MUC1 βcatenin在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及其意義

1、.浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 差 異 (只 0 .0 5 ) 。 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 M U CI 異 常 表 達(dá) 率 56 .6 % ，正 常 甲狀 腺 組 織 MU CI 異 常 表 達(dá) 率 5 % ， 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 組 織 M UC I 異 常 表 達(dá) 率 巧 % ， 甲 狀 腺 乳 頭 狀 癌 與 后 二 者 之 間有 顯 著 性 差 異 。甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 日一cat en in 異 常 表 達(dá) 率 71 .7 % ， 正 常 甲狀 腺 組 織 p 一Cat en in 異 常 表 達(dá) 率 20 % ， 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 組 織 p

2、 一 Cat en in 異 常 表 達(dá) 率 4 0 % ， 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 與 后 二 者 之 間有 顯 著 性 差 異 。MU CI 灰 度 值 測 定 按 有 無 淋 巴結(jié) 轉(zhuǎn) 移 分 ，按 腫 瘤 直 徑 ) 1cm 和 < ICm 分 ，兩 組 之 間 均 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 差 異 (只 0 .05 )。M U CI 異 常 表 達(dá) 率 按 有 無 淋 巴 結(jié) 轉(zhuǎn) 移 分 ，兩 組 之 間 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 差 異 (只 0 .05 )。二 分 L og isti c 回 歸 顯 示 ， 顯 著 影 響 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 發(fā) 生 的 因 素 有 M U C I 的

3、 異 常 表 達(dá) 、 p 一cate垃n 的 異 常 表 達(dá) 、 性 別 ( 女 性 好 發(fā) ) (尸< 0 .05 ) ; 與 M U C I 的表 達(dá) 率 有 顯 著 相 關(guān) 的 因 素 為 有 無 淋 巴結(jié) 轉(zhuǎn) 移 、p 一caten in 的 異 常 表 達(dá) 和 性 別 ( 女 性 好 發(fā) )(尸<0 .05 ) 。結(jié) 論 : MU CI 的 異 常 表 達(dá) 在 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 的 發(fā) 生 、 進(jìn) 展 和 轉(zhuǎn) 移 中 有 重 要 意 義 ， 它 可 以作 為 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 惡 性 行 為 的 預(yù) 測 因 子 。M UC I 的 表 達(dá) 和 p 一。at

4、 en in 的 表 達(dá) 有 顯 著 相 關(guān) 性 ，提 示 M U C I一p一caten in 途 徑 可 能 是 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 發(fā) 病 機(jī) 制 的 一 部 分 。 關(guān) 鍵 詞 】 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 ; MU CI 粘 蛋 白 ; 一p 一c at en in：浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文T H E E X P R E S S I O N A N DC L IN I C A L S I G N IF IC A N C EO FM U C I A N Dp 一C A T E N IN INPA P IL L A R YT H Y R O IDC A R C IN O MA

5、P O S T G R A D U A T EH EF E IM E N T O R SL lH O N GA b s tr a e tB a ek g rou n d an d O bjeetiv e: To inv estigate th e ex P ression s o f M U C I/ p一eaten in int h e tissu e s o f th e P a P illa ry t h y r o id c a re in o m a ，t h e n o d u la r g o ite r a n d t he e o n i r o ls ，a n d to e

6、 x P lo re t h e re la tio n sh iP b e t w e e n t h e ir e x P re ssio n s a n d t h e c a r e in o g e n e sis a n d d e v e lo P m e n t o f th e P a P illa xy th y ro id c a r e in o m a .B a ek g rou n d an d M eth o d s: T h e eXP ression s of M U C I an d p一eaten in w ere d eteetedb y in unun

7、 o h i sto c h e m ie a l m e th o d in 5 3 e a se s o f m a lig n a nt th y r o id tis su e s ，2 0 e a se s o f b e n ig n th y ro id tissu e s，a n d 2 0 c a s e s o f n o r m a l t h y ro id tis su e s ，re S P e e tiv e ly . 5 3 e a se s o f t h e P a P illa ry t h y ro id e a rc in o m a w e re d

8、 iv id e d in t o su b g r o u P s a e e o rd in g to t h ee lin ie a l f ea l刀re s su e h a s th e s iz e o f tu n lo r，w it h m e ta sta tie ly m P h n o d e s o r n o t，a g ean d sex . T h e corre lation s o f th e ex P ression s o f M U C I/ p 一eaten in w ith the elin icalP a th o lQ g ie a l P

9、a ra m e te rs o f t h e P a P illa ry t h y ro id e a rc in o m a w e re a n a ly z e d 、R e s u lts : T h e e x P re s s io n o f M U C I in th e tis su e s o f th e P a P illa ry t h y ro id c a rc in o m a in ereased sign ifiean tly (13 4 .5士10 .3 ，g ray scale) eo mP ared wi th th o se o f th e

10、n o d u lar go iter (10 1.0士7 .2 ，g ray scale) an d the co n tro ls (9 9 .1士5 .6 ，g ray scale) (P < 0 .0 5 ). T h e浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文P o sitiv e eXP ression rates of M U C I in the tissu es of th e P aP illary t翰 roid 、earein om a，t h e n o d u la r g o ite r a n d th e c o n tr o ls w e r e 5 6 .6

