悅肝膠囊對酒精中毒小鼠肝臟保護(hù)作用的組化和生化研究

1、悅肝膠囊對酒精中毒小鼠肝臟保護(hù)作用的組化和生化研究 08-06-07 15:15:00 編輯：studa20 作者：樸麗花， 金政， 蔡英蘭， 李善花 【關(guān)鍵詞】 悅肝膠囊；,酒精性肝損傷；,組織化學(xué)；,生物化學(xué)摘要：目的：研究悅肝膠囊對酒精性肝損傷小鼠肝臟的保護(hù)作用。方法：KM種小鼠隨機(jī)分正常組、模型組(56度二鍋頭白酒14 mlkg-1d-1)、東寶肝泰組(0.8 gkg-1d-1，56度二鍋頭白酒14 mlkg-1d-1)、悅肝膠囊大劑量組(10 gkg-1d-1，56度二鍋頭白酒14 mlkg-1d-1)、悅肝膠囊中劑量組(5 gkg-1d-1，56度二鍋頭白酒14 m1kg-1d-1

2、)、悅肝膠囊小劑量組(2.5 gkg-1d-1，56度二鍋頭白酒14 mlkg-1d-1)、連續(xù)灌胃6周,眼球采血，進(jìn)行生化測定丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)；取出肝左葉按組織化學(xué)方法觀察琥珀酸脫氫酶(SDH)、酸性磷酸酶(ACP)活性，油紅O法顯示中性脂肪。結(jié)果：悅肝膠囊可明顯抑制ALT活性巴(P0.05)，降低TG、MDA含量(P0.05)，提高SOD活性(P0.05)；組織化學(xué)觀察表明，損傷組SDH活性下降，ACP活性增高，脂滴增多。悅肝膠囊可減輕上述肝損傷程度。結(jié)論：悅肝膠囊對酒精中毒小鼠肝臟損傷有一定的防治作用。關(guān)鍵詞：悅肝膠囊；

3、 酒精性肝損傷； 組織化學(xué)； 生物化學(xué)據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道1,酒精性肝病的發(fā)病率與酒精消耗平行,飲酒量越大其發(fā)病率越高，酒精中毒對肝臟的損害較其它組織、器官更嚴(yán)重，悅肝膠囊主要由葛根、丹參、西洋參、麥冬等中藥組成。臨床資料表明此方具有改善肝炎患者癥狀、恢復(fù)肝功能、調(diào)節(jié)免疫功能的作用。為探討悅肝膠囊的作用機(jī)理本實(shí)驗(yàn)觀察了悅肝膠囊對酒精所致的肝損傷小鼠血清氧自由基相關(guān)指標(biāo)及其對肝細(xì)胞酶活性變化的影響。1 材料和方法1.1 實(shí)驗(yàn)動物KM種雄性小鼠，體重為（202）g，延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物科提供，于室溫1820 普通飼料喂養(yǎng)，自由攝食、飲水。動物合格證：SCXK2002-2005。1.2 藥物與試劑悅肝膠囊由

4、延邊大學(xué)長白山天然藥物研究中心提供。制備方法：葛根30 g,丹參30 g,麥冬20 g,西洋參20 g,加蒸餾水煮1 h后過濾，濾出液備用，把原藥再煮1 h后過濾，把第1次濾出液和第2次濾出液混合，濃縮成100 ml即得。實(shí)驗(yàn)用酒為北京二鍋頭酒廠生產(chǎn)的56度二鍋頭白酒。東寶肝泰為中國通化東寶藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品。ALT，TG試劑盒為中生北控生物科技有限公司產(chǎn)品。SOD，MDA試劑盒為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。1.3 主要儀器日本OLYMPUS萬能顯微鏡，芬蘭MK-3酶標(biāo)儀，德國ZKl5超低溫高速離心機(jī)，北京天地百年科技有限公司TD一2000真彩色病理細(xì)胞顯微分析系統(tǒng)，美國Starlet221

5、恒冷箱切片機(jī)。1.4 方法將60只KM種小鼠隨機(jī)分為正常組、酒精損傷組、東寶肝泰組、悅肝膠囊大劑量組、悅肝膠囊中劑量組、悅肝膠囊小劑量組。藥物對照組給予0.8 g/kg體重東寶肝泰，藥物組分別給予10，5，2.5 g/kg 體重悅肝膠囊，正常組、模型組以等體積生理鹽水灌胃，30 min 后除正常組外其余組均給予56度二鍋頭白酒14 ml/kg體重灌胃。小鼠連續(xù)灌胃6周，于末次灌胃24h ，眼球采血，分離血清，用酶標(biāo)儀測SOD活性和MDA含量；快速斷頭處死小鼠，取出肝左葉進(jìn)行組織化學(xué)觀察。1.5 觀察指標(biāo)ALT活性采用賴氏法；TG含量按酶比色法；血清SOD活性按黃嘌呤氧化酶法；MDA含量按硫代巴

6、比妥酸法。肝組織冰凍切片，切片厚約8 m，進(jìn)行組織化學(xué)染色。亞鐵氰化鉀法顯示琥珀酸脫氫酶，Gomori法顯示酸性磷酸酶活性，油紅O法顯示中性脂肪，在萬能相差顯微鏡下觀察并拍片。1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)以s表示，應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。2 結(jié)果2.1 組織化學(xué)2.2 血清學(xué)改變見表12。表1 各組血清ALT，TG比較（略）與正常組比較，#P0.01，與損傷組比較*P0.01表2 各組血清SOD活性和MDA含量比較（略）與正常組比較，*P0.05，與模型組比較，#P0.053 討論酒精性肝病是由于長期大量飲酒所致的肝臟疾病?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為其可能的發(fā)病機(jī)制為機(jī)體的免疫反應(yīng)異常，自由

7、基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化，生物膜的損傷，肝細(xì)胞代謝紊亂等2。在本實(shí)驗(yàn)中觀察到酒精性肝損傷時(shí)肝血清內(nèi)ALT活性和TG含量有明顯變化，其酶活性和含量變化可反映酒精導(dǎo)致肝損傷的嚴(yán)重程度。酒精中毒引起的肝損傷與酒精的代謝產(chǎn)物乙醛的直接毒性有關(guān)34，乙醛可使肝細(xì)胞內(nèi)線粒體受損，而使肝細(xì)胞對脂肪的分解功能低下，此時(shí)機(jī)體可動員皮下脂肪組織的脂肪酸向肝內(nèi)轉(zhuǎn)移，致使血清TG含量增高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：模型組與正常組、東寶肝泰組、悅肝膠囊組相比較血清TG含量均有顯著差異，P0.01；組織化學(xué)染色顯示損傷組肝細(xì)胞內(nèi)可見較多的桔紅色脂滴沉著，其余各組均見少量脂滴。說明悅肝膠囊對肝臟脂質(zhì)代謝起到一定的調(diào)節(jié)作用，可能主要通過悅肝膠囊中的丹參促進(jìn)了脂肪在肝中的氧化作用，從而降低了肝脂的含量5。ALT主要分布于線粒體內(nèi)，且其活性是肝細(xì)胞損害的敏