代寫醫(yī)學(xué)論文 四棱豆總黃酮含量的研究

1、代寫醫(yī)學(xué)論文 四棱豆總黃酮含量的研究【關(guān)鍵詞】 四棱豆；,總黃酮；,提取工藝；,含量摘要：目的研究了四棱豆總黃酮的提取工藝和含量。方法采用正交實驗分析和分光光度法。結(jié)果四棱豆總黃酮的最佳提取工藝是水浴溫度為85，提取時間為6 h，提取劑乙醇濃度為80%，并且該提取方法穩(wěn)定性好，精密度和回收率高；以蘆丁為對照品，測得四棱豆根、莖、葉、花、果實、種子和整株的總黃酮含量分別為0.73%，0.93%，2.30%，3.96%，2.88%，3.12%和2.44%。結(jié)論該研究為四棱豆的綜合開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)，具有重要的理論和實踐指導(dǎo)意義。關(guān)鍵詞：四棱豆； 總黃酮； 提取工藝； 含量Study on th

2、e Flavonoid Content in Winged BeanQUAN Miaohua ， CHEN Dongming(Huaihua Biological College, Huaihua Hunan, 418008，China)Abstract:Objective To study the extraction technology and the content of the flavonoid in winged bean. MethodsThe flavonoid content in winged bean was studied by ultravioletvisible

3、spectrophotometry and the orthogonal experiments. ResultsThe analytical result showed that the optimum extracting conditions were: extracting temperature 85,extracting time 6h,extraction reagent 80% alcohol.And the stability of the method was very good,meanwhile the precision and the rate of recover

4、y were high. With rutin as standard material,we drew a conclusion that the total contents of flavonoids in the tuberous roots ,stems,leaves,flowers , tender pods,seeds and the whole plant of winged bean were 0.73%,0.93%,2.30%,3.96%,2.88%,3.12% and 2.44% ,respectively.ConclusionThe study provides a s

5、cientific basis for the development of winged bean,and has important guiding significance in both theory and practice.Key words：Winged bean; Flavonoids ; Extracting conditions; Content 四棱豆Psophocarpus tetragonolobus(L) DC.，又名翼豆、翅豆、楊桃豆等，是豆科蝶形花亞科四棱豆屬的一年生或多年生草本植物。它原產(chǎn)于熱帶，主要分布在巴布亞新幾內(nèi)亞、印度尼西亞、菲律賓、馬來西亞等國家和地

6、區(qū)；在我國大部分地區(qū)，如云南、廣西、廣東和海南、湖南、湖北、河南、福建等省區(qū)，均可種植栽培。它的根、莖、葉、花、豆莢和種子均含有豐富的營養(yǎng)成分，是一種集食用兼藥用的高蛋白作物，其營養(yǎng)價值、經(jīng)濟(jì)價值和藥用價值已引起世界性的重視和研究，成為許多國家爭相開發(fā)利用的植物資源1。迄今有關(guān)四棱豆總黃酮類化合物的含量測定和提取工藝等方面研究未見報道，為充分利用這一植物資源，本文對其開展研究，旨在為四棱豆的進(jìn)一步綜合開發(fā)利用提供理論和實驗依據(jù)。1 材料與方法1.1 材料四棱豆種子于200303由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院品種資源所提供，先后種植于懷化石門基地、懷化通道基地和懷化學(xué)院生物園。該實驗材料（根、莖、葉、花、果實

7、和種子）于200510采自于懷化學(xué)院生物園，去雜洗凈后，置于65烘箱中干燥，用微型粉碎機(jī)粉碎至60目備用。1.2 儀器與試劑 752型紫外可見分光光度計(上海分析儀器總廠)；AL104分析天平（梅特勒托利多儀器有限公司）；FN1012A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(長沙儀器儀表廠制造)；1810B型石英自動雙重純水器（金南儀器廠）；索式提取器。 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（99.99%）（中國藥品生物制品鑒定所）；乙醇、NaOH、NaNO2、Al（NO3）3等試劑均為分析純。1.3 方法241.3.1 最大吸收波長的選擇以65%乙醇作為溶劑，以 NaOH，NaNO2，Al（NO3）3作為顯色劑，用752型紫外可見分光光度

