腦脊液常規(guī)操作規(guī)范流程

1、 1 檢驗(yàn)?zāi)康?指導(dǎo)腦脊液（CSF)常規(guī)測(cè)定。2 方法原理2.1腦脊液是存在于腦室及蛛網(wǎng)膜下腔中的無(wú)色透明液體。由于脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞對(duì)血漿 中各種物質(zhì)的選擇性分泌和超濾作用，血漿中各種成分對(duì)血腦屏障的通透性各有不 同。其中最易通過(guò)血腦屏障的是氯、鈉、鎂離子及乙醇;其次為清蛋白、葡萄糖、鈣 離子、乳酸、氨基酸、尿素和肌酐;纖維蛋白原、補(bǔ)體、抗體、某些藥物、膽紅素、 膽固醇則極難或不能通過(guò)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)任何部位發(fā)生器質(zhì)性病變時(shí)，如感染、炎 癥、腫瘤、外傷、水腫和阻塞等都可以引起腦脊液成分的改變。通過(guò)對(duì)腦脊液理學(xué) 檢查，顯微鏡檢查、化學(xué)和免疫學(xué)檢查及腦脊液病原學(xué)檢查，可對(duì)疾病的診斷、治 療和預(yù)后判斷提

2、供依據(jù)。 2.2腦脊液（CSF）常規(guī)測(cè)定內(nèi)容包括:顏色、性狀、有核細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、潘 氏試驗(yàn)、細(xì)菌等。 2.3潘氏（pandys)試驗(yàn)：CSF中的球蛋白與苯酚結(jié)合，形成不溶性的蛋白鹽而產(chǎn)生白 色混濁或沉淀。 1顏色（COLOR) 6中性粒細(xì)胞（NE) 2透明度（clearity) 7淋巴細(xì)胞（LY） 3凝固性（coagulability） 8單核細(xì)胞（MO） 4腦脊液有核細(xì)胞計(jì)數(shù)（CSFNUCL) 9潘氏試驗(yàn)（pandys test） 5腦脊液紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（CSFRBC)3 方法性能參數(shù)（如線性、檢出限、測(cè)量區(qū)間、不確定度、準(zhǔn)確性、精密度、靈敏度和特 4.標(biāo)本類(lèi)型4.1標(biāo)本類(lèi)型：新鮮CSF

3、。4.2標(biāo)本拒收條件：拒收延遲室溫2h、冷藏6h未送達(dá)標(biāo)本。4.3標(biāo)本保存與穩(wěn)定性：一般室溫1h內(nèi)完成檢驗(yàn)，久置可致細(xì)胞破壞，影響細(xì)胞計(jì)數(shù) 及分類(lèi)檢查。5.要求的容器、防腐劑或添加物、儀器、試劑或分析系統(tǒng) 5.1標(biāo)本容器：BD無(wú)促凝成分紅頭管或潔凈干燥帶蓋玻璃管。5.2試劑 5.2.1試劑組分：生理鹽水0.9%Nacl溶液白細(xì)胞稀釋液1%冰乙酸（1ml分析純冰醋酸+蒸餾水至100ml)劉氏快速瑞氏染色液 A液：曙紅、甲醇 B液：亞甲藍(lán)潘氏試劑10%苯酚溶液（純苯酚10ml+蒸餾水至100ml） 5.2.2 試劑存儲(chǔ)和有效期：試劑名稱(chēng)存儲(chǔ)條件有效期開(kāi)瓶有效期位置生理鹽水室溫1年1年存貨柜/血常規(guī)

4、室操作臺(tái)冰乙酸室溫2年1年藥品柜1%乙酸冷藏1年1年試劑冰箱10%苯酚溶液室溫1年1年藥品柜劉氏快速瑞氏染色液室溫2年6個(gè)月藥品柜/染色操作臺(tái)5.3儀器：OLYMPUS光學(xué)顯微鏡，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板。 6. 校準(zhǔn)程序 （計(jì)量學(xué)溯源性）不適用7. 質(zhì)量控制，控制品使用水平和頻率，允許限的糾正措施不適用8. 程序步驟 8.1一般性狀檢查：輕輕混勻CSF，觀察量、顏色、有無(wú)凝塊和透明度（一般細(xì)胞數(shù)300 /l個(gè)時(shí)或蛋白增加可產(chǎn)生混濁），并記錄。 8.2顯微鏡檢查 8.2.1細(xì)胞計(jì)數(shù)（無(wú)凝塊標(biāo)本） （1）清或微混標(biāo)本：a) 混勻后直接沖入計(jì)數(shù)池，計(jì)數(shù)四角四大方格內(nèi)細(xì)胞總 數(shù)（包括RBC，NUCL）。 b)

