有機(jī)合成中展開(kāi)劑的選擇

1、（一）有機(jī)合成中展開(kāi)劑的選擇    做有機(jī)合成時(shí)走板子是常有的事，展開(kāi)劑的選擇就至關(guān)重要了。選擇適當(dāng)?shù)恼归_(kāi)劑是首要任務(wù).一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用單一溶劑，往往不能達(dá)到很好的分離效果，往往使用混合溶劑通常使用一個(gè)高極性和低級(jí)性溶劑組成的混合溶劑，高極性的溶劑還有增加區(qū)分度的作用，展開(kāi)劑的比例要靠嘗試.一般根據(jù)文獻(xiàn)中報(bào)道的該類化合物用什么樣的展開(kāi)劑，就首先嘗試使用該類展開(kāi)劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個(gè)分離效果好的展開(kāi)劑。展開(kāi)

2、劑的選擇條件：對(duì)的所需成分有良好的溶解性；可使成分間分開(kāi)；待測(cè)組分的Rf在0.20.8之間，定量測(cè)定在0.30.5之間；不與待測(cè)組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；沸點(diǎn)適中，黏度較??；展開(kāi)后組分斑點(diǎn)圓且集中；混合溶劑最好用新鮮配制。  一般來(lái)說(shuō)，弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成，再根據(jù)需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯來(lái)調(diào)節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性，以達(dá)到好的分離效果，適合于生物堿、黃酮、萜類等的分離；  中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相組成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來(lái)調(diào)節(jié)，適合于蒽醌、香豆素，以及一些極性較大的木脂素和萜類的分離；   

3、 強(qiáng)極性溶劑，由正丁醇和水組成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來(lái)調(diào)節(jié)，適合于極性很大的生物堿類化合物的分離。   很多時(shí)候,展開(kāi)劑的選擇要靠自己不斷變換展開(kāi)劑的組成來(lái)達(dá)到最佳效果。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中，為了實(shí)現(xiàn)一個(gè)配體與其他雜質(zhì)有效分離，曾經(jīng)嘗試了很多種的溶劑組合，最后才找到石油醚EtOAcHCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶劑。一般把兩種溶劑混合時(shí),采用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑,如果有分開(kāi)的跡象,再調(diào)整比例（或者加入第三種溶劑）,達(dá)到最佳效果；如果沒(méi)有分開(kāi)的跡象（斑點(diǎn)較“拖”），最好是換溶劑。對(duì)于在硅膠中這種酸性物質(zhì)上易分解的物質(zhì)，在展開(kāi)劑里

4、往往加一點(diǎn)點(diǎn)三乙胺，氨水，吡啶等堿性物質(zhì)來(lái)中和硅膠的酸性。（選擇所添加的堿性物質(zhì)，還必須考慮容易從產(chǎn)品中除去，氨水無(wú)疑是較好的選擇。）    分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質(zhì)量很有關(guān)系：不同廠家生產(chǎn)的硅膠可能含水量以及顆粒的粗細(xì)程度，酸性強(qiáng)弱不同，從而導(dǎo)致產(chǎn)品在某個(gè)廠家的硅膠中分離效果很好，但在另一個(gè)廠家的就不行。溶劑的含水量和雜質(zhì)含量對(duì)分離效果都有明顯的影響。溫度，濕度對(duì)分離效果影響也很明顯，在實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)有時(shí)同一展開(kāi)條件，上下午的Rf截然不同 。    展開(kāi)劑的選擇主要根據(jù)樣品的極性、溶解度和吸附

5、劑的活性等因素來(lái)考慮，在進(jìn)行薄層層析時(shí)，首先應(yīng)該知道未知化學(xué)成分的類型，其極性的大致歸屬，從提取液或從色譜柱的流動(dòng)相極性可知，另外某樣品里含多種化學(xué)成分先按極性不同大致分，然后細(xì)分，對(duì)于分離未知的化學(xué)物質(zhì)，展開(kāi)劑的選擇也是一個(gè)摸索的過(guò)程，不應(yīng)該僅僅從展開(kāi)劑考慮，多因素綜合衡量！溶劑：層析過(guò)程中溶劑的選擇，對(duì)組分分離關(guān)系極大。在柱層析時(shí)所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習(xí)慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時(shí)常稱展開(kāi)劑。洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì)這兩者結(jié)合起來(lái)加以考慮在用極性吸附劑進(jìn)行層析時(shí)，當(dāng)被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質(zhì)為強(qiáng)極性成分，則須選用極性

6、溶劑為洗脫劑。如果對(duì)某一極性物質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），則洗脫劑的極性亦須相應(yīng)降低。在柱層操作時(shí)，被分離樣品在加樣時(shí)可采用于法，亦可選一適宜的溶劑將樣品溶解后加入。溶解樣品的溶劑應(yīng)選擇極性較小的，以便被分離的成分可以被吸附。然后漸增大溶劑的極性。這種極性的增大是一個(gè)十分緩慢的過(guò)程，稱為“梯度洗脫”，使吸附在層析柱上的各個(gè)成分逐個(gè)被洗脫。如果極性增大過(guò)訣（梯度太大），就不能獲得滿意的分離。溶劑的洗脫能力，有時(shí)可以用溶劑的介電常數(shù)（）來(lái)表示。介電常數(shù)高，洗脫能力就大。以上的洗脫順序僅適用于極性吸附劑，如硅膠、氧化鋁。對(duì)非極性吸附劑，如活性炭，則正好與上述順序相反，在水或

