紅細(xì)胞血型檢測(cè)（課堂PPT）

1、1臨床輸血與檢驗(yàn)臨床輸血與檢驗(yàn) 紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)2主要內(nèi)容 輸血前免疫學(xué)檢查輸血前免疫學(xué)檢查 鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù) 酶處理試驗(yàn)技術(shù)酶處理試驗(yàn)技術(shù) 抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù) 聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù) 微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)微柱凝集試驗(yàn)技術(shù) 吸收放散技術(shù)吸收放散技術(shù) 凝集試驗(yàn)技術(shù)凝集試驗(yàn)技術(shù) 紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)3第一節(jié)第一節(jié) 輸血前免疫學(xué)檢查輸血前免疫學(xué)檢查目的：使輸入的血液成分在受血者的體內(nèi)發(fā)揮其有效作用. 在正常情況下，輸入的紅細(xì)胞在受血者體內(nèi)不溶血，輸入的的血漿成分不破壞受血者的紅細(xì)胞。主要程序：受血者血液標(biāo)本的處理

2、、ABO血型和RhD血型鑒定、紅細(xì)胞同種抗體篩查和鑒定、交叉配血。4一、受血者標(biāo)本的處理一、受血者標(biāo)本的處理（一） 標(biāo)本的采集 輸血除了需要達(dá)到預(yù)期的治療效果外，必須確保輸血安全。血樣由臨床護(hù)士完成，應(yīng)嚴(yán)格遵守一次只能為一位受血者抽取標(biāo)本，標(biāo)本不得從輸液管或輸液側(cè)筋脈中抽取。（二）標(biāo)本的接收 輸血科技師接收血樣標(biāo)本時(shí)，應(yīng)認(rèn)真核對(duì)受血者的相關(guān)信息，盡可能了解受血者有無輸血史、藥物史、妊娠史等情況。如果有輸血史，這有必要進(jìn)一步了解最后一次輸血的日期，若3個(gè)月內(nèi)輸過血，那么供血者的紅細(xì)胞沒有完全代謝消失，可能依然存在于血液循環(huán)中，導(dǎo)致血型定型試驗(yàn)中出現(xiàn)混合凝集的結(jié)果。5（三）標(biāo)本的要求1. 對(duì)輸血前

3、檢查的血液標(biāo)本應(yīng)嚴(yán)格要求能代表受血者當(dāng)前的免疫學(xué)狀況，標(biāo)本還需經(jīng)鑒定和標(biāo)記，保證其準(zhǔn)確無誤地來自受血者和供血者，應(yīng)和血液申請(qǐng)單上的內(nèi)容一致。2. 防止受血者血液標(biāo)本稀釋和（或）溶血，若采集過程中發(fā)生溶血?jiǎng)t不能使用。3. 受血者配血試驗(yàn)的血液標(biāo)本必須是輸血前3天內(nèi)采集的。4. 若受血者使用右旋糖酐、PVP等治療，應(yīng)注意洗滌被檢紅細(xì)胞。5. 每次輸血后，受血者和供血者的標(biāo)本必須保存于28至少7天。6二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型 （一）、原理 根據(jù)紅細(xì)胞膜表面上有無A 抗原或B抗原，將血型分為 A型、B型、AB型、O型4種。A型人血清中含有抗-B抗體，B型人血

4、清中含有抗-A抗體，O型人血清中含有抗-A抗體和抗-B抗體，AB型人血清中不含ABO抗體。正定型：用抗-A及抗-B試劑與被檢紅細(xì)胞反應(yīng)，檢測(cè)紅細(xì)胞 表面是否存在A抗原或B抗原。反定型：用標(biāo)準(zhǔn)A細(xì)胞及B細(xì)胞與被檢血清反應(yīng)，檢測(cè)血清中是否存在抗體。由于ABO血型系統(tǒng)抗體多數(shù)為IgM類，在室溫鹽水介質(zhì)中就能出現(xiàn)明顯的凝集反應(yīng)。78 正反定型不符分析的基本程序： 1、重新采集標(biāo)本 2、查詢受血者既往病史、輸血史和用藥史等 3、新鮮生理鹽水多次洗滌標(biāo)本和試劑紅細(xì)胞 4、應(yīng)用抗-AB、抗-A1和抗-H檢測(cè)紅細(xì)胞 5、分析O型篩選細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果9 反定型的意義： 1、復(fù)檢正定型結(jié)果的準(zhǔn)確性 2、發(fā)現(xiàn)具有弱抗原