11、% ， 1 5 % ，a n d s % ，re sP e e tiv e ly . T h eP o sitiv e ex P ressio n rates o f p 一caten in in th e tissu es o f the P aP illary thy roid earcin om a，th e n o d u la r g o ite r a n d t h e e o n t ro ls w e re 7 1 .7 % ，4 0 % ，a n d 2 0 % ，re s P e c tiv e ly a n d t h e rew a s a sig n if ie a

12、 nt d if fe re n e e in its e x P re ssio n ra te b e t w e e n th e P a P illa ry t h y ro idcarcin om a an d the oth er tw o tissu es(P < 0 .0 5). T h e P o sitive ex P ression rat es o f M U C Iin e re a se d sig n if ie a nt ly in e a se s w i th m e ta sta tic ly m P h n o d e s c o m P a re

13、 d w i th t h o se o fn on 一m etastasis(P < 0 .0 5 ). B esid es，the ex P ression o f M U C I in creased sign ifiean tly in eases w ith tum 。: Size m ore th an I c擴(kuò) co哪 ared w ith th e 。th ers(P < 0 .05). B in 娜 L o gistie regression an aly sis sh o w ed th at sex ，M U C I an d p一eaten in w ere

14、 related wi thth e P aP illary thyro id earcin o m a (P < 0 .0 5). T h ere w as a clo se relation b etw een M U C Ian d lym P h o id in filtration ，p 一eaten in an d sex (P < 0 .05).C o n elu sion s: T h ere w as a signi fican t relatio n b etw een M U C I an d th e elin ieal features o f the P

15、 aP illary thy ro id earein om a，in d ieatin g th at M U C I m ay P lay a ro le in the carein o g en esis an d d ev eloP m ent o f P aP illary thy ro id carein om a.F urt h erm ore，the clo se relation shiP b etwe en M U C I an d p 一caten in in d ieatin g th at M U C I一p 一eate垃n P a th w a y m a y b

16、e in v o lv e d in th e m e c h a n ism o f th e P a P illa ry t h y ro id e a re in o m a . K ey w o rd s P aP illaly th 皿 o id e arc in o m a ; M U C I ; p 一e a t e n in浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文己 1.全 J l習(xí)甲狀 腺 癌 是 常 見 的 內(nèi)分 泌 腫 瘤 ，占 頭 頸 部 腫 瘤 的 首 位 ， 女 性 較 男 性 發(fā) 病 率 高 ， 臨 床 發(fā) 現(xiàn) 的 甲狀 腺 結(jié) 節(jié) 中 有 50k 一 10 % 為 甲狀

17、腺 癌 。乳 頭 狀 癌 (PTc ) 占 甲狀 腺 惡 性 腫 瘤 的 80 % ， 生 長 緩 慢 ， 相 對 其 他 惡 性 腫 瘤 預(yù) 后 好 ，但 其 中 10一 巧 % P T C 存 在 惡 性 行 為 ，表 現(xiàn) 為 局 部 侵 潤 、遠(yuǎn) 處 轉(zhuǎn) 移 ，常 規(guī) 手 術(shù) 、放 射 治 療 效果 差 ，最 后 導(dǎo) 致 死 亡 3。在 美 國 ， 每 年 診 斷 的 分 化 型 甲狀 腺 癌 為 23 ，500 例 ， 年 發(fā) 病 率 逐 漸 增 加 ， 主 要 是 PTC 發(fā) 病 率 的 增 加 川。調(diào) 查 結(jié) 果 顯 示 我 國 甲狀 腺 癌 的 發(fā) 病 率 也在 明顯 增加 41

18、。隨著 分 子 生 物 學(xué) 的 高速 發(fā) 展 和 新 科 技 的應(yīng) 用 ，人 們 對 腫 瘤 的發(fā) 生 演 變 機(jī) 制 研 究 的更 加 深 入 ，發(fā) 現(xiàn) 腫瘤 的 發(fā) 生 ，發(fā) 展 是 多 基 因參 與和 多 階 段 共 同作 用 的 結(jié) 果 。 因 而 關(guān) 于 甲狀 腺 癌 發(fā) 生 、 轉(zhuǎn) 移 相 關(guān) 的 生 物 學(xué) 指 標(biāo) 成 為 該 領(lǐng) 域 的一 個(gè) 熱 點(diǎn) 。 尋 找 新 的 免 疫 治 療 靶 點(diǎn) 將 有 助 于 開 拓 治 療 新 途 徑 ，提 高 治 療 效 果 ，提 高 患 者 的 存 活 率 ， 改 善 患 者 的 生 活 質(zhì) 量 。MU CI 是 粘 蛋 白家 族 成 員