7、親水住溶劑中所形成的吸附作用，較在脂溶性溶劑中為強(qiáng)。  被分離物質(zhì)的性質(zhì)    被分離的物質(zhì)與吸附劑，洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析中的三個(gè)要素，彼此緊密相連。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下，各個(gè)成分的分離情況，直接與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)。對(duì)極性吸附劑而言，成分的極性大，吸附住強(qiáng)。當(dāng)然，中草藥成分的整體分子觀是重要的，例如極性基團(tuán)的數(shù)目愈多，被吸附的住能就會(huì)更大些，在同系物中碳原子數(shù)目少些，被吸附也會(huì)強(qiáng)些?？傊灰獌蓚€(gè)成分在結(jié)構(gòu)上存在差別，就有可能分離，關(guān)鍵在于條件的選擇。要根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)，吸附劑的吸附強(qiáng)度，與溶劑的性質(zhì)這三者的

8、相互關(guān)系來(lái)考慮。首先要考慮被分離物質(zhì)的極性。如被分離物質(zhì)極性很小為不含氧的萜烯，或雖含氧但非極性基團(tuán)，則需選用吸附性較強(qiáng)的吸附劑，并用弱極性溶劑如石油醚或苯進(jìn)行洗脫。但多數(shù)中藥成分的極性較大，則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑（一般級(jí)）。采用的洗脫劑極性應(yīng)由小到大按某一梯度遞增，或可應(yīng)用薄層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統(tǒng)中的分離情況。此外，能否獲得滿意的分離，還與選擇的溶劑梯度有很大關(guān)系?，F(xiàn)以實(shí)例說(shuō)明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關(guān)系。如有多組分的混合物，象植物油脂系由烷烴、烯烴、舀醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份。如對(duì)于C-27甾體皂甙元類成分，能因其分字中羥基數(shù)目的多少而獲得分離：

9、將混合皂甙元溶于含有5氯仿的苯中，加于氧化鋁的吸附柱上，采用以下的溶劑進(jìn)行梯度洗脫。如改用吸附性較弱的硅酸鎂以替代氧化鋁，由于硅酸鎂的吸附性較弱，洗脫劑的極牲需相應(yīng)降低，亦即采用苯或含5氯仿的苯，即可將一元羥基皂甙元從吸附劑上洗脫下來(lái)。這一例子說(shuō)明，同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中層析時(shí)，需用不同的溶劑才能達(dá)到相同的分離效果，從而說(shuō)明吸附劑、溶劑和欲分離成分三者的相互關(guān)系。 （二）簿層層析：薄層層析是一種簡(jiǎn)便、快速、微量的層析方法。一般將柱層析用的吸附劑撒布到平面如玻璃片上，形成一薄層進(jìn)行層析時(shí)一即稱薄層層析。其原理與柱層析基本相似。   1薄層層析的特

10、點(diǎn)：薄層層析在應(yīng)用與操作方面的特點(diǎn)與柱層析的比較。 2吸附劑的選擇：薄層層析用的吸附劑與其選擇原則和柱層析相同。主要區(qū)別在于薄層層析要求吸附劑（支持劑）的粒度更細(xì)，一般應(yīng)小于250目，并要求粒度均勻。用于薄層層析的吸附劑或預(yù)制薄層一般活度不宜過(guò)高，以級(jí)為宜。而展開(kāi)距離則隨薄層的粒度粗細(xì)而定，薄層粒度越細(xì)，展開(kāi)距離相應(yīng)縮短，一般不超過(guò)10厘米，否則可引起色譜擴(kuò)散影響分離效果。 3展開(kāi)劑的選擇：薄層層析，當(dāng)吸附劑活度為一定值時(shí)（如或級(jí)），對(duì)多組分的樣品能否獲得滿意的分離，決定于展開(kāi)劑的選擇。中草藥化學(xué)成分在脂溶性成分中，大致可按其極性不同而分為無(wú)極性、弱極性、中極性與強(qiáng)極性。但

11、在實(shí)際工作中，經(jīng)常需要利用溶劑的極性大小，對(duì)展開(kāi)劑的極性予以調(diào)整。薄層色譜小知識(shí)1、怎樣提高點(diǎn)樣效率？   點(diǎn)樣是造成TLC定量誤差的主要來(lái)源。  實(shí)驗(yàn)證明：定量毛細(xì)管更適合較小體積的點(diǎn)樣；微量注射器更適合較大體積的點(diǎn)樣。這主要是因?yàn)槲⒘孔⑸淦魇苄馀?、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細(xì)管理體制的占樣誤差，建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細(xì)管。但應(yīng)注意更換樣品時(shí)，應(yīng)將毛細(xì)管用超聲波或不同極性溶課劑清洗干凈。在制備樣品時(shí)，溶樣溶劑黏度不能過(guò)高，以便于點(diǎn)樣；溶劑沸點(diǎn)過(guò)低則進(jìn)樣體積易變，過(guò)高則會(huì)改變展開(kāi)劑組成；對(duì)樣品溶解度過(guò)高會(huì)使樣點(diǎn)發(fā)生空

