旋覆花中鞣質(zhì)的含量測(cè)定

1、                   作者：萬(wàn)祺 龍凌云 裴月湖 單俊杰【摘要】  目的測(cè)定旋覆花水提物中鞣質(zhì)的含量。方法采用干酪素法和絡(luò)合滴定法進(jìn)行鞣質(zhì)含量測(cè)定。結(jié)果干酪素法測(cè)定旋覆花中鞣質(zhì)含量為5.96%，RSD1.68%（n=3）；絡(luò)合滴定法測(cè)得含量為8.32%，RSD2.09%（n=3）。結(jié)論 該兩種分析方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于旋覆花中鞣質(zhì)的含量測(cè)定。 【關(guān)鍵詞】  旋覆花 鞣質(zhì) 干酪素 絡(luò)

2、合滴定Abstract：ObjectiveTo determine the content of tannins in aqueous-extract in the flower of Inula japonica Thunb. Methods The casein method and complexometric titration were used to determine the content of tannins.Results The active tannin in the flower of Inula japonica was 5.96% by the casein me

3、thod, and RSD=1.68% (n=3)； the total tannin of the flower was 8.32% by complexometric titration, and RSD=2.09% (n=3). ConclusionThe two methods are simple and accurate,and can be used to determine the content of tannin in Inula japonica Thunb.Key words：Inula japonica Thunb.；  Tannin；  Case

4、in；  Complexometric titration    旋覆花為菊科植物旋覆花Inula japonica Thunb.或歐亞旋覆花Inula britannica L.的干燥頭狀花序，具有降氣、消痰、行水、止嘔等功效。中醫(yī)臨床多用于風(fēng)寒咳嗽、痰飲蓄結(jié)、胸膈痞滿、喘咳痰多、嘔吐噫氣、心下痞硬等癥狀1。旋覆花中主要有倍半萜內(nèi)酯、三萜、甾體、黃酮和揮發(fā)油等成分24，目前尚無(wú)旋覆花中鞣質(zhì)方面的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn)旋覆花（Inula japonica Thunb）水提物具有明顯降血糖和降血脂作用5，檢識(shí)反應(yīng)表明水提物中主要含有黃酮、蒽醌、糖類和鞣質(zhì)等

5、成分。其中用三氯化鐵反應(yīng)鑒定旋覆花中鞣質(zhì)，反應(yīng)呈暗綠色，表明含有鄰二酚羥基黃酮和兒茶素類縮合鞣質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)擬采用干酪素法和絡(luò)合滴定法測(cè)定其中鞣質(zhì)的含量。    鞣質(zhì)含量測(cè)定方法有多種，其中最常用的有皮粉法、高錳酸鉀法、干酪素法、絡(luò)合滴定法、比色法和分光光度法。本實(shí)驗(yàn)選擇干酪素法是基于干酪素能選擇性結(jié)合有生理活性的鞣質(zhì)，從而測(cè)定生理活性鞣質(zhì)的含量，而無(wú)活性的鞣酐等鞣質(zhì)不被測(cè)定6。絡(luò)合滴定法是利用鞣質(zhì)分子中多個(gè)鄰位酚羥基可作為多基配體與一個(gè)中心離子絡(luò)合，形成環(huán)狀螯合物，在不同pH值下發(fā)生沉淀反應(yīng)，通過(guò)用EDTA反滴定過(guò)量金屬離子來(lái)確定總鞣質(zhì)的含量。該法準(zhǔn)確度和精確度高7

6、。 因此擬采用該兩種方法對(duì)旋覆花中鞣質(zhì)進(jìn)行定量分析。1  器材1.1  藥材旋覆花（Inula japonica Thub.）購(gòu)于北京同仁堂藥材公司，產(chǎn)地河北省。1.2  試劑鞣酸（AR，北京化學(xué)試劑公司），干酪素（Sigma公司），基準(zhǔn)氧化鋅（北京益利精細(xì)化學(xué)有限公司）。鉻黑T（北京市旭東化工廠 ），EDTA-2Na（ 北京欣經(jīng)科生物技術(shù)有限公司），F(xiàn)olin試劑（鎢酸鈉 50 g，加入85磷酸40 ml和蒸餾水375 ml，混合，加熱回流3 h，冷后加水稀釋至500 ml，避光保存。），0.1 mol/L醋酸醋酸鈉緩沖液（pH =5.0），其他試劑均為分析純。