19、 之 一 ，是 一 種 表 達(dá) 在 多 種 正 常 人 類 上 皮 細(xì) 胞 頂 面 的 多 功 能 糖 基 化 跨 膜 蛋 白 。M UC I在 腫 瘤 細(xì) 胞 表 現(xiàn) 為 異 常 表 達(dá) ，極 性 分 布 喪 失 ，影 響 細(xì) 胞 表 面 分 子 間 的 相 互 粘 附 作 用 ，使 腫 瘤 細(xì) 胞 逃 避 免 疫 系 統(tǒng) 的 監(jiān) 視 ，利 于 瘤 細(xì) 胞 的 轉(zhuǎn) 移 和 生 長 5。近 來 發(fā) 現(xiàn) ，Mu CI 還 通 過 p 一 C a t en in ( p 一 連 鎖 蛋 白 ) 和 MA P 激 酶 途 徑 介 導(dǎo) 信 號 傳 導(dǎo) ， 導(dǎo) 致 某 些 侵 襲 性 腫 瘤 行 為 。

20、 p 一cat en in 是 Wn t 經(jīng) 典 信 號 轉(zhuǎn) 導(dǎo) 通 路 的 樞 紐 ，它 能 進(jìn) 入 細(xì) 胞 核 內(nèi) 與 轉(zhuǎn) 錄 因 子 L E F / T C F 結(jié) 合 ， 啟 動(dòng) 下 游 靶 基 因的 轉(zhuǎn) 錄 ，從 而 促 進(jìn) 細(xì) 胞 增 殖 ，增 加 新 生 血 管 形 成 ， 抑 制 細(xì) 胞 凋 亡 61。有 研 究 表 明 ，p 一cat e ni n 在 多 種 實(shí) 體 腫 瘤 中 高 表 達(dá) ， 而 在 正 常 分 化 組 織 中 無 表 達(dá) 或 表 達(dá) 甚浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文微 ”。Ab r 。S im ov 等 幻報(bào) 道 : Mu C I的表 達(dá) 與 p 一連

21、鎖 蛋 白/ 周 期 蛋 白D1 的免 疫 著 色 強(qiáng) 烈 有 關(guān) ， 提 示 在 甲狀 腺 M UCI 包 含 于 w 成 信 號 轉(zhuǎn) 導(dǎo) 通 路 之 中 。W n t信 號 轉(zhuǎn) 導(dǎo) 通 路 是 近 年 來 逐 漸 被 人 們 認(rèn) 識(shí) 的 一 類 調(diào) 控 細(xì) 胞 生 長 、 發(fā) 育 和 分 化 的 重 要 途 徑 ，其 異 常 激 活 與 腫 瘤 發(fā) 生 密 切 相 關(guān) 。癌 基 因 或 抑 癌 基 因 的突 變 均 可 導(dǎo) 致 正 常 調(diào) 控 細(xì) 胞 增 生 的 調(diào) 節(jié) 途 徑 不 恰 當(dāng) 的 活 化 ，使 細(xì) 胞 增 生 失 控 而 至 腫 瘤 形 成 ， 已發(fā) 現(xiàn) W nt 信 號 途

22、 徑 的 成 分 在 多 種 人 的癌 癥 中發(fā) 生 突 變 ，如 腫 瘤 抑 制 基 因A PC 失 活 突 變 或 p一Cat en in 突 變 等 因 素 均 可 促 進(jìn) 該 通 路 異 常 激 活 ， 使 細(xì) 胞 無 力 調(diào) 節(jié) p一ca ten in 的 恰 當(dāng)水 平 ， 引 起 胞 漿 游 離 p 一c at eni n 濃 度 升 高 并 進(jìn) 入 胞 核 內(nèi) ， 促 進(jìn) 下 游 靶 基 因e一mye和eyelinDI等 的轉(zhuǎn)錄 ，引起細(xì)胞增殖 、分化 失控 。Erik笠 仁，報(bào) 道 : Mue l細(xì) 胞 質(zhì) 尾 區(qū) 抑 制 p 一連 鎖 蛋 白與 E 一cad her in (

23、E 一鈣 粘 蛋 白 ) 的 結(jié) 合 ，減 少 了 p 一連 鎖 蛋 白 向細(xì) 胞 核 內(nèi)的遷 移 ， 從 而 降低 了LEF 一 1轉(zhuǎn) 錄 因 子 的活 性 ， 阻滯 了 e y C l in D l和 e一M y e 蛋 白 的 表 達(dá) ， 并 得 出 結(jié) 論 ，M UC I通 過 p一cat en in/L EF 一1/ cy C l in D l/ C一M y c 途 徑 抑 制 細(xì) 胞 增 殖 。 故 推 測 MU CI 在 腫 瘤 細(xì) 胞的 異 常 表 達(dá) ，極 性 分 布 喪 失 可 能 削 弱M UC I 的抑 制 細(xì) 胞 增 殖 作 用 。早 在 19 9 6年 w e is

24、: 等 用 RT 一PC R 檢 測 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 、甲狀 腺 良性 病 變 組 織 中M U C I陽 性 表 達(dá) ，研 究 結(jié) 果 表 明 ，MU CI 可 作 為 甲狀 腺 癌 術(shù) 前 細(xì) 針 穿 刺 分 子 生 物學(xué) 診 斷 的 依 據(jù) 。2 00 3年 袁 時(shí) 芳 等 仁l0用 免 疫 組 化 檢 測 M UC I在 甲狀 腺 癌 及 甲狀 腺 良 、性 病 變 組 織 中 的 表 達(dá) ， 結(jié) 果 提 示 MU CI 的 陽 性 表 達(dá) 可 作 為 甲狀 腺 癌 的 鑒 別 指 標(biāo) 。 盡 管 M U CI 在 甲狀 腺 癌 的 過 度 表 達(dá) 已被 證 實(shí) ，但 M U