12、心現(xiàn)象，常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典TLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑3mm點(diǎn)間距離1-2cm底邊距離1.5cm;HPLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑1mm點(diǎn)間距5mm底邊距1cm. 2、展開(kāi)劑的選擇   TLC與HPLC相比，一個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)就是流動(dòng)相的選擇具有更大的靈活性，流動(dòng)相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.10.7之間并達(dá)到較好的分離，與此對(duì)應(yīng)的是流動(dòng)相要有適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度和組成。流動(dòng)相強(qiáng)度越大，溶質(zhì)Rf值越大，但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物、根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。一般展開(kāi)劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜

13、板性質(zhì)選擇一個(gè)二元溶劑體系，通過(guò)調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合Rf值，適合的Rf值找到后，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個(gè)，以這三個(gè)組成為三點(diǎn)組成一個(gè)三角形，則可看到：三角形頂點(diǎn)是二元體系，邊是三元體系，三角形內(nèi)是四元體系，并且極性一致，可根據(jù)幾何原理得出任一點(diǎn)組成，這種方法較為直觀，也較簡(jiǎn)單。   3、TLC的通用顯色方法  理想的顯色希望靈敏度高，斑點(diǎn)顏色穩(wěn)定、斑點(diǎn)與背景間的對(duì)比度好，斑點(diǎn)的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比，在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要，通用顯色方法主要有：  1、紫外照射法：方便

14、、不破壞樣品；  2、碘蒸氣法：通用性強(qiáng)，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用；  3、熒光試劑：制造熒光背景，使原來(lái)紫外下無(wú)熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯；  4、硫酸溶劑：對(duì)絕大多數(shù)有機(jī)物有效，但有破壞性。 中藥材薄層色譜展開(kāi)系統(tǒng)之淺見(jiàn) 工作幾年以來(lái)，主要運(yùn)用薄層色譜分離方法對(duì)中藥材成分進(jìn)行分析。薄層色譜直觀的色彩圖像表達(dá)方式是一大特點(diǎn)，通過(guò)各種展開(kāi)劑的靈活運(yùn)用可將中藥材分成不同極性組分進(jìn)行分離，充分展現(xiàn)出層析分離的意義。根據(jù)這幾年的摸爬滾打，反復(fù)實(shí)踐，總結(jié)出一點(diǎn)展開(kāi)系統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn)。由于接觸的藥材有限，有些仍不夠

15、深入，因此觀點(diǎn)可能有些片面，鄙薄之處望多多包涵！說(shuō)明：以下使用的板為硅膠正相薄層板 1 黃酮類經(jīng)典展開(kāi)劑：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：4：1），該系統(tǒng)還可用于香豆素類，三萜類成分分離，比例應(yīng)作適當(dāng)調(diào)整。 2 正己烷-乙酸乙酯或環(huán)己烷-乙酸乙酯系統(tǒng)，可分離極性相對(duì)較小的系統(tǒng)，如單萜類，木脂素類成分?？蛇m當(dāng)加甲酸，因己烷系統(tǒng)易使斑點(diǎn)擴(kuò)散，甲酸對(duì)酸性成分分離有幫助。 3 乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）是甘草的展開(kāi)系統(tǒng)，但其適用性很廣，可用于中等極性的成分如綠原酸，DCQ，黃芩苷等。人參系統(tǒng)氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15：40：

16、22：10）(冰箱分層取上層溶液)也是一個(gè)不錯(cuò)的分離中等極性的展開(kāi)劑。 4  若改變展開(kāi)系統(tǒng)對(duì)分離幫助不大時(shí)，可考慮用變性板，如0.5或1NaOH溶液，0.1M NaH2PO4，0.1M Na2HPO4等。變性板還可調(diào)整斑點(diǎn)的Rf值，可將其減低。 5  氯仿是藥典和文獻(xiàn)廣泛使用的展開(kāi)溶劑，由于毒性較大，現(xiàn)在正逐漸用其他溶劑替代。有氯仿的兩相系統(tǒng)易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，這與其沸點(diǎn)較低易揮發(fā)有關(guān)，若在其中加入些許酸或堿對(duì)分離可能產(chǎn)生意想不到的結(jié)果，特別是中藥復(fù)方制劑時(shí)排除陰性干擾時(shí)，用量視情況而定。總之，展開(kāi)系統(tǒng)的千變?nèi)f化使薄

