一點紅總黃酮的提取及對羥自由基的清除作用研究

1、一點紅總黃酮的提取及對羥自由基的清除作用研究                 作者：廖莉，羅建華，蒙春越，張麗丹，馮玲，潘隆吉，黃鎖義 【摘要】  目的探討一點紅總黃酮的提取、鑒別及對羥自由基清除作用，以充分利用一點紅植物資源，避免資源的浪費。方法采用超聲波乙醇浸提法從一點紅中提取黃酮類物質(zhì)，對所提取的黃酮類物質(zhì)進行驗證，并用分光光度法測定含量，用一點紅總黃酮對羥自由基清除作用進行試驗。結(jié)果測得樣品中總黃酮的含量C=

2、0.816 8 mg/ml，回收率為100 %，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論該方法采用全物理過程，無任何污染，是提取一點紅黃酮類物質(zhì)的有效途徑。一點紅總黃酮提取液對Fenton體系產(chǎn)生的?OH自由基有很好的清除作用。論文論文參考網(wǎng) 【關(guān)鍵詞】  超聲波提取 一點紅 總黃酮 鑒別 自由基 清除Abstract：ObjectiveTo study the extraction method of the total flavanone from Emilia sonchifolia DC and its effect on of hydroxyl radical. MethodsThe fl

3、avonoids were extracted with ethanol as the solvent from Emilia sonchifolia DC by ultrasonic wave. Spectrophotometry was used to determine sthe content of the flavanone of Emilia sonchifolia DCThe effect of extract of Emilia sonchifolia DC on hydroxyl radical was studiedResultsBy this method the con

4、tent of the total flavanone from  Emilia sonchifolia DC was C=0.8168 mg/ml and the rate of recovery was 100%. ConclusionThis text provides the extraction and purification methods to get the outcome and the purity of the flavanone is high .This method is a purely physical process and has no poll

5、ution. It is an ideal way to extract the flavanone from Emilia sonchifolia DC.  Emilia sonchifolia DC has a scavenging action on hydroxyl radical.Key words：Ultrasonic wave treatment；  Emilia sonchifolia DC；  Total flavanone；  Identification；  Hydroxyl radical；  Scavengi

6、ng一點紅Emilia sonchifolia DC,又名羊蹄草、紅背葉、葉下紅、紅背果等，菊科一點紅屬一年生或多年生草本，分布于我國華南、華中和西南等地。一點紅性味涼，具清熱解毒、活血散淤之功效?？芍尉?、急性腸炎、泌尿系感染、咽喉炎、跌打腫痛、毒瘡等。一點紅采摘嫩梢供食，沸水焯后，加蒜蓉炒食，作湯。食味柔滑，清香可口1。臨床上常用于治療上呼吸道感染、口腔潰瘍、肺炎、乳腺炎、癤腫瘡瘍、皮膚濕疹等2。一點紅是印度喀拉拉邦用來治療炎癥、蚊蟲叮咬、結(jié)膜炎、風(fēng)濕病及創(chuàng)傷等的一種植物藥，已報道該植物地上部分含有吡咯雙烷類生物堿和黃酮類化合物，并且首次發(fā)現(xiàn)一點紅的抗氧化和抗炎作用，黃酮類為其作用的活性成

7、分3。目前國內(nèi)外對一點紅總黃酮的研究還相當(dāng)?shù)娜狈Α｜S酮類有效成分對治療冠心病、老年性癡呆、腦血栓、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有顯著效果，無副作用，并以此開發(fā)出多種藥品和保健食品4 。近年來，超聲技術(shù)應(yīng)用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質(zhì)、動物組織漿的毒質(zhì)等研究已有報道5，6，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點。很多研究表明，利用超聲波產(chǎn)生的強烈振動、高的加速度、強烈的空化效應(yīng)、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時間，并且還可避免高溫對提取成分的影響6。但超聲技術(shù)應(yīng)用于提取一點紅中黃酮類物質(zhì)的研究尚未見報道。為此，

8、本實驗用超聲波乙醇浸提法提取一點紅總黃酮、鑒別及提取物總黃酮對羥自由基的清除作用?，F(xiàn)報道如下。1  儀器與試劑1.1  儀器KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（江蘇省昆山市超聲儀器有限公司）；UV-755B紫外可見分光光度計（上海分析儀器總廠）；ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村光電儀器廠)；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。1.2  試劑95%乙醇AR；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；氫氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；乙酸鎂AR；甲醇AR；鎂粉AR；正丁醇AR；蘆丁標準品（中國藥品生物制品檢定所）；雙氧

9、水AR；硫酸亞鐵AR；水楊酸AR；新鮮一點紅（采自廣西百色市）。2  方法與結(jié)果2.1  總黃酮成分提取取新鮮一點紅，烘干，粉碎。稱取一點紅粉末約6 g，加80 ml 95%乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾。濾渣再加80 ml 95 %乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩57 ml左右為止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。2.2  測定方法依據(jù)以蘆丁為對照品測定一點紅中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時控制適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。2.3  定