5、的亞型 3、糾正因紅細(xì)胞抗原減弱而造成的血型錯(cuò)誤 4、排除獲得性抗原和冷凝集現(xiàn)象的干擾 5、發(fā)現(xiàn)一些亞型中的不規(guī)則抗體10ABO定型 最適的反應(yīng)溫度為4，但在室溫反應(yīng)良好，所以常規(guī)的ABO定型試驗(yàn)僅在室溫進(jìn)行。1、定型方法：正、反定型的試管離心方法目前仍被認(rèn)為是最可信賴的ABO定型方法。1)定型試劑：有些ABO血型診斷試劑是以人的血清匯聚而制成的，但必須具備以下條件： 第一，高效價(jià)(1：128)的IgM抗A或抗B。 第二，具較好的親和性并不含冷凝集素。 第三，必需具有檢測(cè)A2，A2B血型的能力。 第四，血清必須通過HIV，HCV，HBV等檢查或經(jīng)病毒滅活。另外一些ABO定型試劑是由來自培養(yǎng)細(xì)胞

6、株的單克隆抗體所制成。112)ABO亞型的鑒定： ABO亞型的鑒定通常使用下列試劑：抗A、抗B、抗A1、抗H、抗AB、A1紅細(xì)胞、A2紅細(xì)胞、B型紅細(xì)胞和O型紅細(xì)胞。有些工作者在定型試驗(yàn)中，常規(guī)地選擇應(yīng)用抗AB抗血清，以避免錯(cuò)誤地把弱反應(yīng)性A或B型紅細(xì)胞分類為O型。一般抗AB試劑對(duì)Ax型紅細(xì)胞可增加凝集反應(yīng)的強(qiáng)度。12ABO定型試驗(yàn)中的常見問題：造成這種正反定型不一致的原因主要有：1)技術(shù)和管理錯(cuò)誤：這是ABO定型中產(chǎn)生異常結(jié)果的主要原因，包括：標(biāo)本或試劑搞錯(cuò)；器材不潔；試劑污染或失效；離心過度或不足；陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識(shí)別；漏加試劑；結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤；細(xì)胞與血清間比例不適當(dāng)。2)血清

7、異常：血清蛋白引起緡錢狀形成，影響反定型結(jié)果。3)紅細(xì)胞致敏：受免疫球蛋白致敏的紅細(xì)胞，在含高蛋白介質(zhì)的試劑中，可發(fā)生凝集。4)異常基因型：ABO亞型的檢查中，A、B抗原可能為弱抗原，難以檢出。135)近期輸血：試驗(yàn)前曾輸入過其它ABO血型不一致的血液，使血液標(biāo)本成為混合血型的紅細(xì)胞懸液，定型時(shí)顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。6)嵌合體血型：這種血型者體內(nèi)有兩類血型紅細(xì)胞群體，定型時(shí)可以出現(xiàn)“混合外觀凝集”現(xiàn)象。7)疾病因素導(dǎo)致抗原減弱：某些白血病患者和難治性貧血患者中，ABO血型系統(tǒng)的抗原性可受到抑制，檢出困難。8)紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象：紅細(xì)胞因遺傳或獲得性的表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。9)獲得性B：由