17、層色譜有了更多可操作可摸索的空間，因此有了更為豐富多彩的色譜圖像，若能結(jié)合其它色譜得知化學(xué)成分的一一歸屬關(guān)系就更加深刻了。柱層析和TLC操作關(guān)鍵柱層析和TLC是有機(jī)化學(xué)工作者必須下苦功夫的兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。這兩項(xiàng)技術(shù)掌握與否，對(duì)于提高實(shí)驗(yàn)的效率至關(guān)重要。常見(jiàn)的例子是：在柱層析時(shí)，由于層析柱中的硅膠填料裝得不均勻（沒(méi)有填嚴(yán)實(shí)），使得柱子在淋洗過(guò)程中就因?yàn)槌霈F(xiàn)太多氣泡變花，導(dǎo)致分離效果不好。更常見(jiàn)的例子是：層析柱雖然裝得不錯(cuò)，但是由于淋洗劑選擇不恰當(dāng)，結(jié)果導(dǎo)致幾十毫克產(chǎn)品，用了幾百毫升淋洗劑都還沒(méi)有完全分離。分離同樣的東西，熟手可能只需要半個(gè)小時(shí)，而一個(gè)層析技術(shù)不過(guò)關(guān)的人可能半天都不能得到純品。由此可

18、見(jiàn)，這兩項(xiàng)技術(shù)掌握與否，對(duì)于提高工作效率，減輕工作量，減少有機(jī)溶劑的使用，從而對(duì)身心健康和環(huán)境保護(hù)都有明顯的作用。     柱層析關(guān)鍵在于柱子是否裝好和淋洗劑是否選擇恰當(dāng)。而淋洗劑的選擇則是通過(guò)TLC確定。這里要指出的一點(diǎn)是：TLC的作用除了跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，檢測(cè)試劑和原料純度外，一個(gè)重要的用途就是為柱層析選擇適當(dāng)?shù)牧芟磩?#160;      首先談柱層析：     裝柱子（添硅膠）時(shí)，有兩種方法：即濕法裝柱和干法裝柱，二者各有優(yōu)劣。不

19、論干法還是濕法，硅膠（固定相）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右，太短了可能分離效果不好，太長(zhǎng)了也會(huì)由于擴(kuò)散或拖尾導(dǎo)致分離效果不好。     濕法裝柱是先把硅膠用適當(dāng)?shù)娜軇┌鑴蚝螅偬钊胫又?，然后再加壓用淋洗劑“走柱子”，本法最大的?yōu)點(diǎn)是一般柱子裝的比較結(jié)實(shí)，沒(méi)有氣泡。      干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側(cè)，至硅膠界面不再下降為止，然后再填入硅膠至合適高度，最后再用油泵直接抽，這樣就會(huì)使得柱子裝的很結(jié)實(shí)。接著是用淋洗劑“走柱子

20、”，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開(kāi)劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。通常上面加壓，下面再用油泵抽，這樣可以加快速度。干法裝柱較方便，但最大的缺陷在于“走柱子”時(shí)，由于溶劑和硅膠之間的吸附放熱（可以用手摸柱子明顯感覺(jué)到），容易產(chǎn)生氣泡，這一點(diǎn)在使用低沸點(diǎn)的淋洗劑時(shí)如乙醚，二氯甲烷更為明顯。雖然產(chǎn)生的氣泡在加壓的情況下不易察覺(jué)，但是，一旦撤去壓力，如在上樣、加溶劑等操作的時(shí)候，氣泡就會(huì)釋放出來(lái)，嚴(yán)重時(shí)，整個(gè)柱子變花，樣品不可能平整地通過(guò)，當(dāng)然也就談不上分離了。解決的辦法是：第一、硅膠一定要天結(jié)實(shí)；第二、一定要用較多的溶劑“走柱子”，一定要到柱子的下端不再發(fā)燙，恢復(fù)到室溫后再撤去壓力。也有介紹在硅膠

21、的最上層填上一小層石英砂，防止添加溶劑的時(shí)候，使得樣品層不再整齊。但我的感覺(jué)是如果小心上樣，添加溶劑，則沒(méi)有這個(gè)必要。      上樣也有干法和濕法之分：干法就是把待分離的樣品用少量溶劑溶解后，在加入少量硅膠，拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。干法上樣較麻煩，但可以保證樣品層很平整。濕法上樣就是用少量溶劑（最好就是展開(kāi)劑，如果展開(kāi)劑的溶解度不好，則可以用一極性較大的溶劑，但必須少量）將樣品溶解后，再用膠頭滴管轉(zhuǎn)移得到的溶液，沿著層析柱內(nèi)壁均勻加入。然后用少量溶劑洗滌后，再加入。濕法較方便，熟手一般采用此法。

22、0;    上樣完畢后，接著即用淋洗劑淋洗。淋洗劑一般采用TLC分析得到的展開(kāi)劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。由于層析柱和薄板的不同，即使兩者使用的硅膠都相同，但是在把TLC分析得到的展開(kāi)劑用在柱層析時(shí)，也顯得極性偏大，所以要稀釋一倍，但又不能稀釋太多，否則成了靠擴(kuò)散作用來(lái)分離，效果也不會(huì)好。     接下來(lái)談TLC，需要切記的是：     第一、某種樣品在這種展開(kāi)劑中只顯示一個(gè)點(diǎn)，并不等于在別的展開(kāi)劑中也只顯示一個(gè)點(diǎn)。因此在尋找展開(kāi)劑時(shí)，多嘗試幾種比例不同，

