分析化學8 吸光光度法ppt課件

1、分析化學 2007-2008 1第八章第八章 吸光光度法吸光光度法 第一節(jié)第一節(jié) 吸光光度法基本原理吸光光度法基本原理 第二節(jié)第二節(jié) 光度計及其基本部件光度計及其基本部件 第三節(jié)第三節(jié) 顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇第四節(jié)第四節(jié) 吸光度測量條件的選擇吸光度測量條件的選擇第五節(jié)第五節(jié) 吸光光度法的應(yīng)用吸光光度法的應(yīng)用第六節(jié)第六節(jié) 紫外吸收光譜法簡介紫外吸收光譜法簡介10 吸光光度法分析化學 2007-2008 2概述概述&吸光光度法（Absorption Photometry）是一種基于物質(zhì)對光的選擇性吸收而建立起來的一種分析方法。包括可見吸光光度法、紫外吸光光度法和紅外光譜法

2、等。 吸光光度法同滴定分析法、重量分析法相比，有以下一些特點： (一)靈敏度高 吸光光度法測定物質(zhì)的濃度下限(最低濃度)一般可達10-5的微量組分。對固體試樣一般可測到10-4。如果對被測組分事先加以富集，靈敏度還可以提高1-2個數(shù)量級。 10 吸光光度法分析化學 2007-2008 3續(xù)前續(xù)前 (二)準確度較高 一般吸光光度法的相對誤差為2-5%，其準確度雖不如滴定分析法及重量法，但對微量成分來說，還是比較滿意的，因為在這種情況下，滴定分析法和重量法也不夠準確了，甚至無法進行測定。 (三)操作簡便，測定速度快 (四)應(yīng)用廣泛 幾乎所有的無機離子和有機化合物都可直接或間接地用吸光光度法進行測定

3、。10 吸光光度法分析化學 2007-2008 4吸光分析的幾種方法目視比色法目視比色法標準系列標準系列未知樣品未知樣品特點特點利用自然光利用自然光比較吸收光的互補色光比較吸收光的互補色光準確度低（半定量）準確度低（半定量）不可分辨多組分不可分辨多組分方法簡便，靈敏度高方法簡便，靈敏度高10 吸光光度法分析化學 2007-2008 5分光光度法（紫外分光光度法（紫外-可見分光光度法）可見分光光度法）UV-VIS0.575光源光源單色器單色器吸收池吸收池檢測器檢測器顯示顯示I0It參比參比樣品樣品bCTIIAtlglg0入射光入射光 I0透射光透射光 It請注意與定義比較請注意與定義比較未考慮吸

4、收池和溶劑對光子的作用未考慮吸收池和溶劑對光子的作用10 吸光光度法分析化學 2007-2008 6第一節(jié)第一節(jié) 吸光光度法基本原理吸光光度法基本原理 一、物質(zhì)對光的選擇性吸收一、物質(zhì)對光的選擇性吸收二、光的吸收基本定律二、光的吸收基本定律朗伯朗伯-比爾定律比爾定律三、偏離比爾定律的原因三、偏離比爾定律的原因10 吸光光度法分析化學 2007-2008 71. 光是一種電磁波光是一種電磁波v不同波長的光具有不同的能量不同波長的光具有不同的能量 Eh = h c/ v人眼只能感受到可見光區(qū)域的光，只占整個電磁波譜中很小的一部分。波長人眼只能感受到可見光區(qū)域的光，只占整個電磁波譜中很小的一部分。波

5、長范圍在范圍在400 760 nm。不同波長的可見光引起人不同的視覺效果，因而產(chǎn)生。不同波長的可見光引起人不同的視覺效果，因而產(chǎn)生不同的顏色。不同的顏色。 10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 8 續(xù)前續(xù)前10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 92. 互補色光互補色光 如果將兩種適當顏色的可見光按一定比例混合能如果將兩種適當顏色的可見光按一定比例混合能得到白色光，則具有此性質(zhì)的兩種光稱為互補色光。得到白色光，則具有此性質(zhì)的兩種光稱為互補色光。 10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-20

6、08 10單色光單色光復(fù)合光復(fù)合光光的互補光的互補單一波長的光單一波長的光由不同波長的光組合而成的光由不同波長的光組合而成的光若兩種不同顏色的單色光按一定的強度比例混合得到白若兩種不同顏色的單色光按一定的強度比例混合得到白光，那么就稱這兩種單色光為互補色光，這種現(xiàn)象稱為光，那么就稱這兩種單色光為互補色光，這種現(xiàn)象稱為光的互補。光的互補。10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 113. 吸光條件吸光條件 CuSO4水溶液為什么只選擇性的吸收自然光中的黃色光，而不吸收其水溶液為什么只選擇性的吸收自然光中的黃色光，而不吸收其它顏色的光哪？它顏色的光哪？原因：與物

7、質(zhì)分子內(nèi)部的結(jié)構(gòu)有原因：與物質(zhì)分子內(nèi)部的結(jié)構(gòu)有關(guān)關(guān) 物質(zhì)分子內(nèi)部都具有一系列不物質(zhì)分子內(nèi)部都具有一系列不連續(xù)的特征能級（量子化），接受連續(xù)的特征能級（量子化），接受能量后可以發(fā)生能級之間的躍遷。能量后可以發(fā)生能級之間的躍遷。由外層電子躍遷得到的光譜為紫外由外層電子躍遷得到的光譜為紫外-可見光譜?？梢姽庾V。10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 12續(xù)前續(xù)前電子能級間躍遷電子能級間躍遷電子能級間躍遷的同時總伴隨有電子能級間躍遷的同時總伴隨有振動和轉(zhuǎn)動能級間的躍遷。即電振動和轉(zhuǎn)動能級間的躍遷。即電子光譜中總包含有振動能級和轉(zhuǎn)子光譜中總包含有振動能級和轉(zhuǎn)動能級間

8、躍遷產(chǎn)生的若干譜線而動能級間躍遷產(chǎn)生的若干譜線而呈現(xiàn)寬譜帶。呈現(xiàn)寬譜帶。10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 13續(xù)前續(xù)前 物質(zhì)分子外層電子平時處于能量最低、最穩(wěn)定的基態(tài)，當用光照射到物質(zhì)物質(zhì)分子外層電子平時處于能量最低、最穩(wěn)定的基態(tài)，當用光照射到物質(zhì)后，如果光具有的能量恰好和電子由基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)所需要的能量相等時，后，如果光具有的能量恰好和電子由基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)所需要的能量相等時，則這一波長的光就被分子所吸收，發(fā)生電子躍遷。則這一波長的光就被分子所吸收，發(fā)生電子躍遷。M + 熱M + 熒光或磷光M + h M *基態(tài)基態(tài) 激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)E1 （E） E