25、 C I和 腫 瘤 侵 襲 性 行 為 的 相 關(guān) 性 沒 有 確 定 “，因此 Mu C I在 甲狀 腺 癌 表 達(dá) 的 臨 床 意 義 仍 然 是 一 個(gè) 未 決 問題 。有 研 究 表 明M U CI 基 因 表 達(dá) 的 上 調(diào) 和 M U CI 蛋 白 的 過 度 表 達(dá) 可 以促 成 惡 性 臨 床 行 為 并 導(dǎo) 致 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 【， 然 而 2 0 0 7年 A le X a n d er y u . A b r 。S im o v 8用 免 疫 組 化 方 法浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文檢 測 MU C I和 p 一 ca t en in 、 CyC l inD

26、I 在 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 的 表 達(dá) ，在 甲狀 腺 乳 頭 狀 微 小癌 中未 找 到MU CI 表 達(dá) 和 淋 巴結(jié) 轉(zhuǎn) 移 間 的 陽性 關(guān) 系 。 因此 ，關(guān) 于MU CI 和 p 一 ca ten 加 在 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 轉(zhuǎn) 移 中 的 作 用 尚未 定 論 。本 研 究 擬 通 過 免 疫 組 織 化 學(xué)的 方 法 檢 測 甲 狀 腺 乳 頭 狀 癌 原 發(fā) 灶 組 織 中M UC I粘 蛋 白和 p 一 c at eni n 的 表 達(dá) ， 并結(jié) 合 臨床 病 例 參 數(shù) (年 齡 、性 別 、 腫 瘤 大 小 淋 巴 結(jié) 轉(zhuǎn) 移 情 況 )， 探 討 M UC

27、 I粘 蛋 白 和 p 一Ca ten in在 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 診 斷 和 轉(zhuǎn) 移 中 的 作 用 。材 料 和 方 法 1. 材 料 來 源本 實(shí) 驗(yàn) 檢 測 的 53 例 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 收 集 自 20 07 年 臺(tái) 州 市 立 醫(yī) 院病 理 科 、2007 年 臺(tái) 州 中 心 醫(yī) 院 病 理 科 、200 5 一2007 年 杭 州 市 二 醫(yī) 院 病 理 科 存 檔 蠟 塊 ，標(biāo) 本 均 經(jīng) 10 % 福 爾 馬 林 固 定 ，石 蠟 包 埋 ， 每 例 均 有 詳 細(xì) 的 臨 床 資 料 、 手 術(shù) 記 錄 。 其 中 男 性 16 例 ， 年 齡 3 0 一

28、61 歲 ， 平 均 年 齡 50 .4 歲 ; 女 性 37 例 ， 年 齡 22 一72 歲 ，平 均 年 齡 44 .8 歲 。 53 例 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 中 38 例 伴 有 淋 巴 結(jié) 轉(zhuǎn) 移 ， 其 中微 小 癌 (直 徑 < ICm) 6 例 ， 非 微 小 癌 32 例 ; 15 例 不 伴 淋 巴 結(jié) 轉(zhuǎn) 移 ， 其 中 微 小 癌 6 例 ，非 微 小 癌 9 例 。全 部 病 例 均 無 術(shù) 前 化 療 、 放 療 、 免 疫 治 療 史 。 作 為 正 常 對 照 的 20 例 正 常 甲狀 腺 標(biāo) 本 、20 例 結(jié)節(jié) 性 甲狀 腺 腫 標(biāo) 本 選 自

29、 臺(tái) 州 市 立 醫(yī) 院 和 杭 州 市二 醫(yī) 院病 理科 接 收 的 甲狀腺 手術(shù) 標(biāo)本 ，其 中正 常 甲狀 腺 組織 取 自結(jié)節(jié) 性 甲狀 腺 腫 標(biāo) 本 中 結(jié) 節(jié) 周 邊 正 常 組 織 。2 .免 疫 組 織 化 學(xué) 方 法2 . 1 試 劑浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文鼠抗 人 單 克 隆 M U CI 抗 體 原 液 (編 號 ZM 一 03 9 1) 購 自北 京 中 杉 生 物 技 術(shù) 公 司 ， 鼠抗 人 單 克 隆 p 一Cat eni n 抗 體 原 液 (編 號 ZM 一 0 4 42) 購 自北 京 中 杉 生 物 技 術(shù) 公 司 ，二抗 (羊 抗 鼠 工gG )

