藥學(xué)質(zhì)量研究標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范

1、藥學(xué)質(zhì)量研究的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范根據(jù)化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則、化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則、化學(xué)藥物雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則、中國藥黃2010年版二部附錄和中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范與藥品檢驗(yàn)儀器操作規(guī)程等相關(guān)規(guī)定，特制訂本公司藥學(xué)質(zhì)量研究的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。一、性狀1. 外觀性狀1.1 檢測方法：目測、鼻聞1.2 檢測結(jié)果：比如某藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定“本品為白色或類白色粉末”，結(jié)果應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況寫為下面幾種情況：（1）本品為白色粉末；（2）本品為類白色粉末；不能直接寫為：本品為白色或類白色粉末。1.3注意事項(xiàng)：樣品的顏色的表述，要按照由淺到深的順序排列；按照白色、類白色、微黃色、淡黃色、

2、淺黃色、黃色；兩個色階相鄰，用“或”來描述，如白色或類白色結(jié)晶性粉末；色階之間相隔兩個以上，采用“至”來描述，如類白色至淡黃色粉末。2. 結(jié)晶性2.1 檢測方法：用X粉末衍射法檢查（中國藥典2010年版二部附錄IX F）。本檢測項(xiàng)外送。對于研究3類新藥，分別將小試、工藝驗(yàn)證批、中試三批、自制對照品、上市品和小試、中試影響因素10天、加速6月、長期6月.12月送樣檢驗(yàn)；對于研究6類新藥分別將小試、中試三批、自制對照品和上市品送樣檢驗(yàn)。如上市品因輔料檢測有干擾時，可采用TGA等其它方法代替。2.2 檢測結(jié)果：如沒有特征性的衍射圖（尖銳的衍射峰），就屬于無定型粉末；反之屬于結(jié)晶性粉末。2.3 注意事

3、項(xiàng)：許多藥物具有多晶型現(xiàn)象。因物質(zhì)的晶型不同，其物理性質(zhì)會有不同，并可能對生物利用度和穩(wěn)定性產(chǎn)生影響，故應(yīng)對結(jié)晶性藥物的晶型進(jìn)行研究，確定是否存在多晶型現(xiàn)象；尤其對難溶性藥物，其晶型如果有可能影響藥物的有效性、安全性及穩(wěn)定性時，則必須進(jìn)行其晶型的研究。晶型檢查通常采用熔點(diǎn)、紅外吸收光譜、粉末 X射線衍射、熱分析等方法。對于具有多晶型現(xiàn)象，且為晶型選型性藥物，應(yīng)確定其有效晶型，并對無效晶型進(jìn)行控制。3. 引濕性 參照藥物引濕性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-001）進(jìn)行檢驗(yàn)。4. 溶解度 參照溶解度檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-002）進(jìn)行檢驗(yàn)。其中溶劑的選擇應(yīng)包括常用溶劑、合成工藝路線如

4、重結(jié)晶等溶劑、流動相、氣相色譜溶解樣品所需的溶劑或其它實(shí)驗(yàn)用的溶劑比如溶出介質(zhì)和助溶劑。5. 熔點(diǎn) 參照熔點(diǎn)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-003）進(jìn)行檢驗(yàn)。對于熔點(diǎn)不明顯的藥物可不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，但仍需考察此項(xiàng)。6. DSC6.1 檢測方法：用差示掃描量熱分析法（DSC）（中國藥典2010年版二部附錄 N）。本檢測項(xiàng)外送。對于研究3類新藥，分別將小試、中試三批、自制對照品、上市品和中試三批影響因素10天、加速6月、長期6月.12月送樣檢驗(yàn)；對于研究6類新藥此項(xiàng)可免檢。6.2 檢測結(jié)果：不同樣品分別在一定溫度下有吸熱峰和放熱峰。同時，將此結(jié)果與熔點(diǎn)測定結(jié)果比較，一般情況下應(yīng)一致，用兩種檢測方法