7、1.3  儀器紫外可見分光光度計(jì)（上海尤尼柯公司，型號(hào)2802PC），電子天平（十萬(wàn)分之一，賽多利斯，BP211D ） 。2  方法2.1  旋覆花水提物的制備旋覆花花序1 kg，加入95%乙醇8 L室溫浸泡48 h。過(guò)濾，殘?jiān)僦貜?fù)操作1次。醇提后的殘?jiān)鼡]干乙醇后，用10 L蒸餾水室溫浸泡24 h。過(guò)濾，殘?jiān)儆盟貜?fù)操作1次。合并水提液，50減壓濃縮，濃縮液冷凍干燥獲得水提物。2.2  干酪素法82.2.1  標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確稱取鞣酸（真空干燥至恒重）43.84 mg置于200 ml容量瓶中，加入30%甲醇水溶液定容，搖勻，得到溶液I。精

8、密吸取溶液I1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml分別置于 10 ml容量瓶中，分別用30%甲醇補(bǔ)齊至5 ml。然后再加入0.1 mol/L醋酸醋酸鈉緩沖液（pH=5.0）至刻度，搖勻。精密吸取5個(gè)不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液 1 ml分別置于10 ml容量瓶中，加入Folin試劑0.5 ml，再加入2%NaCO3溶液至刻度，混勻。顯色后于720 nm處測(cè)定吸光度，以蒸餾水作空白對(duì)照。計(jì)算回歸方程。2.2.2  樣品鞣質(zhì)的含量測(cè)定精確稱取樣品145.01 mg于50 ml容量瓶中，加蒸餾水溶解并定容。精密吸取樣品溶液2 ml于25 ml棕色容量瓶中，加入0.1 mol/L醋酸醋酸鈉緩沖液（

9、pH=5.0）10 ml，再加30%甲醇定容，得到溶液II。精密吸取II溶液10 ml置于已盛有干酪素500 mg的50 ml棕色容量瓶中，振蕩1 h，過(guò)濾，得溶液III。分別吸取II和III溶液1 ml，置于10 ml棕色容量瓶中，各加入Folin試劑0.5 ml，再加2%NaCO3溶液至刻度，搖勻。室溫放置12 min后，以蒸餾水作空白對(duì)照，在波長(zhǎng)720 nm處測(cè)定吸光度，為A1和A2。由兩吸光度之差（A）代入回歸方程，計(jì)算活性鞣質(zhì)的含量。2.3  絡(luò)合滴定法92.3.1  0.05 mol/L EDTA-2Na的標(biāo)定稱取18.6 g EDTA-2Na于1 000 ml

10、錐形瓶中，加蒸餾水1 000 ml溶解，搖勻，備用。 精密稱取干燥至恒重的基準(zhǔn)氧化鋅0.120 g，加入3 ml稀鹽酸使溶解，再加水25 ml，滴入1滴0.025%甲基紅乙醇溶液 ，再滴加氨試液至溶液顯微黃色。加水25 ml，氨氯化銨緩沖液（pH=10）10 ml，鉻黑T指示劑少許。用EDTA2Na滴定至溶液由紫色變?yōu)榧兯{(lán)色，并將滴定結(jié)果用空白校正。每毫升EDTA-2Na標(biāo)準(zhǔn)液相當(dāng)于4.069 mg氧化鋅。-     The paper shows that flavanones are abundant in longan nucleuses. It is si

11、gnificant to make full use of longan necleuses. It has a brilliant prospect in developing this natural resources. 【參考文獻(xiàn)】  1Cai Changhe, Tang Xiaolang,Zhang Aiyu, etc. longan fruit pulp nutritional therapy value and its development application prospectJ. Food Science, 2002, 23 (8): 328.2Xu

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