L-精氨酸對大鼠胰腺移植缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制

1、L-精氨酸對大鼠胰腺移植缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制         06-07-01 14:11:00     編輯：studa20       作者：陳 浩1，李壽柏2，程韻楓3，胡偉明4，田伯樂4，張肇達(dá)【摘要】  目的  探討L-精氨酸 (L-Arginine，L-Arg)對大鼠胰腺移植缺血再灌注(I/R)損傷的影響及其機(jī)制。方法  SD大鼠作為供、受體行胰腺移植術(shù)，給予不同

2、方式處理：假手術(shù)組(Sham)：只行開腹術(shù)；對照組(Control)：只行胰腺移植術(shù)，不行預(yù)處理；缺血預(yù)處理組(IPC)：在供胰切取前阻斷血供10min，然后再灌注10min；L-精氨酸組(L-Arg)：行胰腺移植術(shù)，再灌注前先經(jīng)下腔靜脈注射L-Arg 10mg/kg體重；L-硝基精氨酸甲酯組(L-NAME)：供胰切取時(shí)阻斷血供10min，再灌注10min；然后行移植術(shù)，在再灌注前，先經(jīng)下腔靜脈緩慢注射L-NAME 10mg/kg體重。各組手術(shù)完成后，于再灌注6h檢測血清淀粉酶、腫瘤壞死因子-(TNF-)和一氧化氮(NO)水平，胰腺細(xì)胞凋亡指數(shù)、胰腺細(xì)胞bcl-2蛋白表達(dá)情況和胰腺組織病理改變

3、。結(jié)果  L-Arg和IPC都降低TNF-水平(P<0.01)和細(xì)胞凋亡水平(P<0.01)，NO水平升高(P<0.01)。而L-NAME可阻斷該保護(hù)效應(yīng)。IPC和L-Arg均能激活bcl-2蛋白的表達(dá)。結(jié)論  L-Arg可以模擬IPC對大鼠胰腺移植I/R損傷的保護(hù)作用，其機(jī)制與合成NO，激活bcl-2基因的表達(dá)有關(guān)。        【關(guān)鍵詞】  缺血；再灌注損傷；胰腺移植；一氧化氮         

4、;       【Abstract】  Objective  To study the protective effect of L-Arginine on ischemia reperfusion (I/R) injury associated with rat pancreas transplantation and to define a possible mechanism.Methods  On the model of pancreas transplantation， male SD rat

5、s were randomly assigned to five groups (20 rats in each group)： Sham group(S)： laparotomy only； Control group(C)： pancreas transplantation only； IPC group： donor pancreas underwent ischemic preconditioning (IPC) procedure (10-min ischemia and 10-min reperfusion) before harvest and transplant；L-Argi

6、nine group： L-Arg (10mg/kg) was injected into recipient animal via inferior vena cava before transplant； L-NAME group： donor pancreas underwent (IPC) procedure (10-min ischemia and 10-min reperfusion) before harvest and L-NAME (10mg/kg) was injected into recipient animal via inferior vena cava befor

7、e transplant. Serum amylase， tumor necrosis factor-(TNF-) and nitric oxide (NO) levels， apoptosis index of pancreas cells， bcl-2 protein and pancreatic pathological changes were determined 6 h after the operation was completed.Results  The significantly decreased values of TNF- and pancreas cel

8、ls apoptosis levels but significantly increased NO content showed that L-arginine preconditioning can simulates the protective effects of IPC against I/R injury associated with pancreas transplantation， L-NAME can attenuate these protective effects. Both the IPC and L-arginine can decrease the apopt

9、osis of pancreas cells by increasing bcl-2 gene expression.Conclusion  L-arginine can simulate the protective effects of IPC against I/R injury associated with pancreas transplantation by producing NO and stimulating bcl-2 gene expression.        【Key words】 

10、ischemia； reperfusion injury； pancreas transplantation； nitric oxide        缺血預(yù)處理(IPC)能有效預(yù)防組織器官的缺血再灌注(I/R)損傷，但其應(yīng)用并不方便。預(yù)處理研究的重要進(jìn)展之一，是從缺血預(yù)處理發(fā)展到藥物預(yù)處理，即用藥物代替缺血刺激，產(chǎn)生預(yù)處理樣保護(hù)效應(yīng)。        本實(shí)驗(yàn)在大鼠全胰十二指腸移植模型基礎(chǔ)上，觀察一氧化氮(NO)的前體物質(zhì)L-精氨酸(L-Arginine，L-Arg)對I/R損

11、傷的影響，并探討其可能機(jī)制。        1  材料與方法        1.1  動(dòng)物分組和操作  雄性SD大鼠，體重250300g，由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。將大鼠隨機(jī)分為5組(n=20，供受體各10只)：假手術(shù)組(Sham組)：只行開腹術(shù)；對照組(Control組)：只行胰腺移植術(shù)，不行預(yù)處理；缺血預(yù)處理組(IPC組)：在供胰切取前作缺血預(yù)處理(阻斷血供10min，然后再灌注10min)；L-精氨酸組(L-Arg組)：行胰腺

12、移植術(shù)，在供胰再灌注前，先經(jīng)下腔靜脈注射L-Arg (Sigma公司)10mg/kg體重；L-硝基精氨酸甲酯組(L-NAME組)：供胰切取前作缺血預(yù)處理(阻斷血供10 min，再灌注10 min)，然后行移植術(shù)，在供胰再灌注前，先經(jīng)下腔靜脈緩慢注射L-NAME (Sigma公司) 10mg/kg體重。 大鼠全胰十二指腸移植模型參照Lee等的方法1。大鼠于再灌注6h時(shí)，開腹取靜脈血及胰腺組織送檢。        1.2  觀察指標(biāo)及檢測方法   (1)血清淀粉酶測定：由四川大學(xué)華西醫(yī)院檢驗(yàn)科日立2000型全

13、身自動(dòng)生化分析儀測定。(2)血NO水平，按一氧化氮合酶酶法試劑盒 (晶美生物工程有限公司)說明測定。(3)血TNF-水平，按大鼠TNF- ELISA試劑盒(晶美生物工程有限公司)說明測定。(4)胰腺bcl-2蛋白表達(dá)水平，按bcl-2免疫組化染色試劑盒(博士德生物工程有限公司)說明測定，結(jié)果判斷：以細(xì)胞核膜、胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為bcl-2基因蛋白表達(dá)陽性。根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度與陽性對照片()的比較分為強(qiáng)陽性()，中等度陽性()，弱陽性()和陰性()；在同一切片中陽性細(xì)胞總數(shù)30%判為陽性。如強(qiáng)陽性或（和）中等度陽性細(xì)胞總數(shù)>30%判為過表達(dá)。(5)胰腺細(xì)胞凋亡指數(shù)，由四川大學(xué)華西醫(yī)院腫瘤中心

14、流式細(xì)胞儀檢測。 (6)胰腺病理，標(biāo)本HE染色，送四川大學(xué)華西醫(yī)院病理科。        1.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法  所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用方差分析和q檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有顯著性標(biāo)準(zhǔn)。        2  結(jié)果        2.1  血清淀粉酶  各移植組水平明顯高于Sham組（S組，P<0.01）；IPC組、L-Arg組水平略低于Control組（C組）和L-NAME組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)