5、來確定樣品的熔點(diǎn)。7. 比旋度 參照比旋度檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-004）進(jìn)行檢驗(yàn)。如有標(biāo)準(zhǔn)或參考文獻(xiàn)時，要完全按照標(biāo)準(zhǔn)中的溶劑和濃度進(jìn)行試驗(yàn)；若沒有標(biāo)準(zhǔn)的項(xiàng)目，溶劑優(yōu)先考慮水、甲醇水、乙腈水等低毒性的溶劑，必要時用DMF.二、鑒別常用方法：化學(xué)反應(yīng)法（官能團(tuán)鑒別）、色譜法（TLC、HPLC、GC）、光譜法（紫外、紅外）。1.1 化學(xué)反應(yīng)法：主要原理是選擇官能團(tuán)專屬的化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行鑒別。包括顯色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、鹽類的離子反應(yīng)等。一般參照中國藥典2010年版二部附錄進(jìn)行檢驗(yàn)。如標(biāo)準(zhǔn)中沒有相關(guān)規(guī)定，可查閱文獻(xiàn)，根據(jù)結(jié)構(gòu)式自行確定此檢測項(xiàng)。但在撰寫資料時應(yīng)體現(xiàn)化學(xué)鑒別的原理。化學(xué)鑒別:要注意

6、需做檢測限,確定供試品濃度在多大以上即可呈正反應(yīng).1.2 色譜法：主要包括氣相（GC）、液相（HPLC）、薄層(TLC)等。1.3 光譜法：紅外吸收光譜法（IR）和紫外-可見吸收光譜法（UV）。原料藥：一般3-5個鑒別，一般情況下紅外光譜是必不可少的，兼顧功能團(tuán)的化學(xué)鑒別和光譜及色譜鑒別。制劑：一般2-3個鑒別，以化學(xué)反應(yīng)、色譜和紫外光譜鑒別為主。三、檢查（一）原料藥1. 氯化物 如合成工藝中使用了鹽酸等氯化物，應(yīng)參照氯化物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-005）進(jìn)行檢驗(yàn)。要注意配制一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液，考查樣品氯化物含量的范圍。2. 硫酸鹽 如合成工藝中使用了硫酸鹽，應(yīng)參照硫酸鹽檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)

7、程（SOP-Q10-006）進(jìn)行檢驗(yàn)。要注意配制一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液，考查樣品硫酸鹽含量的范圍。3. 重金屬 參照重金屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-007）進(jìn)行檢驗(yàn)。要注意配制一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液，考查樣品重金屬含量的范圍。4. 砷鹽 參照砷鹽檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-008）進(jìn)行檢驗(yàn)。一般中藥都應(yīng)進(jìn)行此項(xiàng)研究；對于化藥新藥(1/2/3類),應(yīng)該對其進(jìn)行研究,雖然無直接使用含砷試劑,但是其他化學(xué)試劑中也可能引入，至于是否訂入標(biāo)準(zhǔn)則依實(shí)際情況而定（含砷量是否大于2ppm）。對于化藥新藥(4/5/6類),如果在產(chǎn)品生產(chǎn)過程中沒用到天然動植物提取或者含砷試劑的話，在質(zhì)量研究中不需要進(jìn)行此項(xiàng)研究

8、。5. 熾灼殘?jiān)?參照熾灼殘?jiān)鼨z驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-009）進(jìn)行檢驗(yàn)。要平行測定兩份，取平均值。如對含堿金屬及氟的樣品進(jìn)行測定時，用鉑坩堝。因其比較貴重，購買的數(shù)量有限，一天只能檢測一批樣品。6. 粒度 用于制備固體制劑或混懸劑的難溶性原料藥，其粒度對生物利用度、溶出度和穩(wěn)定性有較大影響時，應(yīng)參照粒度檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-010）進(jìn)行檢驗(yàn)。7. 溶液的澄清度與顏色 一般對于制備注射劑的原料藥，參照溶液的澄清度與顏色檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-011）進(jìn)行檢驗(yàn)。要注意配制一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液,比較范圍.8. 酸堿度 一般對于制備注射劑的原料藥，參照酸堿度檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

9、（SOP-Q10-012）進(jìn)行檢驗(yàn)。9. 干燥失重 參照干燥失重檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-013）進(jìn)行檢驗(yàn)。干燥失重含1.0%以下的，只用測定一份，否則測定兩份。10. 水分 參照水分檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-014）進(jìn)行檢驗(yàn)，同時將測定結(jié)果與干燥失重結(jié)果進(jìn)行比較，一般情況下，兩者應(yīng)一致。（二）制劑1.注射劑 參照注射劑檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-015）進(jìn)行檢驗(yàn)。2.片劑 參照片劑檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-016）進(jìn)行檢驗(yàn)。3.膠囊劑 參照膠囊劑檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-017）進(jìn)行檢驗(yàn)。4.顆粒劑 參照顆粒劑檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP-Q10-018）進(jìn)

