單核細(xì)胞增多癥和組織細(xì)胞性壞死性淋巴結(jié)炎，與鼻咽癌也有很高的相關(guān)性。EB病毒與不同類(lèi)型的淋巴組織惡性腫瘤也有關(guān)。在地方性Burkitt淋巴瘤的腫瘤細(xì)胞中幾乎100%的病例檢測(cè)到EB病毒。在Hodgkin淋巴瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，西方國(guó)家約50%的病例Hodgkin細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)到EB

20、病毒，我國(guó)的研究結(jié)果顯示44%的成人病例和100%的兒童病例EB病毒陽(yáng)性10，11。在EB病毒與鼻咽部淋巴瘤的研究中，不同的研究小組報(bào)道的結(jié)果很相似，尤其是與鼻咽部T細(xì)胞性淋巴瘤的相關(guān)性幾乎為100%，這一結(jié)論已得到國(guó)際公認(rèn)5。本組研究上呼吸道T細(xì)胞性淋巴瘤中EB病毒編碼的mRNA的檢出為48/75例(64.0%)，而B(niǎo)細(xì)胞性淋巴瘤EB病毒檢出為6/26例(23.1%)，明顯低于T細(xì)胞性淋巴瘤。EBER的檢測(cè)在鼻咽T細(xì)胞性淋巴瘤的診斷中有重要意義，尤其在組織非常少、壞死嚴(yán)重難以確診時(shí)，EBER的高陽(yáng)性率可以增加診斷淋巴瘤的信心。作者經(jīng)過(guò)多年對(duì)非鼻咽部疾病死亡病例的鼻咽粘膜、手術(shù)摘除的鼻息肉和扁

21、桃體、鼻咽粘膜慢性炎標(biāo)本進(jìn)行EBV-EBER的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性病例極少，且其內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞最多的病例僅105個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞，占全部細(xì)胞的1%左右。而T細(xì)胞淋巴瘤的EBV陽(yáng)性病例陽(yáng)性細(xì)胞多在40%左右。    人們普遍認(rèn)為，鼻咽部淋巴瘤中EB病毒的高檢出率是因?yàn)楸茄什渴荅B病毒的易感部位。如鼻咽癌、鼻咽T細(xì)胞性淋巴瘤EB病毒檢出率都很高，支持部位的易感性觀點(diǎn)。但非洲地方性的Burkitt淋巴瘤和EB病毒的相關(guān)性為96%，我國(guó)的Hodgkin淋巴瘤和EB病毒的相關(guān)性也很高，二者多數(shù)發(fā)生于非鼻咽部，此結(jié)果似不支持以上觀點(diǎn)。而且有人發(fā)現(xiàn)，EB病毒和淋巴瘤的相關(guān)性依賴(lài)于淋巴瘤

22、的類(lèi)型而不是它的發(fā)生部位，如鼻咽部和非鼻咽部12血管中心型淋巴瘤與EB病毒的相關(guān)性均非常高。EB病毒在鼻咽部淋巴瘤的發(fā)病作用應(yīng)進(jìn)一步研究。    參考文獻(xiàn)    1高子芬，呂懷盛，廖松林，等.鼻咽部原發(fā)性Burkitt淋巴瘤與EB病毒的關(guān)系.中華病理學(xué)雜志，1997，26：106-107.    2Ho FC, Todd D, Loke SL, et al. Clinico-pathologic features of malignant lymphomas in 294 H

23、ong Kong Chinese patients, restrospective study covering on an eight-year period. In J Cancer, 1984, 34：143-148.    3Chan JK, Ng CS, Lau WH, et al. Most nasal/nasopharyngeal lymphomas are peripheral T cell neoplasmas. Am J Surg Pathol, 1987, 11：418-429.    4Su

24、chi T, Lennert K, Tu LY, et al. Histopathology and immunohistochemistry of peripheral T cell lymphoma: a proposal for their classification. J Clin Pathol, 1987, 40：995-1015.    5Jaffe ES, Chan JK, Su IJ, et al. Report of the workshop on nasal and related extranodal angiocentric T/Nature Killer cell lymphomas. Am J Surg Pathol, 1996, 20：103-111.    6邱紅明，蔡俊杰，張素娟，等.中