膠束電動毛細管色譜法測定半夏等藥材中苯甲酸的含量

1、膠束電動毛細管色譜法測定半夏等藥材中苯甲酸的含量作者：曹艷， 黃必勝， 王平 ， 陳科力【關鍵詞】 半夏；,掌葉半夏；,水半夏；,苯甲酸,；,膠束電動毛細管色譜法摘要：目的建立膠束電動毛細管電泳色譜法(MECC)測定半夏及其同科其它品種藥材中苯甲酸的含量的方法。方法用MECC法對樣品進行分析。毛細管柱內徑75 m，長62.5 cm；運行電壓25 kV，檢測波長200 nm，分離溫度35；沖液為30 mmolL1，SDS30 mmolL1硼酸15甲醇（pH值9.5）；壓力進樣，進樣時間3 s。結果苯甲酸在0.0442.2 mg/ml濃度范圍內具有良好的線形關系（ r0.9994）， 平均回收率為

2、96.7% (RSD=2.4%, n=6), 對半夏及其同科屬其它品種共14個樣品中的苯甲酸含量進行了測定。結論該方法快速、簡便、并且較為準確，可供評價半夏等品種質量時參考。關鍵詞：半夏； 掌葉半夏； 水半夏； 苯甲酸 ； 膠束電動毛細管色譜法Abstract：ObjectiveThe method of micellar electrokinetic capillary chromatography（MECC）was established to determine the contents of benzoic acid in Rhizoma Pinelliae and several R

3、hizomes from other Araceae species; MethodsThe samples from rhizomes of P. ternana and other species of Araceae were analyzed by MECC; The Capillary column was 62. 5 cm long and 75 m in internal diameter; The operation voltage 25 kV ; test wavelength 200 nm; column temperature 35 ; the mobile buffer

4、 was 30 mmolL1 SDS30mmolL1 boric acid 15% methyl alcohol (pH 9. 5); The sampling was conducted by pressure, the sampling time was 3 seconds. ResultsThe linear range of determination for benzoic acid was 0. 0442.2 mg/ml (r =0. 999 4). The average recovery rate was 96.7%(cv =2.4%,n =6). The contents o

5、f benzoic acid in the 14 samples from P. ternana and other species of Araceae were determined. ConclusionThe method is fast, simple, convenient, comparatively accurate, and can be used to refer when appraising quality of Rhizoma Pinelliae and several species.Key words：Pinellia ternana; Pinellia peda

6、tisecta; Typhonium flagelliforme; Benzoic acid; MECC半夏為天南星科植物半夏Pinellia. ternata (Thunb.) Breit.的塊莖，是常用中藥，具有燥濕化痰、降逆止嘔、消痞散結的功效1。半夏含有苷類、酚類、甾醇類、生物堿類以及有機酸如琥珀酸、苯甲酸等成分。半夏中的有機酸是活性部位之一，何凌云等2曾用薄層掃描法對半夏藥材中琥珀酸的含量進行了測定；我們也曾采用HPLC法對半夏中琥珀酸進行含量測定（中國醫(yī)院藥學雜志待發(fā)表）。毛細管電泳法是一種靈敏度較高的含量測定法，本文探索應用MECC法對半夏中所含另一種有機酸苯甲酸進行含量測定。天

7、南星科中有一些中藥材為半夏的易混品，如掌葉半夏、水半夏等與半夏的形態(tài)、結構、功效較為類似，均含有琥珀酸、苯甲酸等成分，因而也一并進行測定。苯甲酸的含量測定已有多種方法報道，如：薄層掃描法3、氣質聯(lián)用法4、HPLC法5等。本文建立了MECC法對半夏等中藥中苯甲酸進行含量測定的方法。現(xiàn)報道如下。1 儀器與材料1.1 高效毛細管電泳儀Beckman Coulter P/ACETM MDQ Capillary Electrophoresis System，配有二極管陳列檢測器。熔融石英毛細管（內徑75m，總長度62.5 cm，有效長度50 cm，河北永年光學纖維廠生產）；數據處理軟件系統(tǒng)：32kara