10、行檢驗(yàn)。5.其它 參照中國藥典2010年版二部附錄I進(jìn)行檢驗(yàn)。（三）有關(guān)物質(zhì)此項(xiàng)檢查的為樣品中的有機(jī)雜質(zhì)，按照其來源可以分為工藝雜質(zhì)（包括合成中未反應(yīng)完全的起始原料及試劑、中間體、副產(chǎn)物等）、降解產(chǎn)物。1.條件摸索1.1對于無標(biāo)準(zhǔn)的品種先進(jìn)行波譜掃描，確定檢測波長。應(yīng)配制一定濃度的供試品溶液和已知雜質(zhì)溶液及中間體溶液，進(jìn)行紫外掃描，選擇主成分及雜質(zhì)和中間體均有較強(qiáng)吸收的波長作為檢測波長。也可用二極管陳列的檢測器進(jìn)行選擇。若一個波長無法檢測所用的雜質(zhì)，可選擇雙波長。最優(yōu)化的檢測波長就是主要雜質(zhì)的最大吸收，而不是主成分的最大吸收，同時，應(yīng)使主藥和各主要雜質(zhì)的響應(yīng)值差異最小，如果主藥和各主要雜質(zhì)的響

11、應(yīng)差異較大，例如超出0.91.1的范圍時，應(yīng)采用加校正因子的主成分自身對照法。根據(jù)藥品和雜質(zhì)的具體性質(zhì)選擇合適的色譜柱、流動相、柱溫、流速等。一般以等度洗脫為主；必要時可采用梯度洗脫方式（如多雜質(zhì)的分離，等度洗脫分離效果不佳；或雜質(zhì)極性較大，等度洗脫時間過長，損失靈敏度）；以揮發(fā)性流動相為好，一般情況下盡量不加離子對試劑；首選甲醇-水系統(tǒng)（乙腈-水）；要求：在確定好的條件下，空白溶劑（對于原料）或空白輔料（對于制劑）不干擾測定，主成分峰保留時間應(yīng)合適（630min之間）、理論板數(shù)、拖尾因子和分離度應(yīng)均符合規(guī)定。1.2對于有標(biāo)準(zhǔn)的品種。應(yīng)先以標(biāo)準(zhǔn)上的方法進(jìn)行試驗(yàn)，如試驗(yàn)不出，可做相應(yīng)調(diào)整或參考其

12、他文獻(xiàn)進(jìn)行流動相選擇試驗(yàn)。2定位試驗(yàn)。取各已知雜質(zhì)、中間體及主成分配制成一定濃度的溶液（濃度應(yīng)準(zhǔn)確配制，雜質(zhì)的濃度一般為主藥濃度的1%），分別配制供試品溶液、雜質(zhì)溶液，和混合樣溶液進(jìn)樣。要求：主峰與最近雜質(zhì)峰的分離度不得小于2.0，雜質(zhì)與雜質(zhì)的分離度達(dá)到基線分離（在出圖量程下）。如果試驗(yàn)達(dá)不到要求應(yīng)立即向公司匯報。拖尾因子不得大于2.0。主峰的理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。3.檢測限。取已知純度的樣品適量，用溶劑作一系列稀釋，按擬定的色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。以信噪比的3:1的進(jìn)樣量為檢測限。供試品溶液濃度與檢測限濃度之比應(yīng)至少大于5000（特殊情況下大于2000也可以,但要向公司匯報)。用

13、于外標(biāo)法測定雜質(zhì)含量時，應(yīng)進(jìn)行定量限試驗(yàn)（信噪比的10:1）。注意圖譜一定要有稀釋過程.4.耐用性（一）各耐用性試驗(yàn)應(yīng)關(guān)注系統(tǒng)適用性（分離度、理論板數(shù)和拖尾因子）。 4.1pH值：一般情況下改變±0.2，改變pH值后，若達(dá)不到要求，應(yīng)縮小變化范圍，如在條件摸索時已發(fā)現(xiàn)色譜條件對流動相的pH值敏感，可直接縮小變化范圍。4.2柱溫：一般情況下變化±5。(改變溫度后，若達(dá)不到要求，應(yīng)縮小變化范圍,如在條件摸索時已發(fā)現(xiàn)色譜條件對柱溫，可直接縮小變化范圍。要求：改變色譜條件后，系統(tǒng)適用性應(yīng)合格，雜質(zhì)個數(shù)、雜質(zhì)總量應(yīng)一致，按現(xiàn)有關(guān)物質(zhì)規(guī)定檢測時間內(nèi)能檢出最后一個雜質(zhì)。如確實(shí)達(dá)不到要求，