8、于革蘭陰性桿菌的作用，紅細(xì)胞可獲得“類B”的活性。1410)血型特異性物質(zhì)過高：一些卵巢囊腫病例，血型物質(zhì)的濃度很高，可中和抗A和抗B定型試劑，要得到正確的正定型結(jié)果，必須洗滌紅細(xì)胞多次。11)近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療：由于使用大量的非同型的血漿作置換治療，標(biāo)本血清中含有所輸供體提供的抗A或抗B抗體，造成反定型錯(cuò)誤。12)異常的血漿蛋白：受檢者血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例和高濃度的纖維蛋白原等導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象。13)不規(guī)則抗體的存在：受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外的不規(guī)則抗體，與試劑紅細(xì)胞上其他血型抗原系統(tǒng)的抗原起反應(yīng)。15 14)低丙種球蛋白血癥：低丙種球蛋白血癥(

9、丙種球蛋白量減低)病例，可能會(huì)因免疫球蛋白水平下降而使血清定型時(shí)不凝集或弱凝集反應(yīng)。 15)藥物等因素：藥物、右旋糖醉及靜脈注射某些造影劑可引起紅細(xì)胞凝集或類似凝集。 16)年齡因素：免疫系統(tǒng)尚未健全的嬰兒、由母親被動(dòng)獲得抗體的嬰兒，或抗體水平下降的老人，試驗(yàn)時(shí)可出現(xiàn)異常的結(jié)果。 17)防腐劑因素：患者體內(nèi)可能含有對(duì)防腐劑中的成分或?qū)鞈医橘|(zhì)的抗體，導(dǎo)致ABO定型差錯(cuò)。16Rh(D)定型和定型試驗(yàn)中應(yīng)注意的問題： Rh定型主要鑒定D抗原（IgG抗D和IgM抗D）。 Rh系統(tǒng)是最為復(fù)雜得多一個(gè)系統(tǒng)，涉及臨床的主要有D、C、c、E、e五個(gè)抗原，其中D抗原的免疫原性最強(qiáng)，僅次于A或B抗原。 Rh血型

10、鑒定方法有：玻片法、試管法、微量板法、微柱凝膠法等，試管法最為經(jīng)典。目前大部分醫(yī)院都使用微柱凝膠卡式血型鑒定，方法簡便快捷，準(zhǔn)確度較高。1718導(dǎo)致Rh血型鑒定可能出現(xiàn)假陽性的原因： 1)受檢細(xì)胞已被免疫球蛋白致敏，或標(biāo)本血清中含有引起紅細(xì)胞凝集的因子。 2)受檢細(xì)胞與抗血清孵育的時(shí)間過長，含高蛋白的定型試劑會(huì)引起緡錢狀形成。 3)標(biāo)本抗凝不當(dāng)，受檢過程中出現(xiàn)凝血或小的纖維蛋白凝塊，誤判為陽性。 4)定型血清中含有事先未被檢測(cè)的其它特異性抗體，造成假陽性定型結(jié)果。 5)多凝集細(xì)胞造成定型的假陽性。 6)鑒定用器材或抗血清被污染，造成假陽性。19 可能出現(xiàn)假陰性的原因 1)受檢細(xì)胞懸液濃度太高，

11、與抗血清比例失調(diào)。 2)漏加或錯(cuò)加定型血清。 3)定型血清的使用方法錯(cuò)誤，沒有按說明書進(jìn)行。 4)離心后重懸細(xì)胞扣時(shí)，搖動(dòng)用力過度，搖散微弱的凝集。 5)抗血清保存不當(dāng)，導(dǎo)致失效。20 弱D型(Du型)血型及其鑒定： Du型抗原是RhO(D)的弱抗原，這種抗原通常與大部分鹽水抗D試劑不產(chǎn)生直接凝集反應(yīng)，而與部分的IgG抗D血型用間接抗球蛋白試驗(yàn)反應(yīng)陽性。因此當(dāng)我們初次得到Rh陰性結(jié)果時(shí)，必須進(jìn)行作Rh陰性確認(rèn)試驗(yàn)，即用三種不同批號(hào)的IgG抗D定型，如果全部陰性方可認(rèn)為該被檢者為Rh陰性，否則，只要有一批為陽性，則可認(rèn)為是Du型。 弱D人群作為獻(xiàn)血者按照RhD陽性對(duì)待，其血液只能給Rh陽性受血者