8、t 5.0。試劑：十二烷基硫酸鈉（SDS）分析純，硼酸分析純，甲醇色譜純，實驗用水為雙蒸水。1.2 對照品苯甲酸，分析純（標示純度為99.5），武漢有機化工廠，批號20040212。1.3 材料藥材樣品的來源見表1。藥材樣品來源和苯甲酸含量，藥材及其原植物標本均經作者鑒定。樣品于80烘箱中干燥1 h，粉碎后過40目篩，置干燥器中備用。2 方法與結果2.1 MECC分析條件毛細管柱為無涂層熔融石英毛細管，75m（ID）62.5 cm。背景沖液：30 mmolL1 SDS30 mmolL1 硼酸15甲醇，用濃氫氧化鈉調 pH值9.5。進樣方式：壓力進樣，進樣時間3 s。運行電壓25 kV，檢測波長

9、200 nm，分離溫度35。毛細管沖洗方法：新毛細管在使用前用1MNaOH沖洗30 min，然后依次用實驗用水和背景沖液沖洗10 min。每日開始工作前用0.5MNaOH沖洗毛細管柱5 min，然后分別用水和背景沖液沖洗10 min。每次分析間隔，用背景沖液沖洗5 min。在該色譜條件下, 苯甲酸對照品和半夏樣品的色譜圖見圖1圖2，半夏等樣品中其它組分不干擾苯甲酸的測定。2.2 標準曲線及線形范圍精密稱取苯甲酸對照品若干，用甲醇定容，分別配制成0.044，0.059，0.27，1.35，2.2 mg/ml共5個濃度梯度的標準溶液。用0.45 m微孔濾膜過濾并超聲脫氣后，各依次分別進樣3 s，進

10、行分析，以峰面積為縱坐標（Y）對濃度橫坐標（X）進行回歸積分處理。結果表明在0.0442.2 mg/ml濃度范圍內對照品峰面積與濃度呈良好的線形關系。Y=137 490+68 485X, r0.999 4。表1 藥材樣品來源和苯甲酸含量（略）圖1 苯甲酸對照品色譜圖（略）圖2 01號半夏樣品色譜圖（略）2.3 樣品供試液的制備精密稱取各樣品粉末約1 g，加入95乙醇20 ml，浸泡1 h，超聲30 min，抽濾，將濾液中乙醇揮干，甲醇定容至5 ml，作樣品液備用。2.4 精密度實驗取0.27 mg/ml的對照品溶液，連續(xù)進樣，峰面積分別為156 075，156 642，159 870，147

11、962，149 986。RSD=2.9。2.5 對照品重現(xiàn)性實驗取0.27 mg/ml的對照品溶液，于0，2，4，6，8 h進樣，峰面積分別為156 075，149 986，154 232，148 996，160 123。RSD=3.0，表明該對照品在8 h內穩(wěn)定性良好。2.6 樣品重現(xiàn)性實驗取1號樣品液，于0，2，4，6，8 h進樣，峰面積分別為196 018，191 350，199 885，189 876，193 268。RSD=2.0，表明樣品液在8 h內穩(wěn)定性良好。2.7 回收率實驗精密稱取6份樣品（8號樣），分別準確加入一定量的苯甲酸對照品溶液，按照2.3項下方法制備供試品溶液，測定

12、并計算回收率。結果加樣提取回收率分別為94%，98%，94.6%，95.6%，101.0%，97.2%，平均回收率為96.7%，RSD=2.4%。2.8 樣品測定結果 先后測定了各種樣品中苯甲酸的含量，結果見表1。測定結果表明野生半夏藥材的苯甲酸含量一般較高。3 討論3.1 由于苯甲酸微溶于水，因此使用毛細管區(qū)帶電泳方式（CZE），難以使其分離，需采用膠束增溶，即采用毛細管膠束電動色譜法（MECC），讓溶質在水相和膠束相間分配系數不同而得到分離。3.2 分析條件的選擇 進樣時間的選擇尤為重要，應參考樣品供試液與背景電解質的電導率匹配情況，如果兩者不匹配會導致峰形畸變。通過嘗試不同的電壓、pH值、溫度等相關因素，最終確定了MECC分析條件：電壓25Kv、溫度35、pH值9.5，進樣時間3 s，且樣品分離較好。參考文獻：1 國家藥典委員會.中國藥典S.北京：化學工業(yè)出版社，2005：78.2 何凌云，吳 皓，沈 紅，等.薄層掃描法測定不同產