9、2 E = E2 - E1 = h 不同分子的組成和結(jié)構(gòu)都不同，所具有的特征能級（不同分子的組成和結(jié)構(gòu)都不同，所具有的特征能級（ E ）也不同，因此）也不同，因此對不同波長光的吸收程度不同，特定的分子只選擇性吸收特定波長的光。對不同波長光的吸收程度不同，特定的分子只選擇性吸收特定波長的光。10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 144 吸收曲線與最大吸收波長吸收曲線與最大吸收波長 采用不同波長的單色光照射某一吸光物質(zhì)，并測量每一個波長下該物質(zhì)對光吸采用不同波長的單色光照射某一吸光物質(zhì)，并測量每一個波長下該物質(zhì)對光吸收程度的大?。ㄎ舛龋┦粘潭鹊拇笮。ㄎ舛?/p>

10、），以波長（，以波長（）為橫坐標，吸光度（）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，繪圖）為縱坐標，繪圖，得到的曲線為吸收曲線（吸收光譜），得到的曲線為吸收曲線（吸收光譜） 吸收光譜準確地描述了物質(zhì)對吸收光譜準確地描述了物質(zhì)對不同波長的光的吸收情況。不同波長的光的吸收情況。10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 15吸收曲線的討論：吸收曲線的討論：（1）同一種物質(zhì)對不同波長光的吸光）同一種物質(zhì)對不同波長光的吸光度不同。吸光度最大處對應(yīng)的波長稱為度不同。吸光度最大處對應(yīng)的波長稱為最大吸收波長最大吸收波長max（2）同一種物質(zhì)，濃度不同，其吸收）同一種物質(zhì)，濃度不同，

11、其吸收曲線形狀相似，曲線形狀相似，max不變。而對于不同不變。而對于不同物質(zhì)，它們的吸收曲線形狀和物質(zhì)，它們的吸收曲線形狀和max則不則不同。同。10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 16續(xù)前續(xù)前（3）同一種物質(zhì)，濃度不同，在某一定波長下吸光度同一種物質(zhì)，濃度不同，在某一定波長下吸光度 A 有差異，在有差異，在max處吸光度處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以測定最靈敏。吸收曲線是定量分析中選擇入射光波隨濃度變化的幅度最大，所以測定最靈敏。吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長的重要依據(jù)。長的重要依據(jù)。動畫動畫（4）吸收曲線可以提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)）吸收曲線可以提供

12、物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，并作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)之信息，并作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)之一。一。10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 17二、二、 光的吸收基本定律光的吸收基本定律朗伯朗伯-比爾定律比爾定律 &透光度透光度v當一束強度為當一束強度為I0的平行單色光通過任何均勻的非散射溶液時，一部分光被介的平行單色光通過任何均勻的非散射溶液時，一部分光被介質(zhì)中的吸光分子吸收，另一部分光透過溶液后，強度降低為質(zhì)中的吸光分子吸收，另一部分光透過溶液后，強度降低為It ，It與與I0之比稱之比稱為透光度為透光度T= It / I0v溶液的透光度愈大，表示它對光的吸收愈?。幌喾?/p>

13、，透光度愈小，表示它對溶液的透光度愈大，表示它對光的吸收愈??；相反，透光度愈小，表示它對光的吸收愈大。光的吸收愈大。&吸光度吸光度v物質(zhì)對光的吸收程度用吸光度表示物質(zhì)對光的吸收程度用吸光度表示A = lg(1/T)= lg(I0/It)10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 18續(xù)前續(xù)前透光度（透射比）透光度（透射比）Transmittance透光度定義：透光度定義：0IITtT 取值為取值為0.0 % 100.0 %全部吸收全部吸收T = 0.0 %全部透射全部透射T = 100.0 %入射光入射光 I0透射光透射光 It10 吸光光度法 10.1 吸光

14、光度法基本原理 分析化學 2007-2008 191. 具體內(nèi)容具體內(nèi)容01lgIAk bI02lgIAk cI朗伯朗伯-比耳定律表明：比耳定律表明：當一束平行單色光通過均勻、非散當一束平行單色光通過均勻、非散射的吸光物質(zhì)溶液時，溶液的吸光射的吸光物質(zhì)溶液時，溶液的吸光度與吸光物質(zhì)的濃度及吸收層厚度度與吸光物質(zhì)的濃度及吸收層厚度成正比。成正比。動畫動畫10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 202. 2. 數(shù)學表達式數(shù)學表達式式中：式中： A：吸光度；：吸光度； 描述溶液對光的吸收程度；描述溶液對光的吸收程度； b：液層厚度：液層厚度(光程長度光程長度)，

15、 通常以通常以cm為單位；為單位； c：溶液的濃度：溶液的濃度 單位單位 molL-； ：摩爾吸收系數(shù)，：摩爾吸收系數(shù)， 單位單位 Lmol-cm-；這是吸光光度法的理論基礎(chǔ)和定量測定的依據(jù)。這是吸光光度法的理論基礎(chǔ)和定量測定的依據(jù)。bcIITAt0lglg10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 213. 適用范圍適用范圍 此定律不僅適用于溶液，也適用于其它均勻非散此定律不僅適用于溶液，也適用于其它均勻非散射的吸光物質(zhì)（氣體或固體），是各類吸光光度法定射的吸光物質(zhì)（氣體或固體），是各類吸光光度法定量分析的依據(jù)。量分析的依據(jù)。10 吸光光度法 10.1 吸光

16、光度法基本原理 分析化學 2007-2008 224. 摩爾吸收系數(shù)摩爾吸收系數(shù)的意義的意義（1） 為吸收物質(zhì)在一定波長和溶劑條件下的特征常數(shù)；為吸收物質(zhì)在一定波長和溶劑條件下的特征常數(shù)；（2） 不隨濃度不隨濃度c和光程長度和光程長度b的改變而改變。在溫度和波長等條件一定時的改變而改變。在溫度和波長等條件一定時， 僅與吸收物質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān)，與濃度無關(guān)；僅與吸收物質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān)，與濃度無關(guān)；（3）同一吸收物質(zhì)在不同波長下的）同一吸收物質(zhì)在不同波長下的 值不同。在最大吸收波長值不同。在最大吸收波長max處的摩處的摩爾吸收系數(shù)爾吸收系數(shù) max表明該吸收物質(zhì)最大限度的吸光能力，也反映光度法測定表