12、輸注；作為受血者按照RhD陰性對(duì)待，只能接受RhD陰性血液。21三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定定義： 不規(guī)則抗體是指血清中抗-A、抗-B以外的其他血型抗體，也稱意外抗體。不規(guī)則抗體包括同種抗體和自身抗體。 自身抗體：受血者體內(nèi)產(chǎn)生的抗體，針對(duì)自己本身的紅細(xì)胞抗原。 同種抗體：不只針對(duì)自身抗原，也會(huì)同種異型抗原發(fā)生反應(yīng)。 22不規(guī)則抗體的篩查方法不規(guī)則抗體的篩查方法 抗體篩選試驗(yàn)的原則是讓受檢的血清與已知血型的試劑紅細(xì)胞即篩選紅細(xì)胞起反應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)在37中有反應(yīng)的抗體1. 鹽水介質(zhì)法：主要用于IgM類抗體的篩查。 優(yōu)點(diǎn)是：方法簡單、操作簡單、成本低廉。 缺點(diǎn)是：靈敏度低2. 聚凝

13、胺法：優(yōu)點(diǎn)：與水鹽介質(zhì)法比靈敏度有所提高。3. 抗球蛋白試驗(yàn)：缺點(diǎn)：操作繁瑣、工作量大、耗時(shí)等。4. 酶法：能暴露隱蔽抗原，增強(qiáng)一些稀有抗原檢測(cè)。但可能 會(huì)破壞有些抗原，影響檢測(cè)。目前臨床是已不常使用。5. 微柱凝膠卡式檢測(cè)法23不規(guī)則抗體的鑒定不規(guī)則抗體的鑒定 一旦抗體被檢出，應(yīng)作抗體鑒定試驗(yàn)，以確定其特異性。抗體鑒定實(shí)驗(yàn)包含以下主要內(nèi)容：(1)自身細(xì)胞檢查：觀察患者(受者)的血清與患者(受者)自身細(xì)胞的反應(yīng)情況，確定血清內(nèi)是否有自身抗體或自身抗體和同種抗體二者同時(shí)存在。(2)普紅細(xì)胞：使用試劑細(xì)胞中的譜細(xì)胞，應(yīng)用各種抗體檢查技術(shù)，檢測(cè)患者的血清，確定其抗體的特異性。24四、交叉配血試驗(yàn)四、

14、交叉配血試驗(yàn)要求和內(nèi)容要求和內(nèi)容 交叉配血的要求：交叉配血的要求：25 交叉配血試驗(yàn)的內(nèi)容交叉配血試驗(yàn)的內(nèi)容26 交叉配血的目的交叉配血的目的27結(jié)果的解釋及處理1.抗體篩查陰性，交叉配血相容：絕大部分標(biāo)本抗體篩查陰性，交叉配血也是相容的。2.抗體篩查陰性，主側(cè)交叉配合試驗(yàn)陽性（1）復(fù)查血型（2）主側(cè)凝集類B抗原（3）血清中可能含有一種ABO抗體，必要時(shí)可以做ABO亞型鑒定283.抗體篩查試驗(yàn)陽性，主側(cè)交叉配合試驗(yàn)陽性（1）自身對(duì)照試驗(yàn)陰性：受血者體內(nèi)有同種不規(guī)則抗體。（2）自身對(duì)照試驗(yàn)陽性：受血者血清內(nèi)可能有自身抗體或同時(shí)存在不規(guī)則抗體。29影響因素影響因素 離子干擾 溫度 操作不規(guī)范 離心