8、計測定不同光波波長（400600 nm）下的吸光度，以光波波長為橫軸，以吸光度 (A)為縱軸，繪制四棱豆（葉）提取液的吸收曲線。結(jié)果見圖1。1.3.2 提取方法的正交實驗方案 在實際操作中，考慮到各種因素之間的影響，因此主要對乙醇的濃度、浸提溫度和提取時間三因素四個水平進(jìn)行正交實驗，以便測定不同條件下四棱豆總黃酮的含量。正交實驗方案見表1。1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備準(zhǔn)確稱取蘆丁對照品26.80 mg，用65%乙醇定容至100 ml，即蘆丁對照液的濃度為0.268 0 mg/ ml，作為儲備液。精確吸取上述儲備液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml分別放置于5個25 ml容量瓶中，分別加

9、入5% NaNO2溶液1.0 ml，放置6min后，加入5% Al(NO3)3溶液1.0ml，室溫放置6 min后，再加入5% NaOH溶液10 ml，用65%乙醇溶液定容,搖勻，堿性條件下顯色15 min后,用1 cm比色皿,以試劑空白為參比,于最大吸收波長（500 nm）處測定吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（如圖2）。所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線回追方程為 A=6.857C0.002，R =0.999 4，線性關(guān)系良好，并且由此可推導(dǎo)出公式：C=（A+0.002）/6.857。1.3.4 四棱豆總黃酮的測定方法 準(zhǔn)確稱取四棱豆各器官（根、莖、葉、花、果實和種子）及整株樣品各2.000 0 g，用索氏提取器加最適

10、提取劑（80%乙醇）100 ml在85水浴溫度條件下回流提取6 h，冷卻后，用80%乙醇定容至100 ml，備用。準(zhǔn)確移取各樣品液2組，每份1 ml，置于25 ml容量瓶中，其中一組直接以65%乙醇定容至25 ml作空白對照；另一組按上述方法進(jìn)行顯色測定。圖1 四棱豆總黃酮的吸收光譜（略）圖2 蘆丁樣品標(biāo)準(zhǔn)曲線（略）1.3.5 精密度實驗精密稱取干燥的四棱豆（葉）粉末6份，2.000 0 g/份，按1.3.4實驗方法測定其吸光度（A）。表1 因素水平（略）1.3.6 穩(wěn)定性實驗 以四棱豆（葉）提取液為樣品液，測定顯色液穩(wěn)定性和提取液穩(wěn)定性。顯色液穩(wěn)定性實驗：每間隔20 min測1次吸光度，共測

11、定6次；提取液穩(wěn)定性實驗：每5 d測定1次，共測定6次。1.3.7 加樣回收率的測定 準(zhǔn)確移取上述四棱豆（葉）提取液5份，1.0 ml/份，分別置于5個25 ml的容量瓶中，并且分別加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲備液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，即分別加入蘆丁對照品0.268 0 ，0.536 0，0.804 0，1.072 0，1.340 0 mg。然后按上述顯色方法進(jìn)行比色測定。2 結(jié)果與分析2.1 最大吸收波長由圖1可知，四棱豆黃酮提取液硝酸鋁顯色后穩(wěn)定的最大吸收峰值在500 nm波長處。因此，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線及四棱豆各樣品黃酮的比色測定均在500 nm波長處進(jìn)行。2.2 正交實驗結(jié)果與分析