17、明該吸收物質(zhì)最大限度的吸光能力，也反映光度法測定該物質(zhì)可能達到的最大靈敏度。該物質(zhì)可能達到的最大靈敏度。 10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 23續(xù)前續(xù)前（4） 可作為定性鑒定的參數(shù)；可作為定性鑒定的參數(shù)；（5） 可作為物質(zhì)的吸光能力的度量可作為物質(zhì)的吸光能力的度量 越大表明該物質(zhì)的吸光能力越強，用光度法測定該物質(zhì)的靈敏度越越大表明該物質(zhì)的吸光能力越強，用光度法測定該物質(zhì)的靈敏度越高。高。 105 ： 超高靈敏；超高靈敏； = (610）104 ：高靈敏；：高靈敏； = 104 103 ： 中等靈敏；中等靈敏； 103 ： 不靈敏。不靈敏。（6） 在數(shù)

18、值上等于濃度為在數(shù)值上等于濃度為1 mol L-1、液層厚度為、液層厚度為1cm的溶液在某一波的溶液在某一波長下的吸光度。長下的吸光度。 10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 245. 與與 a 的關(guān)系的關(guān)系 當溶液的濃度當溶液的濃度 c 以以gL-單位，液層厚度單位，液層厚度 b 以以cm為單位時，為單位時，朗伯朗伯- -比耳定比耳定律中的律中的 用用 a 表示，稱為吸收系數(shù)，單位為：表示，稱為吸收系數(shù)，單位為：Lg-cm-0lgIAabcI = M a 式中：式中：M為摩爾質(zhì)量為摩爾質(zhì)量10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 200

19、7-2008 256. 吸光度的加和性吸光度的加和性121122AnnnAAAbcbcbc總 如有一復(fù)雜試樣，其中有幾個組分，各組分均有如有一復(fù)雜試樣，其中有幾個組分，各組分均有其其 、C、A，那么溶液的吸光度即為各組分吸光度，那么溶液的吸光度即為各組分吸光度之和。之和。10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 26三、偏離朗伯-比耳定律的原因 標準曲線的繪制標準曲線的繪制及應(yīng)用及應(yīng)用 配制一系列已知濃度的標準溶液，在一定條件下進行測定。然后以吸光度為配制一系列已知濃度的標準溶液，在一定條件下進行測定。然后以吸光度為縱坐標，以濃度為橫坐標作圖，得到一條標準曲

20、線，也稱做工作曲線。曲線的縱坐標，以濃度為橫坐標作圖，得到一條標準曲線，也稱做工作曲線。曲線的斜率為斜率為bb，由此可得到摩爾吸收系數(shù)，由此可得到摩爾吸收系數(shù)；也可根據(jù)未知液的；也可根據(jù)未知液的Ax,Ax,在標準曲線上在標準曲線上查出未知液的濃度查出未知液的濃度c cx x。l標準曲線法測定未知溶液的濃度時，發(fā)現(xiàn)：標準曲線常發(fā)生彎曲（尤其當溶標準曲線法測定未知溶液的濃度時，發(fā)現(xiàn)：標準曲線常發(fā)生彎曲（尤其當溶液濃度較高時），這種現(xiàn)象稱為對朗伯液濃度較高時），這種現(xiàn)象稱為對朗伯- -比耳定律的偏離。比耳定律的偏離。 引起這種偏離的因素（兩大類）：引起這種偏離的因素（兩大類）： 1. 1. 物理性因

21、素，即儀器的非理想引起的；物理性因素，即儀器的非理想引起的； 2. 2. 化學性因素化學性因素10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 27標準曲線與吸收光譜的關(guān)系A(chǔ)C標準曲線標準曲線A或或 吸收光譜吸收光譜A C max10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 281. 物理性因素 難以獲得真正的純單色光難以獲得真正的純單色光。 朗朗伯伯-比耳定律的前提條件之一是入射光為單色光。比耳定律的前提條件之一是入射光為單色光。 分光光度計只能獲得近乎單色的狹窄光帶。復(fù)合光可導致對朗伯分光光度計只能獲得近乎單色的狹窄光帶。復(fù)合光可

22、導致對朗伯- -比耳定律比耳定律的正或負偏離。的正或負偏離。 非單色光、雜散光、非平行入射光都會引起對非單色光、雜散光、非平行入射光都會引起對朗伯朗伯- -比耳定律的偏離，最主要的是非單色光作為比耳定律的偏離，最主要的是非單色光作為入射光引起的偏離。入射光引起的偏離。 10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 29非單色光作為入射光引起的偏離 假設(shè)由波長為假設(shè)由波長為1和和2的兩單色光的兩單色光組成的入射光通過濃度為組成的入射光通過濃度為c的溶液，則：的溶液，則： A 1lg（o1 /t1 ）1bc A 2lg(o2 /t2 ）2bc故：故：式中：式中：o1

23、、o2分別為分別為1、2 的入射光強度；的入射光強度； t1、t2分別為分別為1、2 的透射光強度；的透射光強度； 1、2分別為分別為1、2的摩爾吸光系數(shù)；的摩爾吸光系數(shù)；cbcbIIII 212111OtOt10;1010 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 30續(xù)前續(xù)前 A總總 lg（o總總/t總總 ) lg(Io1+o2)/(t1+t2） lg(Io1+o2)/(o110-1bc +o210-2bc ）令：令： 1-2 ；設(shè)：設(shè)： o1 o2 A總總 lg(2Io1)/t1(110 - bc ） A 1 + lg2 - lg(110 - bc ) 討論

24、: 因?qū)嶋H上只能測總吸光度因?qū)嶋H上只能測總吸光度A總總，并不能分別測得，并不能分別測得A1和和A2，故：，故：10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 31討論: A總總 =A1 + lg2 - lg(110 bc ) (1) = 0； 即：即： 1= 2 = 則：則： A總 lg（o/t） bc(2) 0 若若 0 ；即；即 20, lg(110 bc )值隨值隨c值增大而增大，則標準曲線偏離直線向值增大而增大，則標準曲線偏離直線向c 軸彎曲，即負軸彎曲，即負偏離；反之，則向偏離；反之，則向A軸彎曲，即正偏離。軸彎曲，即正偏離。10 吸光光度法 10.1