15、不當(dāng) 30第二節(jié)第二節(jié) 鹽水介質(zhì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)鹽水介質(zhì)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)常用于血型鑒定、血清中IgM類抗體的篩查和鑒定、鹽水介質(zhì)的交叉配血等。 基本方法基本方法1.平板法 用于ABO血型和RhD抗原的定型 特點(diǎn)：簡單、快速，但易污染環(huán)境。2.試管法 為定型試驗(yàn)方法，也可于半定量試驗(yàn)。是輸血 前檢驗(yàn)最常用的試驗(yàn)方法。 特點(diǎn)：簡單、快速、易學(xué)，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。3.微孔板法 為定性試驗(yàn)方法。31 鹽水介質(zhì)配血方法鹽水介質(zhì)配血方法患患者者獻(xiàn)獻(xiàn)血血者者主主側(cè)側(cè)次次側(cè)側(cè)3233第三節(jié)第三節(jié) 酶處理實(shí)驗(yàn)技術(shù)酶處理實(shí)驗(yàn)技術(shù) 原理：在酶的作用下切斷帶有負(fù)電荷的羧基基團(tuán)的唾液酸，降低Zeta電位，縮短紅細(xì)胞之間

16、的距離。增強(qiáng)IgG抗體對(duì)紅細(xì)胞的凝集。常用對(duì)的酶：木瓜蛋白酶，菠蘿蛋白酶，無 花果蛋白酶等34 酶介質(zhì)配血方法酶介質(zhì)配血方法3536結(jié)果的判斷結(jié)果的判斷（1）陽性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管凝集為陽性，不出現(xiàn)凝集判定為陰性。（2）陽性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管凝集，實(shí)驗(yàn)失敗分析原因，重新實(shí)驗(yàn)。37第四節(jié)第四節(jié) 抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù)基本原理基本原理 抗球蛋白試驗(yàn)（Coombs實(shí)驗(yàn)）主要用于檢測(cè)血清中的不完全抗體如：IgG、IgA和（或）補(bǔ)體如：C3、C4。 在鹽水介質(zhì)中，不完全抗體只能致敏紅細(xì)胞，而不能使紅細(xì)胞出現(xiàn)可見的凝集反應(yīng)，加入抗球蛋白試劑后，抗球蛋白分子的Fab片

17、段與紅細(xì)胞表面的受體結(jié)合，而產(chǎn)生紅細(xì)胞凝集，因此采用此方法可以檢測(cè)出血清中是否存在不完全抗體。38抗球蛋白試驗(yàn)原理圖抗球蛋白試驗(yàn)原理圖39分類及應(yīng)用分類及應(yīng)用 抗球蛋白試驗(yàn)抗球蛋白試驗(yàn)直接直接間接間接致敏紅細(xì)胞的不完全抗體、補(bǔ)體致敏紅細(xì)胞的不完全抗體、補(bǔ)體血清中的不完全抗體血清中的不完全抗體應(yīng)用應(yīng)用直接：直接：HDN的診斷、的診斷、AIHADE的診斷、藥物誘發(fā)型溶血病的診斷的診斷、藥物誘發(fā)型溶血病的診斷間接：交叉配血及血型鑒定、器官移植、等間接：交叉配血及血型鑒定、器官移植、等40 抗球蛋白配血方法抗球蛋白配血方法41 42結(jié)果的判斷結(jié)果的判斷直接抗球蛋白試驗(yàn)：直接抗球蛋白試驗(yàn)：（1）陽性對(duì)照

18、管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管）陽性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管凝集，判定為陽性。凝集，判定為陽性。（2）陽性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管）陽性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管不凝集，須做陰性確認(rèn)后判定結(jié)果。不凝集，須做陰性確認(rèn)后判定結(jié)果。（3）陽性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管凝集，）陽性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管凝集，結(jié)果不可信不能發(fā)出報(bào)告，分析原因后重做試驗(yàn)。結(jié)果不可信不能發(fā)出報(bào)告，分析原因后重做試驗(yàn)。43間接抗球蛋白試驗(yàn)：間接抗球蛋白試驗(yàn)：（1）陽性對(duì)照管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，陰性）陽性對(duì)照管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，陰性對(duì)照管不呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，被檢管呈現(xiàn)對(duì)照管不呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，被檢