14、應(yīng)在資料中注明。5破壞性檢驗(yàn)5.1對于原料藥方法：分別配制未破壞、酸破壞、堿破壞、氧化破壞、高溫破壞（固體和液體溶液）、光照（固體和液體溶液）、酸堿空白、氧化空白、空白溶液，按有關(guān)物質(zhì)檢測方法，取上述溶液一定體積進(jìn)樣。運(yùn)行時間應(yīng)長一些，比如標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定至主成分峰保留時間的3倍，我們試驗(yàn)應(yīng)至少作到4倍。供試品濃度為擬定測試濃度。酸、堿的濃度一般為0.1mol/l的鹽酸溶液和0.1mol/l的氫氧化鈉溶液；氧化的濃度一般為30%的雙氧水。放置時間應(yīng)按各品種的具體情況而定。酸、堿、氧化的濃度可根據(jù)檢測結(jié)果增加濃度或者減少濃度。要求：主峰與各降解雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)不小于1.5。破壞后主峰含量按面積歸一化法計(jì)

15、算應(yīng)為90-95%，如主峰含量降解較小，應(yīng)加大破壞力度，如加大酸堿的濃度和延長破壞時間，或者同時加熱,應(yīng)加大破壞，如破壞條件已很劇烈，優(yōu)先考慮增加濃度和延長時間,兩種方法仍然達(dá)不到要求,可同時加熱,若加熱也達(dá)不到要求,可以終止破壞，認(rèn)為樣品在該條件下穩(wěn)定但必需做到有一種降解類型能降解2%以上的雜質(zhì)。(破壞后需物料守恒（破壞后供試品溶液濃度/總峰面積與未破壞供試品濃度/總峰面積的值RSD應(yīng)為10%左右。各破壞后的樣品主峰峰純度應(yīng)為0.9999。對于島津液相報告應(yīng)顯示未檢測到不純物質(zhì),空白不干擾，各降解的雜質(zhì)保留時間均在運(yùn)行時間范圍內(nèi)。應(yīng)詳細(xì)記錄檢驗(yàn)中的現(xiàn)象，比如溶液變色，記錄放置時間等檢驗(yàn)過程。

16、5.2對于制劑方法：采用原料藥的破壞條件，對制劑進(jìn)行破壞性試驗(yàn)考察，同時還應(yīng)進(jìn)行空白輔料破壞性檢驗(yàn)，方法同原料藥。要求：輔料降解的雜質(zhì)應(yīng)不干擾供試品的有關(guān)物質(zhì)測定。6耐受性試驗(yàn)（二）6.1流動相的比例：一般情況下改變±2%。改變比例后，若達(dá)不到要求，應(yīng)縮小變化范圍，如在條件摸索時已發(fā)現(xiàn)色譜條件對流動相的比例敏感，可直接縮小變化范圍。6.2色譜柱：三根同型號不同批號的色譜柱進(jìn)行測定時。若需特殊柱子，應(yīng)在資料中標(biāo)明。要求：改變色譜條件后，系統(tǒng)適用性應(yīng)合格，雜質(zhì)個數(shù)、雜質(zhì)總量應(yīng)一致，按現(xiàn)有關(guān)物質(zhì)規(guī)定檢測時間內(nèi)能檢出最后一個雜質(zhì)。如確實(shí)達(dá)不到要求，應(yīng)在資料中注明。7溶液穩(wěn)定性配制一份供試品溶