25、吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 32討論A總 =A1 + lg2 - lg(110bc ) (3) 很小時，即很小時，即12： 可近似認為是單色光。在低濃度范圍內(nèi)，不發(fā)生偏離。若濃度較高，即使可近似認為是單色光。在低濃度范圍內(nèi)，不發(fā)生偏離。若濃度較高，即使 很小，很小， A總總 1 ，且隨著，且隨著c值增大，值增大， A總總 與與A 1的差異愈大，在圖上則表現(xiàn)為的差異愈大，在圖上則表現(xiàn)為A-c曲曲線上部線上部(高濃度區(qū)高濃度區(qū))彎曲愈嚴重。故朗伯彎曲愈嚴重。故朗伯-比耳定律只適用于稀溶液。比耳定律只適用于稀溶液。 (4) 為克服非單色光引起的偏離，首先應(yīng)選擇比較好的單色器。此

26、外還應(yīng)將入射為克服非單色光引起的偏離，首先應(yīng)選擇比較好的單色器。此外還應(yīng)將入射波長選定在待測物質(zhì)的最大吸收波長且吸收曲線較平坦處。波長選定在待測物質(zhì)的最大吸收波長且吸收曲線較平坦處。10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007-2008 332. 化學性因素 朗伯朗伯-比耳定律的假定：所有的吸光質(zhì)點之間不發(fā)生相互作用；假定只有在比耳定律的假定：所有的吸光質(zhì)點之間不發(fā)生相互作用；假定只有在稀溶液稀溶液(c10 2 mol/L 時，吸光質(zhì)點間可能發(fā)生締合等相互作用，直接影響時，吸光質(zhì)點間可能發(fā)生締合等相互作用，直接影響了對光的吸收。了對光的吸收。 故：朗伯故：朗伯-比耳定律只

27、適用于稀溶液。比耳定律只適用于稀溶液。 溶液中存在著離解、聚合、互變異構(gòu)、配合物的形成等化學平衡時。使吸光溶液中存在著離解、聚合、互變異構(gòu)、配合物的形成等化學平衡時。使吸光質(zhì)點的濃度發(fā)生變化，影響吸光度。質(zhì)點的濃度發(fā)生變化，影響吸光度。 例：例： 鉻酸鹽或重鉻酸鹽溶液中存在下列平衡：鉻酸鹽或重鉻酸鹽溶液中存在下列平衡： CrO42- 2H = Cr2O72- H2O 溶液中溶液中CrO42-、 Cr2O72-的顏色不同，吸光性質(zhì)也不相同。故此時溶液的顏色不同，吸光性質(zhì)也不相同。故此時溶液pH 對測定有重要影響。對測定有重要影響。10 吸光光度法 10.1 吸光光度法基本原理 分析化學 2007

28、-2008 34第二節(jié)第二節(jié) 光度計及其基本部件光度計及其基本部件光源光源單色器單色器吸收池吸收池檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)顯示器顯示器10 吸光光度法動畫動畫1、2分析化學 2007-2008 35分析化學 2007-2008 36一、一、 光源光源 在整個紫外光區(qū)或可見光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強度、較在整個紫外光區(qū)或可見光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強度、較好的穩(wěn)定性、較長的使用壽命。好的穩(wěn)定性、較長的使用壽命。 可見光區(qū)：可見光區(qū)：鎢燈作為光源，其輻射鎢燈作為光源，其輻射波長范圍在波長范圍在3203202500 nm2500 nm。 紫外區(qū)：紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射氫、氘燈。發(fā)

29、射185185400 400 nmnm的連續(xù)光譜。的連續(xù)光譜。10 吸光光度法 10.2 光度計及其基本部件分析化學 2007-2008 37二、二、 單色器單色器入射狹縫：光源的光由此進入單色器；入射狹縫：光源的光由此進入單色器；色散元件：將復(fù)合光分解成單色散元件：將復(fù)合光分解成單色光色光 將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出一任意波長單色光的光將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出一任意波長單色光的光學系統(tǒng)。學系統(tǒng)。準光裝置：透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束；準光裝置：透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束； 棱鏡：棱鏡：光的折射原理光的折射原理10 吸光光度法 10.2 光度計及其基

30、本部件分析化學 2007-2008 38光柵光柵光的衍射和干涉原理光的衍射和干涉原理10 吸光光度法 10.2 光度計及其基本部件分析化學 2007-2008 39三、吸收池三、吸收池在紫外區(qū)須采用石英池，可見光區(qū)在紫外區(qū)須采用石英池，可見光區(qū)一般用玻璃池。一般用玻璃池。吸收池（比色皿）用于盛放吸收溶液吸收池（比色皿）用于盛放吸收溶液。主要有主要有石英池和玻璃池兩種。石英池和玻璃池兩種。規(guī)格為：規(guī)格為：0.50.5、1.01.0、2.02.0、3.0 cm3.0 cm10 吸光光度法 10.2 光度計及其基本部件分析化學 2007-2008 40四、四、 檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng) 將光強度轉(zhuǎn)換成電流來

31、進行測量。光電檢測器。將光強度轉(zhuǎn)換成電流來進行測量。光電檢測器。要求：對測定波長范圍內(nèi)的光有快速、靈敏的響應(yīng)，要求：對測定波長范圍內(nèi)的光有快速、靈敏的響應(yīng)， 產(chǎn)生的光電流應(yīng)與照射于檢測器上的光強度成正比。產(chǎn)生的光電流應(yīng)與照射于檢測器上的光強度成正比。(1)(1)光電管和光電倍增管光電管和光電倍增管 光照射到陰極表面時，會激發(fā)光照射到陰極表面時，會激發(fā)出電子，流向陽極，產(chǎn)生電流，通出電子，流向陽極，產(chǎn)生電流，通過放大器將電流放大，提高檢測的過放大器將電流放大，提高檢測的靈敏度。靈敏度。10 吸光光度法 10.2 光度計及其基本部件分析化學 2007-2008 41(2)(2)光電二極管陣列光電二