5、用白細(xì)胞稀釋液作1：1稀釋?zhuān)?jì)數(shù)有核細(xì)胞數(shù) c) 紅細(xì)胞數(shù)細(xì)胞總數(shù)有核細(xì)胞數(shù) （當(dāng)白細(xì)胞數(shù)30個(gè)/l時(shí)，在白細(xì)胞計(jì)數(shù)池中直接分類(lèi)至少50個(gè)白細(xì)胞） （2）混濁及以上標(biāo)本：外觀稀釋樣本量稀釋液/溶解劑粉色/輕度混濁1:2020l380l紅色/混濁1:5010l490l帶血量極高/極度混濁1:10010l990l a)稀釋標(biāo)本：于清潔試管中按上表進(jìn)行稀釋?zhuān)靡杂?jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)； b)溶解RBC：于清潔試管中按上表進(jìn)行稀釋?zhuān)靡杂?jì)數(shù)有核細(xì)胞數(shù)； c)沖池；計(jì)數(shù) d)紅細(xì)胞數(shù)=細(xì)胞總數(shù)有核細(xì)胞數(shù) 8.2.2 有凝塊或粘稠標(biāo)本： （1）用吸管旋轉(zhuǎn)并擠壓凝塊，擠出里面的液體及細(xì)胞。 （2）2000rpm

6、15;5min離心，分離上清液和沉渣。 （3）混勻沉渣，涂片，用高倍鏡觀察NUCL、RBC。 （4）報(bào)告每高倍鏡視野的紅細(xì)胞和有核細(xì)胞數(shù)。 8.2.3離心獲取沉渣和上清液：將完成計(jì)數(shù)的CSF離心，2000rpm×5min離心,吸出上 清液于另一試管，并在試管上編號(hào)。 8.2.4瑞氏染色：當(dāng)NUCL>106/l時(shí)進(jìn)行操作。將沉渣混勻涂片，厚薄根據(jù)有核細(xì) 胞數(shù)而定，血性標(biāo)本可考慮推片。待干后，瑞氏染色進(jìn)行分類(lèi)（分 100個(gè)NUCL）；如見(jiàn)有不能分類(lèi)細(xì)胞或懷疑有惡性細(xì)胞時(shí)，應(yīng)請(qǐng)示 上級(jí)主管，由有經(jīng)驗(yàn)的上級(jí)主管進(jìn)行分析，并在報(bào)告時(shí)另行描述報(bào) 告，如腦膜白血病或腫瘤細(xì)胞等。 8.3潘氏試

7、驗(yàn) 8.3.1試驗(yàn)操作：取小試管一支，加入10%的石碳酸水溶液約5ml，用一次性吸管 加一滴CSF上清液立即在黑色背景燈照下觀察結(jié)果。 8.3.2結(jié)果判定：陰性：清晰透明。 弱陽(yáng)性（±）：微呈白霧狀，在黑色背景下才能看到。 陽(yáng)性（+）：灰白色云霧狀。 （2+）：白色渾濁。 （3+)：白色濃絮狀沉淀。 （4+）：白色凝塊。9. 計(jì)算結(jié)果原理 9.1顏色 9.1.1紅色：常見(jiàn)于穿刺損傷或出血性病變。 為區(qū)別蛛網(wǎng)膜下腔出血和穿刺損傷應(yīng)注意： (1)離心沉淀后：如上層液體呈黃色，隱血試驗(yàn)陽(yáng)性，多為蛛網(wǎng)膜下腔出 血，且出血時(shí)間已經(jīng)超過(guò)4小時(shí)。如上層液體澄清無(wú)色，紅細(xì)胞均沉 管底，多為穿刺出血或

