藥物基因檢測ppt課件

1、1.1藥物基因組學(xué)的概念2北京精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)服務(wù)平臺(tái)3藥物基因檢測應(yīng)用示例4 總結(jié)21藥物基因組學(xué)的概念3相同病癥相同病癥相同治療藥物相同治療藥物相同劑量相同劑量毒副反應(yīng)毒副反應(yīng)治療作用治療作用不起藥效不起藥效常見臨床藥物治療常見臨床藥物治療有效率有效率哮喘、糖尿病、抑郁癥等哮喘、糖尿病、抑郁癥等 60%60%丙肝、骨質(zhì)疏松、風(fēng)濕性關(guān)丙肝、骨質(zhì)疏松、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎節(jié)炎 50%50%抗腫瘤藥物抗腫瘤藥物 24%24%藥物治療的藥物治療的個(gè)體差異個(gè)體差異現(xiàn)象無法用傳統(tǒng)藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)解釋現(xiàn)象無法用傳統(tǒng)藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)解釋4+藥物基因組學(xué)是“藥物反應(yīng)藥物反應(yīng)”的基因組學(xué)的基因組學(xué)，以藥物遺傳多態(tài)性為基礎(chǔ)，從基因

2、組整體角度研究藥物與遺傳的關(guān)系，主要以藥物效應(yīng)和安全性為目標(biāo)，研究各種基因突變與藥效與安全性之間的關(guān)系，其目的是建立基于評(píng)價(jià)疾病易感性和選擇藥物治療方案的個(gè)體化患者特征的遺傳變異標(biāo)志。+藥代動(dòng)力學(xué)：藥代動(dòng)力學(xué)：研究藥物在體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄規(guī)律（確定給藥劑量和間隔時(shí)間的依據(jù))。+藥效動(dòng)力學(xué)：藥效動(dòng)力學(xué)：研究藥物對機(jī)體的作用、作用規(guī)律和作用機(jī)制。+精準(zhǔn)治療：精準(zhǔn)治療：從基因組出發(fā)，研究藥物與基因組結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系，指導(dǎo)臨床用藥，達(dá)到個(gè)體化治療目標(biāo)。55JAMA, 2001; 286: 2270-2279藥物療效和毒性的個(gè)體差異藥物療效和毒性的個(gè)體差異基因檢測基因檢測基因基因變異變異 ( (單

3、核苷酸單核苷酸多態(tài)性多態(tài)性-SNP -SNP ）藥物代謝酶藥物代謝酶藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體藥物靶點(diǎn)藥物靶點(diǎn)藥代動(dòng)力學(xué)藥代動(dòng)力學(xué)藥效動(dòng)力學(xué)藥效動(dòng)力學(xué)678 至2017年4月5日，各國基因相關(guān)藥物達(dá)251個(gè)p 美國223個(gè)，歐盟92個(gè)，日本53個(gè)，加拿大109個(gè)9 我國2012版臨床藥學(xué)重點(diǎn)?？圃u(píng)分標(biāo)準(zhǔn)中，均要求三甲醫(yī)院開展基于藥物基因檢測的個(gè)體化藥學(xué)服務(wù)。 SFDA已經(jīng)更改很多藥品的說明書，除了靶向藥物以外，普通化學(xué)藥物，如得理多（卡馬西平）等，已經(jīng)在說明書中明確標(biāo)示：HLA-B 1502基因陽性者，禁止使用卡馬西平。101112.+2017年廣東省高水平醫(yī)院建高水平醫(yī)院建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)中，在藥學(xué)部

4、的服務(wù)能力評(píng)分指標(biāo)中明確提出：用藥相關(guān)基因檢測人數(shù)600，品種數(shù)6，基因個(gè)體化治療方案設(shè)計(jì)例數(shù)300。131415.2北京精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)服務(wù)平臺(tái)16A寡核苷酸探針：寡核苷酸探針：3端接有熒光素（紅圈），5端接有淬滅基團(tuán)（紅點(diǎn)）未雜交時(shí)，成自身環(huán)狀，不發(fā)出熒光。35Q+A35=T模模板板G有特異核酸SNP位點(diǎn)的模板雜交后，探針打開，淬滅基團(tuán)遠(yuǎn)離熒光素，發(fā)出熒光17由于測序探針是熒光素標(biāo)記的，利用熒光檢測設(shè)備即可直接檢測雜交染色的結(jié)果，熒光檢測儀高靈敏地捕捉雜交測序熒光信號(hào)的變化，從而完成目標(biāo)序列的精準(zhǔn)檢測，由此形成了新一代雜交測序，即數(shù)字熒光分析雜交/原位雜交熒光染色脫氧核糖核酸測序（簡稱“數(shù)字熒光分