32、極管陣列 由多個光電二極管組成，光照射到二極管的半由多個光電二極管組成，光照射到二極管的半導體材料上，產(chǎn)生電子使電容放電。電容器再次充導體材料上，產(chǎn)生電子使電容放電。電容器再次充電的電量與每個二極管檢測到的光子數(shù)目成正比，電的電量與每個二極管檢測到的光子數(shù)目成正比，而光子數(shù)又與光強成正比。通過測量整個波長范圍而光子數(shù)又與光強成正比。通過測量整個波長范圍內(nèi)光強的變化就可得到吸收光譜。內(nèi)光強的變化就可得到吸收光譜。10 吸光光度法 10.2 光度計及其基本部件分析化學 2007-2008 42五、五、 顯示器顯示器 把檢測器輸出的信號以適當方式顯把檢測器輸出的信號以適當方式顯示或記錄下來。示或記錄

33、下來。 分光光度計常用的指示器有檢流計、微安表、數(shù)分光光度計常用的指示器有檢流計、微安表、數(shù) 字顯示字顯示器等。器等。10 吸光光度法 10.2 光度計及其基本部件分析化學 2007-2008 43第三節(jié)第三節(jié) 顯色反應(yīng)與顯色條件的選擇顯色反應(yīng)與顯色條件的選擇一、顯色反應(yīng)的選擇一、顯色反應(yīng)的選擇二、顯色條件的選擇二、顯色條件的選擇三、顯色劑三、顯色劑四、三元配合物在光度分析中的應(yīng)用特性簡介四、三元配合物在光度分析中的應(yīng)用特性簡介10 吸光光度法分析化學 2007-2008 44一、顯色反應(yīng)的選擇一、顯色反應(yīng)的選擇所選擇的顯色反應(yīng)應(yīng)滿足下列要求：所選擇的顯色反應(yīng)應(yīng)滿足下列要求：1. 選擇性好，所

34、選擇的顯色劑最好只與被測組分顯色，如果有干擾，干擾要易選擇性好，所選擇的顯色劑最好只與被測組分顯色，如果有干擾，干擾要易于消除。于消除。2. 靈敏度高，所選擇的顯色反應(yīng)的靈敏度高，所選擇的顯色反應(yīng)的 104，這樣會使測定靈敏度較高，有利于，這樣會使測定靈敏度較高，有利于微量組分的測定。微量組分的測定。3. 對比度要大，有色配合物和顯色劑（如果有顏色）的對比度要大，有色配合物和顯色劑（如果有顏色）的max要求要求 60 nm。10 吸光光度法 10.3 顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇分析化學 2007-2008 45續(xù)前續(xù)前4. 生成的有色配合物要穩(wěn)定，組成要恒定，這樣可以保證測定結(jié)果有良好的重現(xiàn)生成

35、的有色配合物要穩(wěn)定，組成要恒定，這樣可以保證測定結(jié)果有良好的重現(xiàn)性和足夠高的準確度。性和足夠高的準確度。5. 顯色反應(yīng)的條件要易于控制，若實驗條件過于嚴格，測定結(jié)果的重現(xiàn)性就差顯色反應(yīng)的條件要易于控制，若實驗條件過于嚴格，測定結(jié)果的重現(xiàn)性就差。6. 常用的顯色反應(yīng)是配位反應(yīng)，有時也采用氧化還原反應(yīng)。常用的顯色反應(yīng)是配位反應(yīng)，有時也采用氧化還原反應(yīng)。例如：鋼中微量錳的測定，例如：鋼中微量錳的測定， 2 Mn2 5 S2O82-8 H2O =2 MnO4- + 10 SO42- 16H+ 將將Mn2 氧化成紫紅色的氧化成紫紅色的MnO4-后后，在在525 nm處進行測定。處進行測定。10 吸光光度

36、法 10.3 顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇分析化學 2007-2008 46二、二、 顯色條件的選擇顯色條件的選擇 確定顯色反應(yīng)以后，為使反應(yīng)進行的完全，還要確定合適的反應(yīng)條件，確定顯色反應(yīng)以后，為使反應(yīng)進行的完全，還要確定合適的反應(yīng)條件，合適的反應(yīng)條件是通過實驗來確定的。合適的反應(yīng)條件是通過實驗來確定的。1. 顯色劑用量顯色劑用量 具體的實驗方法：固定被測組分的濃度和其它的反應(yīng)條件，只改變顯色劑具體的實驗方法：固定被測組分的濃度和其它的反應(yīng)條件，只改變顯色劑的用量，配制一系列含不同濃度顯色劑的溶液，在的用量，配制一系列含不同濃度顯色劑的溶液，在max下分別測定吸光度下分別測定吸光度A ，繪，繪制

37、吸光度制吸光度A與顯色劑用量與顯色劑用量cR曲線。曲線。10 吸光光度法 10.3 顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇分析化學 2007-2008 47續(xù)前續(xù)前選擇曲線變化平坦處為顯色劑合適的用量選擇曲線變化平坦處為顯色劑合適的用量10 吸光光度法 10.3 顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇吸光度與顯色劑濃度的關(guān)系曲線吸光度與顯色劑濃度的關(guān)系曲線分析化學 2007-2008 482. 酸度酸度體系的酸度對顯色反應(yīng)的影響是多方面的，體系的酸度對顯色反應(yīng)的影響是多方面的，影響顯色劑的平衡濃度影響顯色劑的平衡濃度影響顯色劑的顏色影響顯色劑的顏色影響被測金屬離子的存在狀態(tài)影響被測金屬離子的存在狀態(tài)體系的酸度低會發(fā)生水解

38、反應(yīng)。體系的酸度低會發(fā)生水解反應(yīng)。 M + HR MR + H+R2-HR - H2R 黃色黃色橙色橙色紅色紅色pH6pH 212pH1310 吸光光度法 10.3 顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇分析化學 2007-2008 49具體的實驗方法具體的實驗方法固定被測組分、顯色劑和其它試劑的固定被測組分、顯色劑和其它試劑的濃度，只改變?nèi)芤旱乃岫龋渲埔幌禎舛?，只改變?nèi)芤旱乃岫?，配制一系列不同列不同pH的顯色溶液，在的顯色溶液，在max下分別下分別測定吸光度測定吸光度A ，繪制，繪制pH與與吸光度吸光度A的的曲線。曲線。ApH選擇曲線吸光度較大且平坦處為合適的選擇曲線吸光度較大且平坦處為合適的pH范圍范