23、成分不同的展開(kāi)劑。展開(kāi)劑的極性太小，點(diǎn)分不開(kāi)，極性太大，也分不開(kāi).一般以目標(biāo)產(chǎn)物的Rf值在0.3左右為最佳。     第二、點(diǎn)不能點(diǎn)得太濃,否則容易重疊,不易判斷,因?yàn)槿绻麅蓚€(gè)點(diǎn)相近的話,一濃就變成一個(gè)點(diǎn)了。      第三、板上點(diǎn)的展開(kāi)的清晰程度和溶劑的極性和物質(zhì)在該溶劑中的溶解性有關(guān)，只有兩者比較合適了，才能有一個(gè)交好的分離效果。選擇適當(dāng)?shù)恼归_(kāi)劑是首要任務(wù).一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙

24、酮<乙醇<甲醇使用單一溶劑，往往不能達(dá)到很好的分離效果，往往使用混合溶劑通常使用一個(gè)高極性和低級(jí)性溶劑組成的混合溶劑，高極性的溶劑還有增加區(qū)分度的作用，常用的溶劑組合有：Petroleum ether/Ethyl acetate, Petroleum ether/Acetone, Petroleum ether/Ether, Petroleum ether/CH2Cl2, CH2Cl2/ethyl acetate, ethyl acetate/ MeOH

25、, CHCl3/ ethyl acetate     展開(kāi)劑的比例要靠嘗試.一般根據(jù)文獻(xiàn)中報(bào)道的該類化合物用什么樣的展開(kāi)劑，就首先嘗試使用該類展開(kāi)劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個(gè)分離效果好的展開(kāi)劑。很多時(shí)候,展開(kāi)劑的選擇要靠自己不斷變換展開(kāi)劑的組成來(lái)達(dá)到最佳效果。我在實(shí)驗(yàn)中，為了實(shí)現(xiàn)一個(gè)配體與其他雜質(zhì)有效分離，曾經(jīng)嘗試了所有的溶劑用來(lái)兩兩組合后，最后才找到petroleum ether/THF這類不常見(jiàn)的混合溶劑。     一般把兩種溶劑混合時(shí),采用高極

26、性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑,如果有分開(kāi)的跡象,再調(diào)整比例,達(dá)到最佳效果，如果沒(méi)有分開(kāi)的跡象，最好是換溶劑。     對(duì)于在硅膠中這種酸性物質(zhì)上易分解的物質(zhì)，在展開(kāi)劑里往往加一點(diǎn)點(diǎn)三乙胺，氨水，吡啶等堿性物質(zhì)來(lái)中和硅膠的酸性。當(dāng)然，選擇所添加的堿性物質(zhì)，還必須考慮容易從產(chǎn)品中除去，氨水無(wú)疑是較好的選擇。     這里要特別強(qiáng)調(diào)的一點(diǎn)是：分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質(zhì)量很有關(guān)系。不同廠家生產(chǎn)的硅膠可能含水量以及顆粒的粗細(xì)程度，酸性強(qiáng)弱不同，從而導(dǎo)致產(chǎn)品在某個(gè)廠家的硅膠中分離效果很好，但

27、在另一個(gè)廠家的就不行。溶劑的含水量和雜質(zhì)含量對(duì)分離效果都有明顯的影響。溫度對(duì)分離效果影響也很明顯。我們實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有空調(diào)，我在實(shí)驗(yàn)過(guò)程發(fā)現(xiàn)，在夏天分離相同的產(chǎn)品，所需的淋洗劑極性要比在冬天小很多，這一點(diǎn)大家也是可以理解的。鑒于此，使用的硅膠，不用時(shí)一定要密封，防止吸潮。TLC所用的硅膠板一定要保存在干燥器里面，或使用前在紅外烘箱里干燥一段時(shí)間。     在利用TLC跟蹤反應(yīng)時(shí)，在點(diǎn)板的時(shí)候往往是反應(yīng)體系的混和溶液點(diǎn)一個(gè)點(diǎn)A，每種難揮發(fā)的原料各點(diǎn)一個(gè)點(diǎn)B,C, D等等，然后所有的原料和反應(yīng)體系的混合溶劑再共同點(diǎn)一個(gè)混合點(diǎn)X，這些點(diǎn)在板上的位

28、置如圖所示：    A X B C D    這樣的好處是展開(kāi)后可以清楚地看見(jiàn)每個(gè)點(diǎn)的位置，把A這個(gè)點(diǎn)展開(kāi)后的各個(gè)層份的點(diǎn)與B,C,等原料比較，從而判斷原料消失沒(méi)有，點(diǎn)混合點(diǎn)X的目的在于，方便觀察，因?yàn)橛袝r(shí)候，板展開(kāi)后，各點(diǎn)的位置有些變形，或者由于邊緣效應(yīng)等等，使得判斷不易。    利用TLC判斷物質(zhì)的純度時(shí)，往往要和NMR相結(jié)合，因?yàn)槟撤N樣品在這種展開(kāi)劑中只顯示一個(gè)點(diǎn)，并不等于在別的展開(kāi)劑中也只顯示一個(gè)點(diǎn)。但有趣的是，由于H 