12、 準(zhǔn)確稱取四棱豆（果實）干燥粉末16份，每份2.000 0 g，分4組，按表2配置方案制備黃酮提取液100 ml，并分別取1.0 ml黃酮提取液置于25 ml容量瓶中，按1.3.3實驗的顯色方法測定其吸光度。根據(jù)表2中R1，R2，R3，R4和 R值分析可知，影響總黃酮提取得率的所選因素的主次依次為提取時間乙醇濃度水浴溫度，提取四棱豆總黃酮的最佳提取工藝為A3B3C3，即水浴溫度為85，提取時間為6 h，乙醇濃度為80%。2.3 四棱豆不同部位的總黃酮含量比較 分別測定四棱豆各器官及整株的吸光度（A值），3份/樣品，取吸光度的平均值（）計算各樣品總黃酮的百分含量（W%），并且統(tǒng)計各樣品的相對標(biāo)準(zhǔn)

13、偏差（RSD%）。四棱豆不同部位的總黃酮含量比較,詳見表3。2.4 精密度實驗從表4可以看出，6份樣品吸光度的平均值為0.124，樣品測定結(jié)果的精密度較高，重現(xiàn)性較好，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.88%。2.5 穩(wěn)定性實驗從表5可以看出，提取液在30 d以內(nèi)保持基本穩(wěn)定,其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.78%，提取后30 d內(nèi)的吸光度平均值（0.120）與提取時 (0.124)產(chǎn)生偏差僅為3.23%，說明樣品提取液的穩(wěn)定性比較好；樣品顯色液在2 h以內(nèi)保持基本穩(wěn)定，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.37%，樣品顯色后2 h內(nèi)的吸光度平均值（0.122）與提取時 （0.124）產(chǎn)生偏差僅為1.61%，說明顯色液的穩(wěn)定性比較好，同

14、時也說明了測定結(jié)果比較可靠，該實驗方法可操作性強(qiáng)。表2 正交實驗與結(jié)果（略）表3 四陵豆不同部位的總黃酮含量比較（略）表4 精密度實驗（略）表5 樣品穩(wěn)定性（略）2.6 加樣回收率的實驗 為了精確評價所用方法的準(zhǔn)確度，進(jìn)行了回收實驗，結(jié)果表明：5個樣品的回收率均在95.1%以上（95.1%98.6%），平均回收率為96.78%。結(jié)果見表6。3 討論3.1 提取工藝通過正交實驗分析方法確定了四棱豆總黃酮的最佳提取工藝為A3B3C3，即浸提溫度為85，提取時間為6h，提取劑乙醇濃度為80%。并且在1015環(huán)境溫度條件下，該樣品提取液在30 d以內(nèi)保持基本穩(wěn)定，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.29%，說明樣品提

15、取液的穩(wěn)定性比較好，并且該提取方法簡單，效率高，可操作性強(qiáng)。同時，根據(jù)提取液穩(wěn)定性的特點，在進(jìn)行四棱豆總黃酮的提取加工過程中，可考慮利用提取劑（80%乙醇）在室溫下進(jìn)行較長時間的浸泡抽提，具有重要的參考價值。表6 四棱豆總黃酮回收率測定（略）3.2 四棱豆總黃酮的含量 通過上述分析可知，采用分光光度法測定四棱豆總黃酮含量時，其提取液硝酸鋁顯色后最大吸收峰值在500nm波長處，并且首次測得四棱豆根、莖、葉、花、果實、種子和整株的總黃酮含量分別為0.73%，0.93%，2.30%，3.96%，2.88%，3.12%和2.44%，其中花的總黃酮含量最高為3.96%。這為四棱豆具有清熱解毒、消炎止痛等多種藥用功效，提供了理論依據(jù)。同時，四棱豆的適應(yīng)性強(qiáng)，生長勢旺盛，其莖、葉、果實等產(chǎn)量均比較高，并且其黃酮含量也相對較高，具有重要的開發(fā)價值?？傊擁椖垦芯坎粌H初步探明了四核豆總黃酮含量及其提取工藝，而且為四棱豆的綜合開發(fā)利用開辟了一條新途徑，如利用其莖、葉提取