30、 、DAB 顯 色 試 劑 盒 均 購 自福 州 邁 新 生物 技 術(shù) 有 限公 司 。2 .2 實(shí) 驗(yàn) 儀 器 :萊 卡 顯 微 鏡 ( D M一 L B Z 型 )萊 卡 組 織 切 片 機(jī) ( R M一 2 2 3 5 型 )生 物 組 織 攤 烤 片 機(jī) ( Y T 一 6 B 型 ，湖 北 孝 感 亞 光 醫(yī)用 電子 技 術(shù) 研 究 所 ) 病 理 組 織 包 埋 機(jī) ( Y B 一 6 L F 型 ， 湖 北 孝 感 亞 光 醫(yī) 用 電子 技 術(shù) 研 究 所 ) 萊 卡 脫 水 機(jī) ( A 5 P 2 0 0 5 型 ， 德 國 )O LY M P U SB X 4 0 F 4 顯

31、 微 照 相 機(jī)N IS 一E lem e n t S B R 2 .3 0 計(jì) 算 機(jī) 圖 像 分 析 系 統(tǒng)泰 特 恒 溫 水 浴 箱 (TA D 一1 0 0 00 D E 型 )冰 箱 、 移 液 器 、 染 色 缸 、 濕 盒 、 片 架 、 電 爐 、 中 性 樹 脂 、 蘇 木 素 染 色 劑 2 .3 溶 液 配 制 :( 1 ) 0 . O IM P B S 溶 液 Z 0 0 0m l : 169 氯 化 鈉 、 0 . 4 9 氯 化 鉀 、 5 . 7 89 磷 酸 氫 二鈉 、 0 .4 9 磷 酸 二 氫 鉀 ， 雙 蒸 水 定 容 2 0 0 0 ml ， P H

32、= 7 . 2 7 . 4 。(2 ) 0 . IM 構(gòu) 椽 酸 溶 液 ZO O 0ml : 6 9 構(gòu) 椽 酸 三 鈉 、 0 .8 9 拘 椽 酸 ，雙 蒸 水 定 容2 0 0 0 m l ，P H 二6 . 4 .(3 ) 1% H ZO Z:9 7 m l 0 . O IM P B S 加 入 3m l 市 售 的 3 0 % H ZO 2.2 .4 免 疫 組 織 化 學(xué) 染 色 方 法 采 用 S 一P 超 敏 法 :( 1) 切 片 常 規(guī) 脫 蠟 和 充 分 水 化 : 石 蠟 切 片 2 一3um 貼 在 涂 有 切 片 粘 合 劑 的 載玻 片 上 ， 分 別 放 入

33、二 甲苯 I ， 11 ， 111，無 水 乙 醇 I，1 1 ， 9 5% ，浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文85% ，75% 乙醇 溶 液 各 5 分 鐘 .(2 ) 自來 水 洗 ，PBS 洗 3m in x 3 次 。(3 ) 3% H 202作 用 sm in 以消 除 內(nèi)源 性 過 氧 化 物 酶 的 活 性 ，P B S 洗 3m in x 3 次 ;(4) 抗 原 修 復(fù) : 將 切 片 置 于 構(gòu) 椽 酸 鹽 緩 沖 液 中 (0 .ol m O I/1 ，PH6 .0) ，隔 罐煮 沸 (98 ) 20mi n ， 自然 冷 卻 至 室 溫 。( 5 ) 蒸 餾 水 洗 3m

34、 in x l 次 ，P B S 洗 3m in x 3 次 。 (6 ) 加 入 I 抗 ，4 oC 過 夜 ;( 7 ) PB S 洗 3m in X 3 次 。(8 ) 加 入 I工抗 ， 置 于 37 oC 恒 溫 水 浴 箱 4 5 分 鐘 。(9 ) 蒸 餾 水 洗 3m in x l 次 ， P B S 洗 3m in 火 3 次 。( 10 ) DA B 顯 色 : 每 個(gè) 切 片 滴 加 30 p l 新 鮮 配 制 的 DAB 溶 液 顯 微 鏡 下 觀 察 顯 色 1一3 分 鐘 。PBS 洗 3m in 又3 次 。( 11) 自來 水 洗 ，復(fù) 染 ( 蘇 木 素 復(fù)

35、 染 1 分 鐘 20 秒 ，溫 水 返 藍(lán) 20 分 鐘 ，細(xì) 水 沖 洗 30 分 鐘 ，脫 水 )， 中 性 樹 脂 封 片 ，鏡 下 觀 察 結(jié) 果 。2 . 5 對 照每 一 批 免 疫 組 化 染 色 過 程 中 ， 均 放 置 一 張 已 知 M U CI 染 色 陽 性 的 乳 腺 癌 組 織 切 片 作 為 陽 性 對 照 ; p 一caten in 陽 性 對 照 采 用 己 知 p 一catenin 染 色 陽 性 的 正 常 甲狀 腺 組 織 切 片 ; 兩 個(gè) 指 標(biāo) 均 以 P BS 代 替 一 抗 的 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 組 織 切 片 作 為 陰性 對 照