29、;NMR可鑒別的純度也就在95%左右，有時(shí)候H NMR現(xiàn)示較純的東西，一點(diǎn)板就會(huì)發(fā)現(xiàn)有幾個(gè)點(diǎn)。所以，兩者要結(jié)合使用。但是自己以前的樣品，則可以只通過(guò)點(diǎn)板來(lái)判斷純度。補(bǔ)充一下層析柱硅膠的用量一般是每分離1g產(chǎn)品使用30-100g硅膠柱子的形狀比例一般是內(nèi)徑:高度=1:810展開(kāi)劑盡量使用能夠分開(kāi)的極性最低的溶劑還有，濕法裝柱子的時(shí)候本人認(rèn)為最好是先在底部裝有石英砂的柱子中預(yù)加溶劑再按濕法加料這樣能保證一開(kāi)始加入的填料處于全濕狀態(tài),杜絕氣泡剛裝的柱子在一段時(shí)間內(nèi)可能會(huì)有長(zhǎng)度變短的現(xiàn)象所以可以給它一個(gè)穩(wěn)定時(shí)間后再投入使用在作中藥材薄層層析時(shí)，很多藥材因?yàn)楹恤然蛘甙被鶗?huì)造成跑板拖尾現(xiàn)象或

30、者重疊，這將難以和標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)。建議大家漢羧基的藥可在展開(kāi)劑里面加少量羧酸，含氨基的藥可以在展開(kāi)劑里面加少量三乙胺。中藥做薄層鑒別時(shí)，需要檢測(cè)的主要成分，其性質(zhì)應(yīng)該與提取方法、展開(kāi)劑極性、顯色條件相適應(yīng)。比如生物堿類成分，多顯堿性，因此提取方法多為堿性氯仿回流，展開(kāi)劑中肯定有濃氨或二乙胺，顯色用碘化鉍鉀試液。再如黃酮類，不論是黃酮苷還是苷元，分子結(jié)構(gòu)中都有酚羥基而顯酸性，所以提取方法多為用乙酸乙酯在酸水中萃取，展開(kāi)劑多用甲苯-乙酸乙酯-甲酸 系列，顯色劑5%三氯化鋁乙醇溶液或1%三氯化鐵乙醇溶液。另外，做薄層時(shí)，建議用甲醇處理一份供試品溶液備用，他的內(nèi)容囊括了你需要檢驗(yàn)的所有成分，如果

31、某個(gè)薄層你做不出來(lái)，就可以用這份供試品溶液復(fù)核，如果有斑點(diǎn)，改進(jìn)一下你的制備方法就可以了；如果還沒(méi)有，就考慮是你樣品的問(wèn)題了。作中藥檳榔的薄層鑒別時(shí),用濃氨試液調(diào)PH一定要準(zhǔn)確,否則無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn).薄層色譜小知識(shí)1、怎樣提高點(diǎn)樣效率？   點(diǎn)樣是造成TLC定量誤差的主要來(lái)源。  實(shí)驗(yàn)證明：定量毛細(xì)管更適合較小體積的點(diǎn)樣；微量注射器更適合較大體積的點(diǎn)樣。這主要是因?yàn)槲⒘孔⑸淦魇苄馀?、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細(xì)管理體制的占樣誤差，建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細(xì)管。但應(yīng)注意更換樣品時(shí)，應(yīng)將毛細(xì)管用超聲波或不同極性溶課劑清洗干凈。在

32、制備樣品時(shí)，溶樣溶劑黏度不能過(guò)高，以便于點(diǎn)樣；溶劑沸點(diǎn)過(guò)低則進(jìn)樣體積易變，過(guò)高則會(huì)改變展開(kāi)劑組成；對(duì)樣品溶解度過(guò)高會(huì)使樣點(diǎn)發(fā)生空心現(xiàn)象，常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典TLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑3mm點(diǎn)間距離1-2cm底邊距離1.5cm;HPLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑1mm點(diǎn)間距5mm底邊距1cm. 2、展開(kāi)劑的選擇   TLC與HPLC相比，一個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)就是流動(dòng)相的選擇具有更大的靈活性，流動(dòng)相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.10.7之間并達(dá)到較好的分離，與此對(duì)應(yīng)的是流動(dòng)相要有適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度和組成。流動(dòng)相強(qiáng)度越大，溶質(zhì)Rf值越大，但很可能降低分離能

33、力；另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物、根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。一般展開(kāi)劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個(gè)二元溶劑體系，通過(guò)調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合Rf值，適合的Rf值找到后，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個(gè)，以這三個(gè)組成為三點(diǎn)組成一個(gè)三角形，則可看到：三角形頂點(diǎn)是二元體系，邊是三元體系，三角形內(nèi)是四元體系，并且極性一致，可根據(jù)幾何原理得出任一點(diǎn)組成，這種方法較為直觀，也較簡(jiǎn)單。   3、TLC的通用顯色方法  理想的顯色希望靈敏度高，斑點(diǎn)顏色穩(wěn)定、斑點(diǎn)與背景間的對(duì)比度好，斑點(diǎn)的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成

34、正比，在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要，通用顯色方法主要有：  1、紫外照射法：方便、不破壞樣品；  2、碘蒸氣法：通用性強(qiáng)，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用；  3、熒光試劑：制造熒光背景，使原來(lái)紫外下無(wú)熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯；  4、硫酸溶劑：對(duì)絕大多數(shù)有機(jī)物有效，但有破壞性。 選擇適當(dāng)?shù)恼归_(kāi)劑是首要任務(wù).一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油迷&lt;己烷&lt;苯&lt;乙醚&lt;THF&lt;乙酸乙酯&a

