反相高效液相色譜法測定人參健脾片中橙皮苷的含量

1、反相高效液相色譜法測定人參健脾片中橙皮苷的含量                         【摘要】  目的采用反相高效液相色譜（RPHPLC）法測定人參健脾片中橙皮苷的含量。方法采用Kromasil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 m)，以甲醇冰醋酸水（31465）為流動相，流速1.0 ml·min-1，柱溫

2、35，檢測波長283 nm。結(jié)果在0.2282.592 g之間，峰面積與進(jìn)樣量的線性關(guān)系為Y=1.0×106X3.72×103，（r=0.999 6，n=6），平均回收率為98.53 %, RSD=0.87%（n6）。測得3批樣品中橙皮苷的含量分別為1.38，1.36，1.35 mg/片。結(jié)論 所建方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于人參健脾片的質(zhì)量控制。 【關(guān)鍵詞】  人參健脾片； 橙皮苷；反相高效液相色譜法Determination of Hesperidi in Renshenjianpi Tablet by RPHPLCSHANG Yuan hong， LIU

3、 Yuan ，TIAN Jin feng1.Ethnic Pharmaceutical Institute of Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041,China;2. Southwest University, Chongqing 400715, ChinaAbstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of hesperidi from Renshenjianpi Tablet. MethodsThe column was kromasil

4、 C18 (200 mm×4.6 mm,5 m).The mobile phase consisted of methanolacetic acidwater (31：4：65 ) with the flow rate of 1.0  ml·min-1 and the UV detector at 283 nm. ResultsThe method showed a good relationship in the ranges of 0.2282.592 g (r=0.999 6) for hesperidi, the average recovery was

5、98.53%（RSD=0.87%）.The hesperidi contents of three batch samples were 1.38 mg ,1.36 mg ,1.35 mg respectively. ConclusionThis method is simple, reproducible and suitable for the determination of the contents of hesperidi in Renshen Jianpi Tablet .Key words：Renshenjianpi Tablet;    Hespe

6、ridi;    RPHPLC    人參健脾片由人參、陳皮、青皮、甘草、當(dāng)歸、枳殼等17味中藥組成。具有補(bǔ)氣健脾，開胃消食之功效。用于脾虛濕困所致的食少便溏，或吐或?yàn)a，脘腹肚滿，四肢乏力，面色萎黃等癥。本品處方中陳皮、青皮、枳殼均含有橙皮苷成分，其橙皮苷的含量測定方法較多1,2，但筆者到目前未見對該制劑中這3味藥材的橙皮苷含量控制的文獻(xiàn)報道。所以本文擬建立高效液相色譜法測定制劑中的橙皮苷含量方法，為控制其制劑質(zhì)量提供了一定的科學(xué)依據(jù)。1 儀器與試藥    美國SSI液相色譜儀（浙江大學(xué)N2000色譜工作

7、站）；德國賽多利斯BP211D電子天平；上海波龍電子儀器有限公司USC502超聲波清洗器。    橙皮苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供（供含量測定用，批號721200211）；甲醇為色譜純；水為重蒸水，其余試劑為分析純。人參健脾片（批號20040907，20040908，20040909）。2  方法與結(jié)果2.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)Kromasil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 m)，流動相為甲醇冰醋酸水（31465）；流速為1 ml·min-1，柱溫35 ，檢測波長為283 nm，進(jìn)樣量10 l。橙皮苷峰與

8、其他峰達(dá)到基線分離，峰形對稱，橙皮苷峰與相鄰峰分離度大于1.5，按橙皮苷峰計(jì)，色譜柱理論塔板數(shù)不低于3×103，色譜圖見圖1。按上述色譜條件，進(jìn)對照品溶液、供試品溶液、三陰性對照溶液各10 l，繪制色譜圖。結(jié)果見圖1。2.2 對照品溶液的制備精密稱取橙皮苷對照品1.44 mg，置10 ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得0.144 ml·min-1的對照品溶液。2.3 樣品溶液的制備取本品5片，除去包衣，研細(xì)，精密稱定1.0 g，置平底燒瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，稱定重量，加熱回流30 min，取出放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置取上清液微孔

9、濾膜（0.45 m）濾過，取續(xù)濾液作供試品溶液。2.4  缺陳皮、青皮、枳殼三陰性對照溶液精密稱取缺陳皮、青皮、枳殼三陰性樣品1.0 g，按供試品溶液的制備方法制得缺陳皮、青皮、枳殼三陰性對照溶液。                             2.5   方法學(xué)考察2.5.1

10、線性關(guān)系的考察精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成不同濃度的對照品溶液，搖勻，作為對照品溶液，分別再按“2. 1”項(xiàng)色譜條件精密進(jìn)樣0.228，0.864，1.440 ，2.016，2.592 g，測定峰面積。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（C）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=1.0×106X3.72×103，（r=0.999 6，n=6），橙皮苷對照品進(jìn)樣量在0.2282.592 g范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好。2.5.2  精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取同一對照品溶液，在上述同一色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10 l，測定RSD0.42%（n5），表明精密度良好。

11、2.5.3  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液在0，4，8，12，16 h分別進(jìn)樣，進(jìn)行測定，結(jié)果其RSD0.36%，表明供試品溶液中橙皮苷在16 h內(nèi)含量穩(wěn)定。2.5.4  重復(fù)性實(shí)驗(yàn)分別精密稱取同一批號樣品5份，按供試品溶液制備方法制備，依法進(jìn)樣測定，結(jié)果RSD0.29%（n5），表明本方法重復(fù)性良好。2.5.5  回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量的樣品0.5 g，6份，定量加入一定量的橙皮苷對照品，按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣，測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。2.5.6  樣品測定結(jié)果分別稱取不同批號的樣品，再分別按“2.3”項(xiàng)下操作，采用“2.1”項(xiàng)下方法

12、進(jìn)行測定，3批樣品中橙皮苷含量分別為1.38，1.36和1.35 mg/片。3  討論3.1  人參健脾片方中藥味較多，成分復(fù)雜，可供選擇的指標(biāo)成分較多，但成分互相分離較困難，考慮到陳皮、青皮、枳殼為浸膏入藥，且含有相同成分橙皮苷，因此確定測定橙皮苷含量作為控制該藥品質(zhì)量的指標(biāo)。表1  加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）3.2  對制劑陳皮、青皮、枳殼三陰性含量控制的文獻(xiàn)報道較少，在工藝研究中應(yīng)考察各藥材相應(yīng)所測成分的轉(zhuǎn)移率高低，從而為制劑提供較好的科學(xué)依據(jù)。3.3  在流動相的選擇中，曾考察了甲醇冰醋酸水（31465），乙腈水磷酸(2l07900.1)1，0.3%磷酸溶液乙腈(8119) 2，流速1.0 ml·min-1，柱溫35，以KromasilC18柱（250 mm×4.6 mm，5 m）柱為分析柱。結(jié)果表明，本文采用的甲醇-冰醋酸-水（31465）為流動相的橙皮苷峰已達(dá)基線分離，峰形對稱，分離度較好。3.4  文