39、圍10 吸光光度法 10.3 顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇分析化學 2007-2008 503. 顯色時間與顯色反應(yīng)溫度顯色時間與顯色反應(yīng)溫度同顯色劑用量的確定方法同顯色劑用量的確定方法10 吸光光度法 10.3 顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇分析化學 2007-2008 514. 干擾的消除干擾的消除 進行光度分析時，共存離子如本身有顏色，或與顯色劑作用生成有色化合進行光度分析時，共存離子如本身有顏色，或與顯色劑作用生成有色化合物，都將干擾測定。物，都將干擾測定。（1）加入配位掩蔽劑或氧化還原掩蔽劑）加入配位掩蔽劑或氧化還原掩蔽劑 使干擾離子生成無色配合物或無色離子使干擾離子生成無色配合物或無色離子（

40、2）選擇適當?shù)娘@色條件以避免干擾）選擇適當?shù)娘@色條件以避免干擾 用磺基水楊酸測定用磺基水楊酸測定Fe3+離子時離子時,Cu2+與試劑形成黃色絡(luò)合物與試劑形成黃色絡(luò)合物, 干擾測定，但干擾測定，但如控制如控制pH在在2.5左右，左右，Cu2+則不與試劑反應(yīng)。則不與試劑反應(yīng)。（3）分離干擾離子）分離干擾離子10 吸光光度法 10.3 顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇分析化學 2007-2008 52三、三、 顯色劑顯色劑1. 1. 無機顯色劑：硫氰酸鹽、鉬酸銨等。無機顯色劑：硫氰酸鹽、鉬酸銨等。2. 2. 有機顯色劑：種類繁多有機顯色劑：種類繁多偶氮類顯色劑：性質(zhì)穩(wěn)定、顯色反應(yīng)靈敏度高、選擇性好、對比度大

41、，應(yīng)用最廣泛。偶氮類顯色劑：性質(zhì)穩(wěn)定、顯色反應(yīng)靈敏度高、選擇性好、對比度大，應(yīng)用最廣泛。偶氮胂偶氮胂III、PAR等。等。三苯甲烷類：鉻天青三苯甲烷類：鉻天青S、二甲酚橙等、二甲酚橙等10 吸光光度法 10.3 顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇分析化學 2007-2008 53四、三元配合物在光度分析中的應(yīng)用簡介四、三元配合物在光度分析中的應(yīng)用簡介 一種金屬離子同時與兩種不同的配位體形成的三元配合物具有下列特性：一種金屬離子同時與兩種不同的配位體形成的三元配合物具有下列特性：1. 穩(wěn)定，可提高分析測定的準確度和重現(xiàn)性穩(wěn)定，可提高分析測定的準確度和重現(xiàn)性 例例: Ti-EDTA-H2O2三元配合物的穩(wěn)定

42、性，比三元配合物的穩(wěn)定性，比Ti-EDTA和和Ti-H2O2二元配合物的穩(wěn)定性二元配合物的穩(wěn)定性，分別增強約，分別增強約1000倍和倍和100倍。倍。2. 比二元配合物具有更高的靈敏度和更大的對比度比二元配合物具有更高的靈敏度和更大的對比度 靈敏度通?？商岣哽`敏度通?？商岣?2倍，有時甚至提高倍，有時甚至提高5倍以上。倍以上。3. 比二元體系具有更高的選擇性比二元體系具有更高的選擇性 減少了金屬離子形成類似配合物的可能性減少了金屬離子形成類似配合物的可能性。10 吸光光度法 10.3 顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇分析化學 2007-2008 54第四節(jié)第四節(jié) 吸光度測量條件的選擇吸光度測量條件的選

43、擇一、入射光波長的選擇一、入射光波長的選擇二、參比溶液的選擇二、參比溶液的選擇三、吸光度讀數(shù)范圍的選擇三、吸光度讀數(shù)范圍的選擇10 吸光光度法分析化學 2007-2008 55一、入射光波長的選擇一、入射光波長的選擇一般選擇一般選擇max為入射光波長。為入射光波長。 400 450 500 550 600 650 400 450 500 550 600 650 /nm/nmA A0.80.80.40.40.60.60.20.2 1 1 2 210 吸光光度法 10.4 吸光度測量條件的選擇分析化學 2007-2008 56續(xù)前續(xù)前 如果如果max處有共存組分干擾時，則應(yīng)考慮選處有共存組分干擾時

44、，則應(yīng)考慮選擇靈敏度稍低但能避免干擾的入射光波長。擇靈敏度稍低但能避免干擾的入射光波長。 如圖選如圖選500 nm波長測定，靈敏度雖有所下降，波長測定，靈敏度雖有所下降，卻消除了干擾，提高了測定的準確度和選擇性。卻消除了干擾，提高了測定的準確度和選擇性。10 吸光光度法 10.4 吸光度測量條件的選擇分析化學 2007-2008 57二、二、 參比溶液的選擇參比溶液的選擇為什么需要使用參比溶液？為什么需要使用參比溶液？ 分光光度測定使用的是透明的比色皿，對入射光會產(chǎn)生反射、吸收和透射分光光度測定使用的是透明的比色皿，對入射光會產(chǎn)生反射、吸收和透射等作用，另外，溶劑、試劑等也會對入射光產(chǎn)生吸收，

45、使測得的的吸光度不能等作用，另外，溶劑、試劑等也會對入射光產(chǎn)生吸收，使測得的的吸光度不能真正反映待測溶液的吸光度。為消除由此帶來的測量誤差，要使用參比溶液。真正反映待測溶液的吸光度。為消除由此帶來的測量誤差，要使用參比溶液。試液參比IIIIAlglg0測得的的吸光度真正反映待測溶液吸光強度。測得的的吸光度真正反映待測溶液吸光強度。10 吸光光度法 10.4 吸光度測量條件的選擇分析化學 2007-2008 58選擇參比溶液所遵循的一般原則選擇參比溶液所遵循的一般原則1. 若僅待測組分與顯色劑的顯色反應(yīng)產(chǎn)物在測定波長處有吸收，其他所若僅待測組分與顯色劑的顯色反應(yīng)產(chǎn)物在測定波長處有吸收，其他所加試

46、劑均無吸收，用純?nèi)軇ㄋ釉噭┚鶡o吸收，用純?nèi)軇ㄋ? )作參比溶液；作參比溶液；2. 2. 若顯色劑或其他所加試劑在測定波長處略有吸收若顯色劑或其他所加試劑在測定波長處略有吸收, ,而試液本身無吸收而試液本身無吸收， 則可以用則可以用“試劑空白試劑空白”( (不加試樣溶液不加試樣溶液) )作參比溶液；作參比溶液；10 吸光光度法 10.4 吸光度測量條件的選擇分析化學 2007-2008 59續(xù)前續(xù)前4. 4. 若顯色劑、試液中其他組分在測量波長處有吸收若顯色劑、試液中其他組分在測量波長處有吸收, ,則可在試液中加入則可在試液中加入適當掩蔽劑將待測組分掩蔽后再加顯色劑，作為參比溶液。適當掩蔽