17、液，分別于0、2、4、6、8小時（或更長時間,特別在使用自動進(jìn)樣器時,以后的試驗(yàn)溶液放置的時間不得超過溶液穩(wěn)定性的時間,否則試驗(yàn)結(jié)果無效）測定，考察供試品溶液的穩(wěn)定性。按各品種項(xiàng)下規(guī)定，取0h的自身對照溶液作為所有時間點(diǎn)的對照溶液，若不穩(wěn)定，可做2h內(nèi)的溶液穩(wěn)定性（常溫或低溫，以實(shí)際情況而定）。如主成分的含量變化的絕對值不大于2.0%，雜質(zhì)含量的絕對值在±0.1以內(nèi)，并不出現(xiàn)新的大于報告限度的雜質(zhì)均為供試品溶液穩(wěn)定，反之，不穩(wěn)定。判定結(jié)果：符合以下條件，說明供試品溶液穩(wěn)定。雜質(zhì)含量RSD值小于0.5%小于10%0.5%-2%小于5%大于2%小于2%如不穩(wěn)定，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，應(yīng)注明“立即

18、精密量取供試品溶液. l注入色譜儀”。 8系統(tǒng)適用性對于溶液穩(wěn)定的樣品，除另有規(guī)定外，配制一份對照品溶液（外標(biāo)法）或?qū)φ杖芤海ㄖ鞒煞肿陨韺φ辗ǎ鳛橄到y(tǒng)適用性溶液，取此溶液連續(xù)進(jìn)樣六針，計(jì)算其峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。 9線性 將主藥和各已知雜質(zhì)配制成一定濃度范圍（定量限至雜質(zhì)限度的2倍）的不同濃度5份供試品溶液，每份供試品溶液重復(fù)進(jìn)樣兩針。以濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析。 可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：相關(guān)系數(shù)（r）不得小于0.999，響應(yīng)因子的RSD應(yīng)不大于10%。10重復(fù)性配制6份相同的供試品溶液，由一個分析人員在相同的條

19、件下進(jìn)行測試，所得6份供試液雜質(zhì)含量的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于15%，雜質(zhì)個數(shù)應(yīng)相同。此項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果可作為方法學(xué)批次樣品的檢驗(yàn)結(jié)果。11準(zhǔn)確度(用外標(biāo)法進(jìn)行測定雜質(zhì)含量時，應(yīng)進(jìn)行考察此項(xiàng))該指標(biāo)主要是通過雜質(zhì)加樣回收率來反映。驗(yàn)證時一般要求根據(jù)有關(guān)物質(zhì)的中該雜質(zhì)的限度±20分別配制三個濃度的供試品溶液各三份，分別測定其含量，將實(shí)測值與理論值比較，計(jì)算各個水平的加樣回收率和9個加樣回收率數(shù)據(jù)的RSD。 該項(xiàng)目的可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在80%-120%之間，如雜質(zhì)的濃度為定量限，則該濃度下的平均回收率可放寬至70%-130%，相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。一般要求做到平均回收率均在

20、90%-110%之間，RSD不大于5%。12中間精密度配制6份（也可配制2份）相同的供試品溶液，分別由兩個分析人員于不同時間使用不同的儀器進(jìn)行測試，所得12個雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于20%。為了節(jié)省時間，我們通常將重復(fù)性檢驗(yàn)作為中間精密度1。13測定13.1主成分自身對照法分別取供試品溶液和自身對照溶液各1針進(jìn)樣，以供試品溶液色譜圖中雜質(zhì)峰面積除以自身對照溶液主峰面積，進(jìn)行計(jì)算雜質(zhì)含量。13.2校正因子加主成分自身對照法因很多雜質(zhì)對照品從中檢所買不到，經(jīng)常需要購買進(jìn)口對照品，成本比較高，故我們可以先用進(jìn)口對照品進(jìn)行方法學(xué)研究，然后以主成分為參照采用相對保留時間定位，采用加校正因子的主成

21、分自身對照法進(jìn)行已知雜質(zhì)的測定，校正因子有兩種做法,下面分別講兩種方法所需進(jìn)行的試驗(yàn).第一種方法:校正因子f：在這里定義為某雜質(zhì)R與所選的基準(zhǔn)物質(zhì)S的絕對定量校正因子（即單位峰面積所代表的物質(zhì)的量）之比。即相對校正因子（f）=錯誤！未找到引用源。 ,W為重量，故這里的相對校正因子也稱為相對重量校正因子，通常簡稱為校正因子。公式中帶入濃度來表示，則校正因子f=錯誤！未找到引用源。AS待測組分的峰面積（有時也用峰高）；AR雜質(zhì)對照品的峰面積；CS待測組分的濃度；CR雜質(zhì)對照品的濃度。實(shí)際操作：精密稱（量）取雜質(zhì)對照品和待測成分對照品各適量，配制成一定濃度的混合溶液（雜質(zhì)對照品濃度應(yīng)與所控限度相符，