36、 。2 .6 結(jié) 果 判 定 :Mu CI 粘 蛋 白光 鏡 下 以在 腔 頂 膜 、 無 極 性 的 細(xì) 胞 膜 和 才或 細(xì) 胞 漿 出現(xiàn) 棕 黃 色 、 棕 褐 色 顆 粒 狀 或 均 質(zhì) 染 色 為 陽 性 信 號 ， 光 學(xué) 顯 微 鏡 下 用 N IS 一E lem en t s BR 2 .30浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文計(jì) 算 機(jī) 圖像 分 析 系 統(tǒng) 進(jìn) 行 灰 度 分 析 ?；?度 數(shù) 值 愈 高 表 示 染 色 程 度 越 深 、 范 圍越 大 ， 提 示 MU CI 粘 蛋 白表 達(dá) 量 愈 高 。在 光 學(xué) 顯 微 鏡 下 觀 察 全 片 ，對 切 片 染 色 陽性

37、 情 況 進(jìn) 行 評 估 ，棕 黃 色顆 粒 為 染 色 陽性 。結(jié)果 判 定參 照 文 獻(xiàn) 明進(jìn) 行 。隨機(jī)選 取 5 個(gè) 高 倍 視 野 ，根 據(jù) 陽性 細(xì) 胞 數(shù) 量 、 百 分 率 ，表 達(dá) 強(qiáng) 度 分 為 4 級 : 0 級 為 無 明顯 陽性 反 應(yīng) 細(xì) 胞 ; 1 級 為 陽 性 細(xì) 胞 < 25 % 、 弱 染 色 ;2級 為 陽 性 細(xì) 胞 在 25 % 75 % 之 間 ;3級 為 陽 性 細(xì) 胞 > 75 % 、 強(qiáng) 染 色 。 0 1 級 判 為 正 常 表 達(dá) ;2 3 級 判 為 異 常 表 達(dá) 。 p 一cat en in 光 鏡 下 以在 細(xì) 胞 膜

38、 、 細(xì) 胞 漿 、細(xì) 胞 核 出現(xiàn) 棕 黃 色 、棕 褐 色 顆 ?；?均 質(zhì) 染 色 為 陽 性 信 號 。每 例 在 顯 微 鏡 下 隨機(jī) 選 擇 10 個(gè) 高 倍 鏡 視 野 (4OO X) ， 每 個(gè) 視 野 計(jì) 數(shù) 100 個(gè) 甲狀 腺 濾 泡 上 皮 細(xì) 胞 ，計(jì) 算 陽 性 細(xì) 胞 百 分 比 。在 正 常 甲狀 腺 濾 泡 上 皮 細(xì) 胞 中 ， p 一cat eni n 陽 性 染 色 定 位 于 細(xì) 胞 膜 ，呈 棕 黃 色 細(xì) 小 顆 粒 狀 。 用 PB S 代 替 一 抗 作 陰性 對 照 ，用 甲狀 腺 正 常 上 皮 組 織 標(biāo) 本 作 陽 性 對 照 ， 結(jié)

39、果 判 定 參 照 文 獻(xiàn) 3。 細(xì) 胞 膜 上 出 現(xiàn) 棕 黃 染 色 的 為 陽 性 細(xì) 胞 ， 陽 性 細(xì) 胞 數(shù) ) 9 0% 的 細(xì) 胞 膜 表 達(dá) 為 正 常 表 達(dá) ， 細(xì) 胞 漿 、 細(xì) 胞 核 表 達(dá) 及 陽性 細(xì) 胞 數(shù) < 9 0% 的細(xì) 胞 膜 表 達(dá) 為 異 常 表 達(dá) 。 由于 p 一ca t eni n 在 正 常 細(xì) 胞 為 膜 表 達(dá) ，在 腫 瘤 細(xì) 胞 為 膜 表 達(dá) 減 少 或 缺 失 、 出 現(xiàn) 細(xì) 胞 漿 核 表 達(dá) ， 而 灰 度 測 定 是 反 映 表 達(dá) 量 的 指 標(biāo) ， 不 能 準(zhǔn) 確 反 映 表 達(dá) 部 位 的 變 化 ， 故 未

40、進(jìn) 行 灰 度 測 定 。所 有 計(jì) 量 數(shù) 據(jù) 均 由 2 名 實(shí) 驗(yàn) 者 采 用 盲 法 (獨(dú) 立 檢 測 ) 進(jìn) 行 檢 測 。若 有 分 歧 ，則 在 共 覽 顯 微 鏡 下 共 同觀 察 解 決 。2 . 7統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 處 理采 用 SP SS 13 .O 統(tǒng) 計(jì) 軟 件 進(jìn) 行 統(tǒng) 計(jì) 分 析 。根 據(jù) 資 料 的 性 質(zhì) ， 計(jì) 量 數(shù) 據(jù) 采 用 x 一士S表 示 ， 兩 兩 組 間 比較 采 用 on e W ay AN OV A 法 。 計(jì) 數(shù) 資 料 采 用 C h i一squ ar e法 。 回 歸 分 析 采 用 E n t er 法 二 分 L o g iS七ic