5、子雜交/雜交測序技術(shù)”）體系。該技術(shù)要求更多的模板核酸（要求不低于10000拷貝）才能完成測序，但不需要通過PCR環(huán)節(jié)。18探針雜交探針雜交采集標(biāo)本采集標(biāo)本提取基因組提取基因組DNA/RNADNA/RNAPCRPCR擴(kuò)增擴(kuò)增顯色顯色/掃描掃描電泳檢測電泳檢測純化純化PCRPCR產(chǎn)產(chǎn)物物基因芯片基因芯片焦磷酸測序焦磷酸測序雙脫氧標(biāo)記雙脫氧標(biāo)記毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳焦磷酸測序焦磷酸測序雙脫氧測序、雙脫氧測序、SangerSangerRT-PCRRT-PCR實(shí)時(shí)熒光實(shí)時(shí)熒光PCRPCR血液標(biāo)本血液標(biāo)本白細(xì)胞白細(xì)胞染色體核型分析染色體核型分析或雜交測序或雜交測序（系統(tǒng)自動(dòng)完成）（系統(tǒng)自動(dòng)完成）數(shù)字熒光分

6、子雜交數(shù)字熒光分子雜交和雜交測序和雜交測序出現(xiàn)污染的高風(fēng)險(xiǎn)環(huán)節(jié)出現(xiàn)污染的高風(fēng)險(xiǎn)環(huán)節(jié) 低風(fēng)險(xiǎn)環(huán)節(jié)低風(fēng)險(xiǎn)環(huán)節(jié)避開避開PCR環(huán)節(jié)，前處理簡單環(huán)節(jié)，前處理簡單 * * 金標(biāo)準(zhǔn)金標(biāo)準(zhǔn)191.不怕污染不怕污染:少量的異源DNA污染的信號(hào)很低，不會(huì)影響測序準(zhǔn)確性。例如500拷貝的異源DNA污染，在PCR擴(kuò)增中絕對是災(zāi)難級(jí)的，但在雜交測序中，異源信號(hào)的強(qiáng)度不到總信號(hào)強(qiáng)度的10%，則可以作為本底信號(hào)而被消除；2.簡便：簡便：雜交測序沒有繁瑣的標(biāo)本DNA提取和PCR擴(kuò)增產(chǎn)物提取環(huán)節(jié)，將臨床標(biāo)本簡單處理即可進(jìn)行雜交測序，因此測序速度非?？?，從拿到臨床標(biāo)本算起，約3小時(shí)即由檢測儀自動(dòng)報(bào)告測序結(jié)果。20該技術(shù)初期對進(jìn)行

7、方法學(xué)準(zhǔn)確性驗(yàn)證。與Sanger法進(jìn)行比較，一致性為99%。21+心腦血管科：心腦血管科：氯吡格雷、阿司匹林、華法林、他汀類、硝酸甘油、ACE-I類、美托洛爾、葉酸、卡馬西平、苯妥因等。+腫瘤科腫瘤科：嘧啶類、鉑類、紫杉醇、伊立替康、他莫昔芬、甲氨蝶呤等。+心理科心理科：氯氮卓、氯氮平、奧氮平、氟西汀、文拉法辛、西酞普蘭、阿米替林、依地普侖等。+消化科：消化科：PPI類、環(huán)孢素A、硫唑嘌呤、呋塞米和螺內(nèi)酯等。+呼吸科呼吸科：吸入性糖皮質(zhì)激素、短/長效受體激動(dòng)劑、伏立康唑等。+內(nèi)分泌科：內(nèi)分泌科：磺脲類、二甲雙胍和胰島素等。+婦產(chǎn)科：婦產(chǎn)科：葉酸(胎兒神經(jīng)管發(fā)育異常、習(xí)慣性流產(chǎn)等）。+風(fēng)濕免疫科