22、待測成分對照品應(yīng)與所用自身對照溶液濃度相符），記錄色譜圖，按上述公式進(jìn)行校正因子的計(jì)算。要求：分別配制3份溶液，求f平均值，RSD值不大于2%。第二種方法: 分別配制雜質(zhì)、供試品線性溶液，范圍為雜質(zhì)限度濃度(60%-140%也可適當(dāng)?shù)姆艑捪薅龋┓謩e對雜質(zhì)和供試品進(jìn)行線性回歸，求斜率，以斜率之比為校正因子。相對響應(yīng)因子F：國外藥典習(xí)慣用相對響應(yīng)因子法來計(jì)算，與中國藥典上所說的校正因子f互為倒數(shù)關(guān)系，對于第一種方法：在這里定義為某雜質(zhì)R與所選定的基準(zhǔn)物質(zhì)S，單位量下在檢測器中產(chǎn)生的響應(yīng)值之比（一般以峰面積或峰高計(jì)）。F=錯誤！未找到引用源。 ，各符合含義、操作要求同上。對于第二種方法，F(xiàn)=雜質(zhì)的斜

23、率與供試品斜率之比。供試品測定取供試品溶液和自身對照溶液，分別進(jìn)樣，測量供試品溶液色譜圖上質(zhì)的峰面積，分別乘以相應(yīng)的校正因子（或者除以相應(yīng)的響應(yīng)因子）后與對照品溶液主成分的峰面積比較，依法計(jì)算各雜質(zhì)含量。并將測定的結(jié)果與上市品比較，雜質(zhì)個數(shù)和含量不得超過上市品。雜質(zhì)限度超過報告限度的雜質(zhì)均應(yīng)在檢測報告中報告，并應(yīng)報告具體的檢測數(shù)據(jù)；超過鑒定限度的雜質(zhì)應(yīng)進(jìn)行定性；超過質(zhì)控限度的雜質(zhì)，應(yīng)進(jìn)行樣品純度或與上市品比較，其雜質(zhì)含量不得超過上市品。屬于活性本體或體內(nèi)代謝物的雜質(zhì)可相應(yīng)放寬限度。（四）殘留溶劑一般溶劑用氣相色譜法檢驗(yàn)：1.色譜條件的建立。溶劑的確定，合成過程中所用到的殘留溶劑和起始原料中所用

24、到的殘留溶劑。方法：按擬定要測的殘留溶劑按限度要求，配制混合溶液，進(jìn)樣。要求：各溶劑的理論塔板應(yīng)不小于5000，各殘留溶劑之間的分離度應(yīng)大于1.5。 2殘留溶劑的定位方法：分別按限度要求配制定位溶液，和混合溶液，分別進(jìn)樣。要求：定位溶液與混合溶液的保留時間應(yīng)一致。3空白檢驗(yàn)方法及要求：取配樣溶液進(jìn)行，就對擬定要測的殘留溶劑無干擾。 4檢測限    方法：先按各溶液的峰高比計(jì)算出各自稱樣量（即是配制一份溶液，使各溶劑的峰高基本一致）并逐步稀釋當(dāng)各殘留溶劑主峰與噪音峰信號的強(qiáng)度比為3時，連續(xù)進(jìn)樣3針同一套資料要保持一致性，如果有關(guān)物質(zhì)和含量檢測時沒有連續(xù)進(jìn)樣3針，原則

25、是和有關(guān)物質(zhì)做檢測時進(jìn)樣次數(shù)一致。要求：檢測限的保留時間與高濃度的保留時間基本一致（若不一致時應(yīng)向公司匯報）。 注意：應(yīng)有稀釋過程的圖譜。  5定量限方法：先按各溶液的峰高比計(jì)算出各自稱樣量（即是配制一份溶液，使各溶劑的峰高基本一致）并逐步稀釋當(dāng)各殘留溶劑主峰與噪音峰信號的強(qiáng)度比為10時，連續(xù)進(jìn)樣6針。同一套資料要保持一致性，如果有關(guān)物質(zhì)和含量檢測時沒有連續(xù)進(jìn)樣3針，原則是和有關(guān)物質(zhì)做檢測時進(jìn)樣次數(shù)一致。 注意：應(yīng)有稀釋過程的圖譜。檢測限和定量限應(yīng)設(shè)計(jì)為同一天進(jìn)行檢驗(yàn)。6準(zhǔn)確度(對于外標(biāo)法測含量應(yīng)進(jìn)行考察)（對于三類二類溶液可不進(jìn)行此檢驗(yàn)）方法：該指標(biāo)主要是通過回收率來反映。驗(yàn)證時一