35、mp;lt;丙酮&lt;乙醇&lt;甲醇使用單一溶劑，往往不能達(dá)到很好的分離效果，往往使用混合溶劑通常使用一個(gè)高極性和低級(jí)性溶劑組成的混合溶劑，高極性的溶劑還有增加區(qū)分度的作用，常用的溶劑組合有：    Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether,     Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展開(kāi)劑的

36、比例要靠嘗試.一般根據(jù)文獻(xiàn)中報(bào)道的該類化合物用什么樣的展開(kāi)劑，就首先嘗試使用該類展開(kāi)劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個(gè)分離效果好的展開(kāi)劑。展開(kāi)劑的選擇條件：對(duì)的所需成分有良好的溶解性；可使成分間分開(kāi)；待測(cè)組分的Rf在0.20.8之間，定量測(cè)定在0.30.5之間；不與待測(cè)組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；沸點(diǎn)適中，黏度較小；展開(kāi)后組分斑點(diǎn)圓且集中；混合溶劑最好用新鮮配制。    一般來(lái)說(shuō)，弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成，再根據(jù)需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯來(lái)調(diào)節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性，以達(dá)到好的分離效果，適合于生物堿、黃酮、萜類等的分離；中等極性的溶劑體系由氯仿和

37、水基本兩相組成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來(lái)調(diào)節(jié)，適合于蒽醌、香豆素，以及一些極性較大的木脂素和萜類的分離；強(qiáng)極性溶劑，由正丁醇和水組成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來(lái)調(diào)節(jié)，適合于極性很大的生物堿類化合物的分離。很多時(shí)候,展開(kāi)劑的選擇要靠自己不斷變換展開(kāi)劑的組成來(lái)達(dá)到最佳效果。    我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中，為了實(shí)現(xiàn)一個(gè)配體與其他雜質(zhì)有效分離，曾經(jīng)嘗試了很多種的溶劑組合，最后才找到石油醚EtOAcHCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶劑。一般把兩種溶劑混合時(shí),采用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑,如果有分開(kāi)的跡象,再調(diào)整比例（或者加入第三種溶劑）,達(dá)到最佳

38、效果；如果沒(méi)有分開(kāi)的跡象（斑點(diǎn)較“拖”），最好是換溶劑。對(duì)于在硅膠中這種酸性物質(zhì)上易分解的物質(zhì)，在展開(kāi)劑里往往加一點(diǎn)點(diǎn)三乙胺，氨水，吡啶等堿性物質(zhì)來(lái)中和硅膠的酸性。（選擇所添加的堿性物質(zhì)，還必須考慮容易從產(chǎn)品中除去，氨水無(wú)疑是較好的選擇。）分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質(zhì)量很有關(guān)系：不同廠家生產(chǎn)的硅膠可能含水量以及顆粒的粗細(xì)程度，酸性強(qiáng)弱不同，從而導(dǎo)致產(chǎn)品在某個(gè)廠家的硅膠中分離效果很好，但在另一個(gè)廠家的就不行。溶劑的含水量和雜質(zhì)含量對(duì)分離效果都有明顯的影響。溫度，濕度對(duì)分離效果影響也很明顯，在實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)有時(shí)同一展開(kāi)條件，上下午的Rf截然不同展開(kāi)劑的選擇主要根據(jù)樣品的極性、溶解度和吸附劑的

39、活性等因素來(lái)考慮在進(jìn)行薄層層析時(shí)，首先應(yīng)該知道未知化學(xué)成分的類型，其極性的大致歸屬，從提取液或從色譜柱的流動(dòng)相極性可知，另外某樣品里含多種化學(xué)成分先按極性不同大致分，然后細(xì)分，對(duì)于分離未知的化學(xué)物質(zhì)，展開(kāi)劑的選擇也是一個(gè)摸索的過(guò)程，不應(yīng)該僅僅從展開(kāi)劑考慮，多因素綜合衡量！    溶劑：層析過(guò)程中溶劑的選擇，對(duì)組分分離關(guān)系極大。在柱層析時(shí)所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習(xí)慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時(shí)常稱展開(kāi)劑。洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì)這兩者結(jié)合起來(lái)加以考慮在用極性吸附劑進(jìn)行層析時(shí)，當(dāng)被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，一般選用弱極性溶劑為洗

40、脫劑；被分離物質(zhì)為強(qiáng)極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對(duì)某一極性物質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），則洗脫劑的極性亦須相應(yīng)降低。 在柱層操作時(shí)，被分離樣品在加樣時(shí)可采用于法，亦可選一適宜的溶劑將樣品溶解后加入。溶解樣品的溶劑應(yīng)選擇極性較小的，以便被分離的成分可以被吸附。然后漸增大溶劑的極性。這種極性的增大是一個(gè)十分緩慢的過(guò)程，稱為“梯度洗脫”，使吸附在層析柱上的各個(gè)成分逐個(gè)被洗脫。如果極性增大過(guò)訣（梯度太大），就不能獲得滿意的分離。溶劑的洗脫能力，有時(shí)可以用溶劑的介電常數(shù)（）來(lái)表示。介電常數(shù)高，洗脫能力就大。以上的洗脫順序僅適用于極性吸附劑，如硅膠、氧化鋁。