10、量實驗-總黃酮的含量測定取樣品液適量，在0.30 ml 5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420700 nm波長范圍測定絡(luò)合物的吸光度，絡(luò)合物于510 nm波長處有最大吸收，故測定時選用此波長。分別精密吸取蘆丁對照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30 ml，搖勻，靜置6 min；再加10%硝酸鋁溶液0.30 ml，搖勻，靜置6 min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00 ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12 min，以試劑作空白參比液

11、，于510 nm處測吸光度。吸光度測定結(jié)果見表1。表1  紫外可見分光光度計測定蘆丁對照液吸光度結(jié)果（略）根據(jù)上表得回歸方程：A=-0.031 1+13.518 4C，r=0.999 9。論文參考網(wǎng)2.4  定性實驗-總黃酮的鑒別紫外光下呈色反應(yīng)：取該樣品溶液點在濾紙上，在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點。濃氨水反應(yīng)：取該樣品溶液點在濾紙上，將濾紙在氨水上方熏30 s，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點。三氯化鋁反應(yīng)：取樣品溶液點在濾紙上，滴加三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點。乙酸鎂反應(yīng)：取樣品溶液點在濾紙上，滴

12、加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點。鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液1ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。2.5  總黃酮提取物對?OH清除作用參照Fenton反應(yīng)的方法建立反應(yīng)體系模型7，利用H202與Fe2+混合產(chǎn)生?OH，但由于?OH具有很高的反應(yīng)活性，存活時間短，若在反應(yīng)體系中加入水楊酸，就能有效地捕捉?OH，并產(chǎn)生有色產(chǎn)物。反應(yīng)式如下：H202+ Fe2+Fe3+?OH+OH-  。該產(chǎn)物在510 nm處有強吸收，若在此反應(yīng)體系中加入具有清除?OH功能的被測物，便會與水楊酸競爭?OH，從而使有色產(chǎn)物生成量減少，采用固定反應(yīng)時

13、間法，在相同體積的反應(yīng)體系(8.8 mmol/L H2O21 ml，9 mmol/L Fe2+l ml，9 mmol/L 1 ml水楊酸-乙醇溶液)加入一系列不同濃度的一點紅總黃酮提取液，并以蒸餾水為參比，與試劑空白液比較，在510 nm處測量各濃度下的吸光度，便能測定被測物(總黃酮)對?OH的清除作用，其清除率計算公式：清除率()=  AO-AA0×100%以實驗的提取液總黃酮作為樣品，分別取不同體積的樣品定容到50 ml分別測其對?OH的清除作用。從圖1中可看出，一點紅總黃酮提取液對由Fenton體系產(chǎn)生的?OH有一定的清除作用，隨著一點紅總黃酮提取液濃度的增加，對?O

14、H自由基的清除能力也增強，說明當(dāng)黃酮類物質(zhì)的濃度增加時，其清除率也增大。3  討論實驗結(jié)果表明，本實驗方法工藝簡單，回收率為100%。利用本文所提供的超聲波提取、純化方法而得到的黃酮類物質(zhì)其純度較高。超聲波可以強化乙醇浸提法，達到省時、高效、節(jié)能的目的，此方法采用全物理過程，無任何污染，是一條理想的提取黃酮類物質(zhì)的途徑，具有廣闊的應(yīng)用前景。    黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分，具有很高的藥用價值。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等4。天

15、然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進入脂肪組織，進而體現(xiàn)出如下功能：消除疲勞、保護血管、防動脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器細胞的功能。     黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用8，9。近年來，世界上掀起了植物藥開發(fā)的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目。一點紅分布廣泛，本文實驗結(jié)果表明，一點紅中含有較為豐富的黃酮，其提取物總黃酮對羥自由基具有很好的清除作用。因此，一點紅具有廣泛的開發(fā)和利用價值，值得綜合利用，加強資源開發(fā)。【參考文獻】  1劉厚誠.一點紅及其栽培技術(shù)J.長江蔬菜,2002,11：12.2陳航燕,盧海濤,余同珍.草藥一點紅治療靜脈炎197例臨床觀察J.廣東藥學(xué)院學(xué)報,2005,21(1):111.3李秀信,王榮花,楊秀萍,等.一點紅黃酮成分的分析及含量測定J.西北植物學(xué)報,2003,23(4):671 .4夏杏洲,張 輝,魏傳晚.榕樹葉中黃酮類化合物的提取條件研究J.食品研究與開發(fā),2002,23(5):35.5劉祥義.超聲波提取元寶楓葉總黃酮方法研究J.云南化工，2003，30（1）：27.6