8、風(fēng)濕免疫科/腎內(nèi)科腎內(nèi)科/血液科：血液科：他克莫司、環(huán)磷酰胺、別嘌醇、硫唑嘌呤等。+.22+至2016年底，覆蓋醫(yī)院284家。23+南方醫(yī)院：南方醫(yī)院：卡馬西平、苯妥英鈉、磷苯妥因、奧卡西平、巰嘌呤、硫唑嘌呤、糖皮質(zhì)激素沖擊、甲氨蝶呤、氯吡格雷、阿司匹林、華法林、他克莫司、別嘌醇、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、奧美拉唑、泮托拉唑、蘭索拉唑、埃索美拉唑、葉酸、新生兒自閉癥、孕中及產(chǎn)后抑郁、胎兒神經(jīng)發(fā)育異常、習(xí)慣性流產(chǎn)、人工受精。+中山孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院：中山孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院：卡馬西平、巰嘌呤、硫唑嘌呤、別嘌醇、奧美拉唑、糖皮質(zhì)激素沖擊、甲氨蝶呤、他克莫司、環(huán)孢素、腎移植排斥風(fēng)險(xiǎn)、霉酚酸、丙戊酸、環(huán)磷酰胺、替莫唑

9、胺、抗胸腺細(xì)胞球蛋白ATG。+中大五院：中大五院：+氯吡格雷、華法林、阿司匹林、他汀、伏立康唑、環(huán)孢素、他克莫司、糖皮質(zhì)激素、奧氮平、氯氮平、奮乃靜、利培酮、文拉法辛、丙戊酸、別嘌醇、乙醇風(fēng)險(xiǎn)等。+.24分子診斷檢測樣本：1、血液樣本 2、組織樣本血液樣本：23ml靜脈全血（EDTA抗凝紫管）白細(xì)胞富集耀金分測序反應(yīng)耀金保個(gè)體化藥學(xué)基因檢測主要步驟個(gè)體化藥學(xué)基因檢測主要步驟25該項(xiàng)目污染小，實(shí)驗(yàn)室要求為通風(fēng)通水的普通實(shí)驗(yàn)室條件即可，不需要PCR認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室。我院開展此項(xiàng)新技術(shù)、新項(xiàng)目需新添置的我院開展此項(xiàng)新技術(shù)、新項(xiàng)目需新添置的設(shè)備設(shè)備1、熒光分析儀、熒光分析儀2、離心機(jī)、離心機(jī)3000R/M3

10、000R/M3、冰箱、冰箱4、普通、普通PCPC機(jī)機(jī)5、移液槍、移液槍* *3 36、打印機(jī)、打印機(jī)開展此項(xiàng)新技術(shù)、新項(xiàng)目所需新購置的開展此項(xiàng)新技術(shù)、新項(xiàng)目所需新購置的試劑試劑1、耀金分、耀金分 （耀金寶等（耀金寶等 為贈(zèng)送）為贈(zèng)送）261、血液樣本：2-3ml靜脈全血(不需空腹)，使用一次性真空抽血管（EDTA抗凝紫帽管）采集，于4低溫保存，保存時(shí)間不宜超過24h。2、使用預(yù)處理液NH4CL裂解紅細(xì)胞，離心，獲得白細(xì)胞。2、將白細(xì)胞溶解到耀金寶中，再取1.5微升，加入耀金分試劑管中。3、將加入了白細(xì)胞裂解液的耀金分試劑，放置入熒光檢測儀中。4、熒光檢測儀自動(dòng)完成染色體核型分析和基因序列測定。5、熒光檢測儀在2.5小時(shí)內(nèi)自動(dòng)報(bào)告基因型結(jié)果。6、藥師解讀報(bào)告，給出個(gè)體化用藥建議。273藥物基因檢測應(yīng)用示例2829氯吡格雷是一種血小板聚集抑制劑。可用于防治心肌梗死，缺血性腦血栓，閉塞性脈管炎和動(dòng)脈粥樣硬化及血栓栓塞引起的并發(fā)癥。30氯氯吡吡格格雷雷代代謝謝路路徑徑3132 CYP2C19的表型多態(tài)性有明顯的種族差異 白種人，弱代謝者發(fā)生率僅為3 韓國人，弱代謝者發(fā)生率為13 津巴布韋黑人中，弱代謝者發(fā)生率僅約4