19、管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)為陽性結(jié)果，表示被檢者血凝集反應(yīng)為陽性結(jié)果，表示被檢者血 清中含有抗體。清中含有抗體。（2）陽性對(duì)照管不凝集和（或）陰性）陽性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管出現(xiàn)凝集，實(shí)驗(yàn)失敗，分析原對(duì)照管出現(xiàn)凝集，實(shí)驗(yàn)失敗，分析原因重做試驗(yàn)。因重做試驗(yàn)。44第五節(jié)第五節(jié) 聚凝胺介質(zhì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)聚凝胺介質(zhì)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 聚凝胺實(shí)驗(yàn)技術(shù)是一種快速、簡便檢測(cè)紅細(xì)胞不完全抗體的方法，可用來檢測(cè)IgG抗體，但I(xiàn)gG抗體的抗-K抗體除外。一、實(shí)驗(yàn)原理 凝聚胺（凝聚胺（polymatchingpolymatching）法首先利用低離子介質(zhì)降低溶液）法首先利用低離子介質(zhì)降低溶液的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云，促進(jìn)血

20、清（漿）的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云，促進(jìn)血清（漿）中的抗體與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合，再加入帶亞電荷的高價(jià)中的抗體與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合，再加入帶亞電荷的高價(jià)陽離子多聚物陽離子多聚物- -凝聚胺溶液，中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，凝聚胺溶液，中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，縮短細(xì)胞間距，形成可逆的非特異性聚集，并使縮短細(xì)胞間距，形成可逆的非特異性聚集，并使IgGIgG型抗型抗體直接凝集紅細(xì)胞。加入中和液后，僅由凝聚胺引起的非體直接凝集紅細(xì)胞。加入中和液后，僅由凝聚胺引起的非特異性聚集，會(huì)因電荷中和而分散，而由抗體介導(dǎo)的特異特異性聚集，會(huì)因電荷中和而分散，而由抗體介導(dǎo)的特異性凝集則不會(huì)分散性凝集則不會(huì)分散4

21、5 聚凝胺聚凝胺( (Polybrene)Polybrene)配血方法配血方法4647應(yīng)用范圍：血型鑒定、抗體篩查及交叉配血試驗(yàn)特點(diǎn)：靈敏、速度快、準(zhǔn)確、操作要求高。注意事項(xiàng)1. 不能用含有枸櫞酸鈉和肝素抗凝標(biāo)本2. 用聚凝胺試驗(yàn)技術(shù)交叉配血，出現(xiàn)不配合時(shí)，要用抗球蛋白試驗(yàn)重做，結(jié)果不一致時(shí)，以抗球蛋白試驗(yàn)為主。3.聚凝胺只能是正常紅細(xì)胞發(fā)生凝集，對(duì)缺乏唾液酸的細(xì)胞（如：T細(xì)胞及B細(xì)胞）無作用。48第六節(jié)第六節(jié) 微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)原理 微柱凝集試驗(yàn)的本質(zhì)是凝集反應(yīng)，在凝膠介微柱凝集試驗(yàn)的本質(zhì)是凝集反應(yīng)，在凝膠介質(zhì)中，紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合，經(jīng)低速離質(zhì)中，紅細(xì)胞抗原與相

22、應(yīng)的抗體結(jié)合，經(jīng)低速離心，未和抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則沉于凝膠的底部心，未和抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則沉于凝膠的底部（管底尖部），而與抗體結(jié)合或凝集的紅細(xì)胞，（管底尖部），而與抗體結(jié)合或凝集的紅細(xì)胞，位于凝膠上層或懸浮在凝膠中位于凝膠上層或懸浮在凝膠中 。49一、微柱凝膠試驗(yàn)原理一、微柱凝膠試驗(yàn)原理 操作及結(jié)果的判定操作及結(jié)果的判定50二、應(yīng)用1.抗球蛋白試驗(yàn) 直接抗球蛋白試驗(yàn)和 間接抗球蛋白試驗(yàn)。2.ABO血型鑒定 可做單純正定型，也可同時(shí)做正反定型。3.其他血型系統(tǒng)檢測(cè) 如Rh其他抗原（CcEe）定型三、特征及優(yōu)點(diǎn)：1.簡便 2.準(zhǔn)確：結(jié)果清晰明確 ，可重復(fù)性強(qiáng)。 3.敏感 4.結(jié)果保存時(shí)間長 5.標(biāo)本