41、回 歸 。 取 尸< 0 .05 為 檢 驗(yàn) 水 準(zhǔn) 。浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文結(jié) 果1.正 常 甲狀腺 組織 、結(jié)節(jié) 性 甲狀 腺腫 及 甲狀 腺 乳 頭狀 癌 中各 指 標(biāo) 的表達(dá) Mu cl 粘 蛋 白在 正常 甲狀 腺 組 織 、結(jié)節(jié) 性 甲狀 腺 腫及 甲狀 腺乳 頭狀癌 中的表 達(dá) : 在 正 常 甲狀 腺 濾 泡 上 皮 細(xì) 胞 中 ，MU CI 主 要 定 位 于 腔 頂 面 的 細(xì) 胞 膜 ， 呈極 性 分 布 ，未 見 其 他 面 細(xì) 胞 膜 和 細(xì) 胞 漿 、細(xì) 胞 核 表 達(dá) 。在 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 的 甲狀 腺 濾 泡 上 皮 細(xì) 胞 中 ，M U

42、 CI的 定 位 與 正 常 相 似 。在 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 的乳 頭 上 皮 細(xì) 胞 中 ，M UC I 腔 頂 面 表 達(dá) 加 強(qiáng) ， 并 可 見 其 他 面 細(xì) 胞 膜 表 達(dá) 和 細(xì) 胞 漿 、 細(xì) 胞 核 表 達(dá) ?；?度 值 統(tǒng) 計(jì) ， 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 的 M U CI 表 達(dá) 量 顯 著 高 于 正 常 甲 狀 腺 組 織 和 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 組 織 (只 0 .01 ); 正 常 甲狀 腺 組 織 和 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 組 織 的 MU CI 表 達(dá) 量 沒 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 差 異 (乃 0 .05) 。(見 表 l) 。 以光 鏡 下 評

43、判 ， 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 MU CI 異 常 表 達(dá) 率 顯 著 高 于 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 (只 0.0 5) ; 甲 狀 腺 乳 頭 狀 癌 的 M UC I 異 常 表 達(dá) 率 顯 著 高 于 結(jié) 節(jié) 性 甲 狀 腺 腫 組 織 (只 0 .0 5 ); 正 常 甲狀 腺 組 織 和 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 組 織 的 MU CI 異 常 表 達(dá) 率 沒 有統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 差 異 (乃 0 .0 5 ) 。 (見 表 l 、 圖 l ) 。表 1.MU CI 在 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 、 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 和 正 常 甲狀 腺 組 織 中 的表 達(dá)M U C I

44、的 表 達(dá)組 織 類 型例 數(shù)M U C I 灰 度異 常 表 達(dá) 率 % 異異 常常正正 常常甲狀 腺 乳 頭 狀 癌1 3 4 .5 士 1 0 .3 * “結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫10 1 .0 士 7 .2正 常 甲狀 腺9 9 .1 士 5 .6浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文* 與 正 常 對 照 組 比較 只 0 . 0 1 ; # 與 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 組 比較 只 0. 0 1* 與 正 常 對 照 組 比較 只 0，0 1 ; # 與 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 組 比較 只 0 .0 1圖 1. MU C I 在 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 、 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫

45、 和 正 常 甲狀 腺 組 織 中 的異 常 表達(dá) 率p 一ca te ni n 在 正 常 甲狀 腺 組 織 、結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 及 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 中 的表 達(dá) : 在 正 常 甲狀 腺 濾 泡 上 皮 細(xì) 胞 中 ， p 一cat 。ni n 主 要 定 位 于 細(xì) 胞 膜 ，未 見 異 常 表 達(dá) 。 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 中 p 一。at 。ni n 出現(xiàn) 異 常 表 達(dá) ，呈 現(xiàn) 不 連 續(xù) 或 不 顯 示 膜 染 色 ， 并 伴 有 胞 漿 染 色 。 p 一cat eni n 表 達(dá) 在 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 與 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 、 甲狀 腺

46、 乳 頭 狀 癌 與 正 常 甲狀 腺 組 織 之 間 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 差 異 (尸 (0 .05 )， 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 與 正 常 甲狀 腺 組 織 之 間 p 一。at 。ni n 的 異 常 表 達(dá) 沒 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 差 異 (尸>0 .05 )。 (見 表 2 、 圖 2 ) 。浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文表 2 .p 一ca ten in 在 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 、結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 和 正 常 甲狀 腺 組 織 中 的表 達(dá)日一e a t en in 的 表 達(dá)組 織 類 型例 數(shù)異 常 表 達(dá) 率 %異 常正 常甲狀 腺 乳 頭 狀 癌7 1 .

47、7 .犯性 甲狀 腺 腫正 常 甲狀 腺* 與 正 常 對 照 組 比較 只 0 .0 5 ; # 與 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 組 比較 只 0 .0 1* 與 正 常 對 照 組 比較 只 0 . 0 5 ; # 與 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 組 比 較 只 0 . 0 1圖 2 . p 一ca te n in 在 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 、 結(jié) 節(jié) 性 甲狀 腺 腫 和 正 常 甲狀 腺 組 織中 的 異 常 表 達(dá) 率2 .MU cl 粘 蛋 白和 p 一ca te ni n 的表 達(dá) 與 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 臨床 特 點(diǎn)及 病 理 特征 的 關(guān) 系MU cl 的 表 達(dá) 與