41、對(duì)非極性吸附劑，如活性炭，則正好與上述順序相反，在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用，較在脂溶性溶劑中為強(qiáng)。3被分離物質(zhì)的性質(zhì)：被分離的物質(zhì)與吸附劑，洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析中的三個(gè)要素，彼此緊密相連。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下，各個(gè)成分的分離情況，直接與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)。對(duì)極性吸附劑而言，成分的極性大，吸附住強(qiáng)。     當(dāng)然，中草藥成分的整體分子觀是重要的，例如極性基團(tuán)的數(shù)目愈多，被吸附的住能就會(huì)更大些，在同系物中碳原子數(shù)目少些，被吸附也會(huì)強(qiáng)些?？傊?，只要兩個(gè)成分在結(jié)構(gòu)上存在差別，就有可能分離，關(guān)鍵在于條件的選擇。要根據(jù)被分離物質(zhì)

42、的性質(zhì)，吸附劑的吸附強(qiáng)度，與溶劑的性質(zhì)這三者的相互關(guān)系來(lái)考慮。首先要考慮被分離物質(zhì)的極性。如被分離物質(zhì)極性很小為不含氧的萜烯，或雖含氧但非極性基團(tuán)，則需選用吸附性較強(qiáng)的吸附劑，并用弱極性溶劑如石油醚或苯進(jìn)行洗脫。但多數(shù)中藥成分的極性較大，則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑（一般級(jí)）。采用的洗脫劑極性應(yīng)由小到大按某一梯度遞增，或可應(yīng)用薄層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統(tǒng)中的分離情況。此外，能否獲得滿意的分離，還與選擇的溶劑梯度有很大關(guān)系?，F(xiàn)以實(shí)例說(shuō)明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關(guān)系。如有多組分的混合物，象植物油脂系由烷烴、烯烴、舀醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份。當(dāng)以硅膠為吸附劑時(shí)，使油

43、脂被吸附后選用一系列混合溶劑進(jìn)行洗脫，油脂中各單一成分即可按其極性大小的不同依次被洗脫。     又如對(duì)于C-27甾體皂甙元類成分，能因其分字中羥基數(shù)目的多少而獲得分離：將混合皂甙元溶于含有5氯仿的苯中，加于氧化鋁的吸附柱上，采用以下的溶劑進(jìn)行梯度洗脫。如改用吸附性較弱的硅酸鎂以替代氧化鋁，由于硅酸鎂的吸附性較弱，洗脫劑的極牲需相應(yīng)降低，亦即采用苯或含5氯仿的苯，即可將一元羥基皂甙元從吸附劑上洗脫下來(lái)。這一例子說(shuō)明，同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中層析時(shí)，需用不同的溶劑才能達(dá)到相同的分離效果，從而說(shuō)明吸附劑、溶劑和欲分離成分三者的相互關(guān)系。（二

44、）簿層層析：薄層層析是一種簡(jiǎn)便、快速、微量的層析方法。一般將柱層析用的吸附劑撒布到平面如玻璃片上，形成一薄層進(jìn)行層析時(shí)一即稱薄層層析。其原理與柱層析基本相似。    1薄層層析的特點(diǎn)：薄層層析在應(yīng)用與操作方面的特點(diǎn)與柱層析的比較。2吸附劑的選擇：薄層層析用的吸附劑與其選擇原則和柱層析相同。主要區(qū)別在于薄層層析要求吸附劑（支持劑）的粒度更細(xì)，一般應(yīng)小于250目，并要求粒度均勻。用于薄層層析的吸附劑或預(yù)制薄層一般活度不宜過(guò)高，以級(jí)為宜。而展開(kāi)距離則隨薄層的粒度粗細(xì)而定，薄層粒度越細(xì)，展開(kāi)距離相應(yīng)縮短，一般不超過(guò)10厘米，否則可引起色譜擴(kuò)散影響分離效果。3展開(kāi)

45、劑的選擇：薄層層析，當(dāng)吸附劑活度為一定值時(shí)（如或級(jí)），對(duì)多組分的樣品能否獲得滿意的分離，決定于展開(kāi)劑的選擇。中草藥化學(xué)成分在脂溶性成分中，大致可按其極性不同而分為無(wú)極性、弱極性、中極性與強(qiáng)極性。但在實(shí)際工作中，  顯色劑：    碘：    適用于不飽和或者芳香族化合物    配制方法：在100ml 廣口瓶中，放入一張濾紙，少許碘粒。    或者在瓶中，加入10g 碘粒，30g 硅膠&#

46、160;   高錳酸鉀    適用于含還原性基團(tuán)化合物，比如羥基，氨基，醛    配制方法：1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH +    200mL 水. 使用期3 個(gè)月    磷鉬酸(PMA)    廣譜    配制方法：10 g of 磷鉬酸+100 mL 乙醇    紫外燈    適用于含共軛基團(tuán)的化合物，芳香化合物    硫酸鈰：