23、用量少 6.標(biāo)準(zhǔn)化 7.安全51四、微柱凝集試驗(yàn)中可能存在的問題四、微柱凝集試驗(yàn)中可能存在的問題1. 假陽性反應(yīng)2. 假陰性反應(yīng)3. 溶血反應(yīng)52五、局限性與發(fā)展前景 微柱凝集抗人球蛋白試驗(yàn)及微柱膠免疫檢測(cè)技術(shù)的本質(zhì)是血凝試驗(yàn)，這理論上為制備抗原抗體包被的紅細(xì)胞為指示紅細(xì)胞，以間接血凝試驗(yàn)來檢測(cè)紅細(xì)胞抗原抗體以外的其他血液紅細(xì)胞、中路標(biāo)志、病原微生物，以及人體中其他可溶性抗體，如對(duì)藥物抗體、自身抗體的檢測(cè)等提供了比傳統(tǒng)血凝檢驗(yàn)更為敏感、準(zhǔn)確、簡單易行的方法。 微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)獎(jiǎng)在臨床各個(gè)領(lǐng)域有更為廣闊的發(fā)展。53第七節(jié)第七節(jié) 吸收放射試驗(yàn)吸收放射試驗(yàn)概念吸收試驗(yàn):抗原與抗體的結(jié)合是特異性的，因

24、此具有抗體活性的血清加入相應(yīng)抗原后，抗體的活性下降或消失，這種作用稱為吸收試驗(yàn)。放散試驗(yàn)是抗原與抗體的結(jié)合是可逆的，在物理?xiàng)l件改變時(shí)，抗體又會(huì)從抗原抗體復(fù)合物上分離下來，將抗體由抗原抗體復(fù)合物上分離下來的試驗(yàn)稱為放散試驗(yàn)54冷自身抗體冷自身抗體 ：理論上講凡是理論上講凡是3737與自身紅細(xì)胞不與自身紅細(xì)胞不反應(yīng)，而只有在低于反應(yīng)，而只有在低于3737環(huán)境下才能和自身紅細(xì)環(huán)境下才能和自身紅細(xì)胞反應(yīng)的抗體均可稱為冷自身抗體。實(shí)際上，冷胞反應(yīng)的抗體均可稱為冷自身抗體。實(shí)際上，冷自身抗體大多數(shù)只能在很低的溫度下自身抗體大多數(shù)只能在很低的溫度下( (例如例如4)4)與與自身細(xì)胞反應(yīng)。自身細(xì)胞反應(yīng)。溫自身抗體溫自身抗體：溫自身抗體是指在溫自身抗體是指在3737條件下能和條件下能和自身紅細(xì)胞反應(yīng)的抗體。當(dāng)患者血清中含有溫自自身紅細(xì)胞反應(yīng)的抗體。當(dāng)患者血清中含有溫自身抗體時(shí)，患者一般均有些貧血或溶血癥狀。身抗體時(shí)，患者一般均有些貧血或溶血癥狀。55吸收放散試驗(yàn)的應(yīng)用 證實(shí)存在于紅細(xì)胞上的弱抗原證實(shí)存在于紅細(xì)胞上的弱抗原分離、鑒定混合液體分離、鑒定混合液體除去血清中不需要的抗體除去血清中不需要的抗體濃縮低效價(jià)抗體濃縮低效價(jià)抗體核實(shí)抗體特異性核實(shí)抗體特異性利用吸收放散技術(shù)鑒定引起新生溶血病和免疫性利用吸收放散技術(shù)鑒定引起新生溶