47、劑將待測組分掩蔽后再加顯色劑，作為參比溶液。3. 若待測試液中其他組分（與顯色劑不反應(yīng)）在測定波長處有吸若待測試液中其他組分（與顯色劑不反應(yīng)）在測定波長處有吸收，而顯色劑等無吸收，則可用收，而顯色劑等無吸收，則可用“試樣空白試樣空白”( (不加顯色劑不加顯色劑) )作參作參比溶液；比溶液；10 吸光光度法 10.4 吸光度測量條件的選擇分析化學 2007-2008 60參比液的選擇參比液的選擇原則：扣除非待測組分的吸收以顯色反應(yīng)為例進行討論M + R = M-R max試液 顯色劑 溶劑 吸光物質(zhì) 參比液組成無吸收無吸收光學透明溶劑基質(zhì)吸收無吸收吸收不加顯色劑的試液無吸收吸收吸收顯色劑基質(zhì)吸收

48、吸收吸收吸收顯色劑 + 試液 + 待測組分的掩蔽劑若欲測 M-R 的吸收 maxA （樣） = A （待測吸光物質(zhì)） + A （干擾）+ A （池）A （參比） = A （干擾）+ A （池）10 吸光光度法 10.4 吸光度測量條件的選擇分析化學 2007-2008 61三、三、 吸光度讀數(shù)范圍的選擇吸光度讀數(shù)范圍的選擇 在用分光光度計測定時，一定要使測定的吸光度處于一個適宜的范圍之內(nèi)，在不同在用分光光度計測定時，一定要使測定的吸光度處于一個適宜的范圍之內(nèi)，在不同的吸光度范圍讀數(shù)會帶來不同程度的誤差，在什么范圍內(nèi)讀數(shù)誤差最?。康奈舛确秶x數(shù)會帶來不同程度的誤差，在什么范圍內(nèi)讀數(shù)誤差最小？朗

49、伯朗伯-比耳定律：比耳定律：A = - lgT = - 0.434lnT = bcbdcTT.T. d4340dln4340dlgT將微分：將微分：10 吸光光度法 10.4 吸光度測量條件的選擇分析化學 2007-2008 62續(xù)前續(xù)前兩式相除得：兩式相除得：TTT.ccdlg4340dTTT.cclg4340以有限值表示：以有限值表示：c/c濃度的相對誤差，濃度的相對誤差， T透光度，透光度， T 透光度的絕對誤差，儀器刻度讀數(shù)不可靠所引起的誤差，與儀器透光度的絕對誤差，儀器刻度讀數(shù)不可靠所引起的誤差，與儀器的精度有關(guān)，對給定的儀器為常數(shù)，一般在的精度有關(guān)，對給定的儀器為常數(shù)，一般在 0.

50、2% 2%式中：式中：10 吸光光度法 10.4 吸光度測量條件的選擇分析化學 2007-2008 63續(xù)前續(xù)前設(shè)：設(shè)：T =0.5%，代入，代入 c/c T 關(guān)系曲線關(guān)系曲線T 在在 10%70% 之間時之間時, 濃度相對誤差較小（濃度相對誤差較?。?1.4%2.2% ），）， 對應(yīng)的吸光度為：對應(yīng)的吸光度為：0.15 1.0（最佳讀數(shù)范圍）（最佳讀數(shù)范圍）濃度相對誤差最小時透光度濃度相對誤差最小時透光度Tmin： Tmin 36.8%, Amin 0.434 通過改變吸收池厚度或待測液濃度，使吸光度讀數(shù)處在適宜范圍。普通分光光通過改變吸收池厚度或待測液濃度，使吸光度讀數(shù)處在適宜范圍。普通分

51、光光度法不適于高含量或極低含量物質(zhì)的測定。度法不適于高含量或極低含量物質(zhì)的測定。10 吸光光度法 10.4 吸光度測量條件的選擇分析化學 2007-2008 64第五節(jié)第五節(jié) 吸光光度法的應(yīng)用吸光光度法的應(yīng)用一、普通分光光度法一、普通分光光度法二、高含量組分的測定二、高含量組分的測定示差法示差法三、光度滴定三、光度滴定四、配合物組成的測定四、配合物組成的測定摩爾比法摩爾比法10 吸光光度法分析化學 2007-2008 65一、一、 普通分光光度法普通分光光度法A- c 標準曲線法定量測定。標準曲線法定量測定。1.1.單組分的測定單組分的測定ACAxCx10 吸光光度法 10.5 吸光光度法的應(yīng)

52、用分析化學 2007-2008 662. 多組分的同時測定多組分的同時測定 各組分的吸收曲線不重疊各組分的吸收曲線不重疊同單組分的測定方法同單組分的測定方法10 吸光光度法 10.5 吸光光度法的應(yīng)用分析化學 2007-2008 67 各組分的吸收曲線互有重疊各組分的吸收曲線互有重疊根據(jù)吸光度的加和性通過解聯(lián)立方程得出各組分含量。根據(jù)吸光度的加和性通過解聯(lián)立方程得出各組分含量。 10 吸光光度法 10.5 吸光光度法的應(yīng)用分析化學 2007-2008 68續(xù)前續(xù)前則則 A1 = x1bcx y1bcy A2 = x2bcx y2bcy 解聯(lián)立方程得出各組分含量。解聯(lián)立方程得出各組分含量。設(shè)：設(shè)

53、： x的的max為為1 ， y的的max為為2 。 分別選擇分別選擇1和和2作為測量波長，測定二組分總的吸光度作為測量波長，測定二組分總的吸光度A假設(shè)在假設(shè)在1時測得的總吸光度為時測得的總吸光度為A 1 ； 在在2時測得的總吸光度為時測得的總吸光度為A 2 ；各個各個值可用純值可用純x和和y組分分別在組分分別在1和和2測得。測得。10 吸光光度法 10.5 吸光光度法的應(yīng)用分析化學 2007-2008 69二、高含量組分的測定二、高含量組分的測定示差法示差法 示差分光光度法與普通分光光度法的主要區(qū)別在于所采用的參比溶液示差分光光度法與普通分光光度法的主要區(qū)別在于所采用的參比溶液不同，普通分光光