48、甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 臨 床 特 點(diǎn) 及 病 理 特 征 的 關(guān) 系浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文MU CI的 表 達(dá) 強(qiáng) 度 在 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 患 者 的 不 同腫 瘤 直 徑 、 有 無 淋 巴結(jié) 轉(zhuǎn) 移組 別 有 顯 著 差 異 ( 只 0. 05 ) 。 而 在 不 同 性 別 、 年 齡 組 別 之 間 無 顯 著 性 差 異 ( 尸> 0 . 0 5 ) 。 ( 見 表 3 )表 3 . MU CI 表 達(dá) 的 灰 度 與 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 臨 床 資 料 及 病 理 特 征 的 關(guān) 系特 征狀 態(tài)例 數(shù)M U C I 灰 度尸值男1613 3 . 0

49、 士9 . 9性 別0 . 4 8 7女3 713 5 . 2 士 10 .6< 4 52 31 3 6 . 0 士 1 0 . 6年 齡 ( 歲 )0 . 3 7 0) 4 53 01 3 3 . 4 士 1 0 . 2) 14 113 6 . 2 士 1 0 . 7*腫 瘤 直 徑 ( em )0 . 0 23( 1一1 21 2 8 . 6 士 6 . 3有3 813 7 . 7 士 9 . 8 *淋 巴 結(jié) 轉(zhuǎn) 移0 .0 0 0無1512 6 . 6 士 6 . 9* 按 有 無 淋 巴 結(jié) 轉(zhuǎn) 移 分 ， 兩 組 之 間 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 差 異 ， 按 腫 瘤 直 徑 大 小

50、 分 ， 兩 組 之 間有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 差 異 ; 其 余 組 無 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 差 異 。2 . 1.2 MU CI 的 異 常 表 達(dá) 率 在 甲 狀 腺 乳 頭 狀 癌 患 者 的 有 無 淋 巴 結(jié) 轉(zhuǎn) 移 組 別 有 顯 著 差 異 ( 只 0 .05 ) 。 而 在 不 同 腫 瘤 直 徑 、 性 別 、 年 齡 組 別 之 間 無 顯 著 性 差 異 (乃 0 .0 5 ) 。 ( 見 表 4 、 圖 3 ) 。浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文表 4 . MU CI 的表 達(dá) 與 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 臨床 資 料 及 病 理 特 征 的關(guān) 系M U C I 表 達(dá)特 征狀 態(tài)例

51、 數(shù)尸值正 常異 常異 常 表 達(dá) 率 %性 別0 . 5 2 45 9 . 5<沁到455 2 . 2年 齡 (歲 )0 . 5 6 96 05 6 . 1腫 瘤 直 徑 (c口)0 . 8 9 15 8 . 36 8 . 4淋 巴 結(jié) 轉(zhuǎn) 移0 . 0 0 6巧1 12 6 . 7* 兩 組 比 較 只 0 . 0 1圖 3 . MU C I 的 表 達(dá) 與 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 臨 床 資 料 及 病 理 特 征 的 關(guān) 系2 .Zp 一。at en in 的表 達(dá) 與 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 臨 床 資 料 及 病 理 特 征 的 關(guān) 系浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文p 一

52、cat on in 的異 常 表 達(dá) 率 在 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 患 者 的不 同性 別 、年 齡 、腫 瘤 大 小 、有 無 淋 巴結(jié) 轉(zhuǎn) 移 組 別 均 無 顯 著 性 差 異 。(見 表 5 、 圖 4) 。表 5. p 一ca te n in 的表 達(dá) 與 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 臨床 資 料 及 病 理 特 征 的關(guān) 系日一ea t en in 表 達(dá)特 征狀 態(tài)例 數(shù)正 常異 常異 常 表 達(dá) 率 %< 4 5年 齡 ( 歲 )0 . 7 5 4) 4 57 3 . 2腫 瘤 直 徑 (cm )6 6 . 7淋 巴 結(jié) 轉(zhuǎn) 移0 . 8 6 8無1541 17 3 .

53、 3圖 4 .p 一。a teni n 的 表 達(dá) 與 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 臨床 資 料 及 病 理 特 征 的 關(guān) 系浙 江 大 學(xué) 碩 士 論 文3 . _ MU C I 和 p 一ea t 。n in 的 關(guān) 系3 . 1 影 響 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 發(fā) 生 的 回 歸 分 析二 分 Lo g isti c 回 歸 顯 示 ，顯 著 影 響 甲 狀 腺 乳 頭 狀 癌 發(fā) 生 的 因 素 有 MU CI 的 異 常 表 達(dá) 率 、 p 一cat eni n 的 異 常 表 達(dá) 率 、 性 別 ( 女 性 好 發(fā) ) (只 0 . 0 5 ) ; 無 顯 著 影 響 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 發(fā) 生 的 因 素 為 年 齡 ( 乃 0 . 0 5 ) 。 (見 表 7 ) 。表 6 . 影 響 甲狀 腺 乳 頭 狀 癌 發(fā) 生 的 回 歸 分 析9 5% 可 信 區(qū) 間特 征回 歸 系 數(shù)標(biāo) 準(zhǔn) 誤W a ld 值尸值相 對 危 險(xiǎn) 度L o w e rU P P e r2 . 1 7 40 d亡匕八qd二 讓J乙n人J1 1 . 1 3 60 . 0