凝膠電泳緩沖液的配制_第1頁(yè)
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凝膠電泳緩沖液的配制_第3頁(yè)
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1、2測(cè)序凝膠加樣緩沖液98%去離子甲酰胺 10mol/L EDTA(pH8.0) 0.025%二甲苯青FF 0.025%溴酚藍(lán)甲酰胺：許多批號(hào)的試劑級(jí)甲酰胺，其純度符合使用要求，無(wú)須再進(jìn)行處理。不過(guò)，一旦略呈黃色，則應(yīng)用在磁力攪拌器上將甲酰胺與Dowex XG8混合床樹(shù)脂共同攪拌1小時(shí)進(jìn)行去離子處理，并用Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾2次，去離子甲酰胺分裝成小份，充氮存于-70。3常用的電泳緩沖液說(shuō)明：TBE溶液長(zhǎng)時(shí)間存放后會(huì)形成沉淀物，為避免這一問(wèn)題，可在室溫下用玻璃瓶保存5×溶液，出現(xiàn)沉淀后則予以廢棄。以片都以1×TBE作為使用液（即1：5稀釋濃貯液）進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。但

2、0.5×的使用液已具備足夠的緩沖容量。目前幾乎所有的瓊脂糖膠電泳都以1：10稀釋的貯存液作為使用液。進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠垂直槽的緩沖液槽較小， 故通過(guò)緩沖液的電流量通常較大，需要使用1×TBE以提供足夠的緩沖容量。堿性電泳緩沖液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。Tris-甘氨酸緩沖液用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。42×SDS凝膠加樣緩沖液100mmol/L Tris·HCl(6.8)200mmol/L二硫蘇糖醇（DTT）4%SDS（電泳級(jí)）0.2%溴酚藍(lán)20%甘油不含DTT的2×SDS凝膠加樣緩沖液可保存于室溫，應(yīng)在臨用前取1mol/L貯存液現(xiàn)加于上述緩沖液中。5凝膠加樣緩沖液使用以上凝膠加樣緩沖液的目的有三：增大樣品密度；以確保DNA均勻進(jìn)入樣品孔內(nèi)；使樣品呈現(xiàn)顏色，從而使加樣操作更為便利，含有在電塊中能以可預(yù)知速率向陽(yáng)極泳動(dòng)的染料。溴酚藍(lán)在瓊脂糖中移動(dòng)的速率約為二甲苯青FF的2.2倍，而與瓊脂糖濃度無(wú)關(guān)。以0.5×TBF作電泳液時(shí)，溴酚藍(lán)在瓊脂糖中的泳動(dòng)速率約與長(zhǎng)300bp的雙鏈線狀DNA相同，而二甲苯青FF的泳動(dòng)則與長(zhǎng)4kb的雙鏈線狀DNA相同。在瓊脂糖濃度為0.5%1.4%的范圍內(nèi)，這些對(duì)應(yīng)關(guān)系受凝膠濃度變化的影響并不顯著。選用哪一種加樣染料純屬個(gè)人喜惡。但

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