8、因病變所致的新鮮出血。 （2）紅細(xì)胞皺縮，不僅見(jiàn)于陳舊性出血，在穿刺損傷引起出血時(shí)也可看 到，因腦脊液滲透壓較血漿高所致。 9.1.2黃色：可因陳舊性蛛網(wǎng)膜下腔或腦室出血、椎管梗阻、化膿性腦膜炎、結(jié)核性 腦膜炎、重癥如核黃疸等引起。 9.1.3白色或灰白色：多因白細(xì)胞增加所致，常見(jiàn)于化膿性腦膜炎。 9.1.4褐色或黑色：常見(jiàn)于腦膜黑色素瘤。 9.1.5綠色：可見(jiàn)于綠膿假單胞菌、肺炎鏈球菌、甲型鏈球菌引起的腦膜炎、高膽紅 素血癥和膿性腦脊液。 9.2透明度：腦脊液混濁程度與細(xì)胞數(shù)量有關(guān)，腦脊液中細(xì)胞數(shù)超過(guò)300×10/L時(shí)，可出現(xiàn) 混濁。蛋白質(zhì)含量增加或含大量微生物也可產(chǎn)生混濁。 9.

9、3凝固性：結(jié)核性腦膜炎靜置12-24小時(shí)后，標(biāo)本表面有纖細(xì)的網(wǎng)膜形成。蛛網(wǎng)膜下腔 梗阻時(shí)，可產(chǎn)生黃色膠凍狀。 9.4潘氏試驗(yàn)：有腦組織和腦脊髓膜疾患時(shí)常成陽(yáng)性反應(yīng)如化膿性腦脊髓膜炎、梅毒性中 樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、脊髓灰質(zhì)炎、流行性腦炎等。腦出血時(shí)多呈陽(yáng)性反應(yīng)， 如外傷性血液混入腦脊液中，亦呈陽(yáng)性反應(yīng)。 9.5細(xì)胞分類(lèi)： 9.5.1中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變的CSF，細(xì)胞可增多，其增多的程度及細(xì)胞的種類(lèi)與病變的 性質(zhì)有關(guān)。 9.5.2中樞神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染、結(jié)核性或霉菌性腦脊髓膜炎時(shí)，細(xì)胞數(shù)可中度增加， 常以淋巴細(xì)胞為主。 9.5.3細(xì)菌感染時(shí)（化膿性腦脊髓膜炎），細(xì)胞數(shù)顯著增加，以中性粒細(xì)胞為主。 9.5.4

10、寄生蟲(chóng)病時(shí)，可見(jiàn)較多的嗜酸性粒細(xì)胞。 9.5.4腦室或蛛網(wǎng)膜下腔出血時(shí)，腦脊液內(nèi)可見(jiàn)多數(shù)紅細(xì)胞。 10. 生物參考區(qū)間 顏色（COLOR)無(wú)色透明度（clearity)透明凝固性（coagulability）無(wú)凝塊潘氏試驗(yàn)（pandys test）陰性O(shè)R弱陽(yáng)性有核細(xì)胞計(jì)數(shù)（CSFNUCL)成人（0-8）×106/L中性粒細(xì)胞（NE)成人（0-6%）兒童（0-15）×106/L新生兒（0-8%）新生兒（0-30）×106/L淋巴細(xì)胞（LY）成人（40-80%）單核細(xì)胞（MO）成人（15-45%）新生兒（5-35%）新生兒（50-90%）紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（CSFRBC)0

11、×10/L （正常腦脊液中白細(xì)胞主要為淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞，之比約為7:3，可含極少中性粒細(xì) 胞）。11.警告值、危急值（適用時(shí)）12.檢驗(yàn)結(jié)果可報(bào)告區(qū)間13.對(duì)超出可報(bào)告范圍的結(jié)果的處理 13.1如檢到細(xì)菌時(shí)應(yīng)建議培養(yǎng)確認(rèn)。 13.2有不能分類(lèi)細(xì)胞，應(yīng)請(qǐng)示上級(jí)主管，并另行描述報(bào)告，如腦膜白血病或腫瘤細(xì)胞。14.實(shí)驗(yàn)室解釋 15.安全防護(hù)措施 15.1所有樣品按具有潛在傳染性的標(biāo)本處理。15.2測(cè)定完成后，上清液及沉渣試管于2000mg/L有效氯消毒液浸泡4小時(shí)以上，倒入 醫(yī)療廢物下水槽，由醫(yī)院統(tǒng)一消毒處理；塑料試管或容器等容器等醫(yī)療廢棄物倒入 黃色醫(yī)療垃圾袋，貼上標(biāo)簽并封口，由醫(yī)院統(tǒng)一銷(xiāo)毀處