54、度法是以試劑空白為參比，示差分光光度法是以比待測不同，普通分光光度法是以試劑空白為參比，示差分光光度法是以比待測溶液濃度稍低的標準溶液作為參比溶液。溶液濃度稍低的標準溶液作為參比溶液。 采用普通分光光度法用于高含量組分測定時會產(chǎn)生較大的測量誤差，采用普通分光光度法用于高含量組分測定時會產(chǎn)生較大的測量誤差，此時應(yīng)采用示差分光光度法。此時應(yīng)采用示差分光光度法。10 吸光光度法 10.5 吸光光度法的應(yīng)用分析化學 2007-2008 70續(xù)前續(xù)前則：則： Ax= b cx As = b cs 以以cs作為參比溶液作為參比溶液 Ar = =x s = b(cx cs ） = bc 設(shè)：設(shè)： 待測溶液濃

55、度為待測溶液濃度為cx， 標準溶液濃度為標準溶液濃度為cs(cs cx)。 繪制繪制Ar c工作曲線，工作曲線， 再根據(jù)再根據(jù) cx=cs+c 計算試樣濃度。計算試樣濃度。10 吸光光度法 10.5 吸光光度法的應(yīng)用分析化學 2007-2008 71示差法為什么能較準確地測定高濃度組分呢？示差法為什么能較準確地測定高濃度組分呢？ 示差法使透光度的讀數(shù)標尺擴大了，使讀數(shù)落入適宜讀數(shù)范圍內(nèi)示差法使透光度的讀數(shù)標尺擴大了，使讀數(shù)落入適宜讀數(shù)范圍內(nèi)，讀數(shù)誤差減小，所以提高了測量的準確度。，讀數(shù)誤差減小，所以提高了測量的準確度。1. 采用普通光度法以試劑空白為參比溶液分別測定二者的透光度。采用普通光度法

56、以試劑空白為參比溶液分別測定二者的透光度。假設(shè)：測得的待測溶液透光度為：假設(shè)：測得的待測溶液透光度為：Tx=5% 標準溶液透光度為：標準溶液透光度為： Ts = 10%設(shè)：設(shè)： 待測溶液濃度為待測溶液濃度為cx， 標準溶液濃度為標準溶液濃度為cs(cs cx)。10 吸光光度法 10.5 吸光光度法的應(yīng)用分析化學 2007-2008 72續(xù)前續(xù)前2. 采用示差光度法以標準溶液采用示差光度法以標準溶液cs為參比溶液測定，此時是用為參比溶液測定，此時是用cs將儀器的透將儀器的透光度調(diào)節(jié)為光度調(diào)節(jié)為100%，然后測定待測溶液，然后測定待測溶液cx的透光度。的透光度。 此時標準溶液透光度為：此時標準溶

57、液透光度為： Ts = 100% 則：測得的待測溶液透光度為：則：測得的待測溶液透光度為：Tx=50% 10 吸光光度法 10.5 吸光光度法的應(yīng)用分析化學 2007-2008 73續(xù)前續(xù)前普通光度法普通光度法: cs: Ts = 10%， cx : Tx=5%，示差法示差法: cs : Ts =100%， cx : Tr=50%， 透光度的讀數(shù)標尺擴大了十倍。讀數(shù)落入適宜讀數(shù)范圍內(nèi)，提高了測量的透光度的讀數(shù)標尺擴大了十倍。讀數(shù)落入適宜讀數(shù)范圍內(nèi)，提高了測量的準確度。準確度。10 吸光光度法 10.5 吸光光度法的應(yīng)用分析化學 2007-2008 74示差法的濃度相對誤差：示差法的濃度相對誤差

58、：其中：其中：c/c 濃度的相對誤差，濃度的相對誤差，Tr 樣品樣品cx的相對透光度的相對透光度（示差法）（示差法） Tr 示差法儀器測定透光度的絕對誤差，示差法儀器測定透光度的絕對誤差， Ts 普通法測定的參比溶液普通法測定的參比溶液cs的透光度。的透光度。rsrrxxTTTlgT.cc434010 吸光光度法 10.5 吸光光度法的應(yīng)用分析化學 2007-2008 75續(xù)前續(xù)前 隨著參比溶液濃度增加，即隨著參比溶液濃度增加，即Ts減小，減小，濃度相對誤差減小。濃度相對誤差減小。例：當例：當 Tr =60%時時 Ts =80% c/c =1.13% Ts =40% c/c =0.58% Ts

59、 =10% c/c =0.30% 示差法要求儀器光源示差法要求儀器光源有足夠的發(fā)射強度或能增大光電流放大倍數(shù)有足夠的發(fā)射強度或能增大光電流放大倍數(shù)，以便能調(diào)節(jié)參比溶液透射比為，以便能調(diào)節(jié)參比溶液透射比為100%。10 吸光光度法 10.5 吸光光度法的應(yīng)用分析化學 2007-2008 76三、三、 光度滴定光度滴定 實驗數(shù)據(jù)是在遠離等實驗數(shù)據(jù)是在遠離等當點的區(qū)域測得，終點由當點的區(qū)域測得，終點由直線外推法得到，可用直線外推法得到，可用于于平衡常數(shù)較小的滴定反應(yīng)。平衡常數(shù)較小的滴定反應(yīng)。 用于酸用于酸堿、配位、氧化還原、沉淀等滴定。堿、配位、氧化還原、沉淀等滴定。 (745nm) 光度法可用來確

60、定滴定分析的終點，光度法可用來確定滴定分析的終點，分光光度計需要改裝。分光光度計需要改裝。 靈敏，可克服目視滴靈敏，可克服目視滴定法中的干擾。定法中的干擾。10 吸光光度法 10.5 吸光光度法的應(yīng)用分析化學 2007-2008 77四、配合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定四、配合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定1. 配合物組成的測定配合物組成的測定 分光光度法是基于被測物能生成有色的配合物而進行測定的，測定有色分光光度法是基于被測物能生成有色的配合物而進行測定的，測定有色配合物的組成，對研究反應(yīng)機理，推斷配合物的結(jié)構(gòu)是十分重要的，測定配配合物的組成，對研究反應(yīng)機理，推斷配合物的結(jié)構(gòu)是十分重要的，測定配合物組成的