26、般要求根據(jù)有關(guān)物質(zhì)的定量限與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中該雜質(zhì)的限度分別配制三個濃度的供試品溶液各三份（例如某雜質(zhì)的限度為0.5%，則可分別配制供試品含雜質(zhì)濃度為0.4、0.5和0.6的溶液），分別測定其含量，將實(shí)測值與理論值比較，計(jì)算回收率，并計(jì)算9個回收率數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）。將供試品加入雜質(zhì)限度的80%、100%、120%的雜質(zhì)，每份濃度配制三份 該項(xiàng)目的可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在80%-120%之間，如雜質(zhì)的濃度為定量限，則該濃度下的平均回收率可放寬至70%-130%，相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。7線性線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗(yàn)證方法為：在定量限至一定的濃度范圍內(nèi)

27、(一般為雜質(zhì)限度的150%)配制6份濃度不同的供試液，分別測定該雜質(zhì)峰的面積，計(jì)算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析。 可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.990，Y軸截距應(yīng)在100響應(yīng)值的25以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。8精密度(對于外標(biāo)法測含量應(yīng)進(jìn)行考察)1）重復(fù)性配制6份雜質(zhì)濃度相同的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進(jìn)行測試，所得6份供試液含量的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于15%。2）中間精密度配制6份雜質(zhì)濃度相同的供試品溶液，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進(jìn)行測試，所得12個含量數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于20%

28、。為了節(jié)省時間，我們通常將重復(fù)性檢驗(yàn)作為中間精密度1。9專屬性可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：空白對照應(yīng)無干擾，該雜質(zhì)峰與其它峰應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0。 10耐用性 用我們公司的儀器或者在沒有流量計(jì)的儀器上僅考察柱溫和色譜柱。 方法，設(shè)置不同的溫度進(jìn)混合溶液，考察系統(tǒng)適用性，如合格對樣品進(jìn)行測試，如不合格，不再進(jìn)行檢驗(yàn)，資料里應(yīng)對其說明。（五）溶出度溶出度研究試驗(yàn)主要包括以下內(nèi)容：（1）溶出介質(zhì)的選擇，（2）溶出介質(zhì)體積的選擇，（3）溶出方法（轉(zhuǎn)籃法與槳法）的選擇，（4）轉(zhuǎn)速的選擇，（5）溶出度測定方法的驗(yàn)證，（6）溶出度均一性試驗(yàn)（批內(nèi)），（7）重現(xiàn)行試驗(yàn)（批間）等。1.溶出介質(zhì)的選擇：建議采用

29、多條溶出曲線對產(chǎn)品的內(nèi)在品質(zhì)進(jìn)行評價。一般選擇0.1mol/L鹽酸溶液、pH5.0磷酸鹽溶液、pH6.8磷酸鹽溶液和水作為溶出介質(zhì)，測定12片自制品與上市品的溶出曲線，并計(jì)算f2因子，其應(yīng)大于50%（一般要求在70%-80%）。選取原則建議如下：藥物性質(zhì)四種溶出介質(zhì)酸性藥物1.0或1.25.56.56.87.5水中性或堿性、包衣制劑1.0或1.23.05.06.8水腸溶制劑1.0或1.24.05.06.8水緩控釋制劑1.0或1.23.05.06.87.5水說明：藥物的PKA小于3.0的可看作是酸性藥物，大于3.0的可看做中、堿性藥物；在測定之前應(yīng)先測定主成分在各種溶出介質(zhì)中的溶解度；檢驗(yàn)前還應(yīng)

30、進(jìn)行原料藥在各種pH值溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性考察。2.溶出介質(zhì)體積的選擇：一般一個劑量單位以溶劑900ml或1000ml為最普遍。3.溶出方法的選擇：一般情況下，片劑多選擇槳法，轉(zhuǎn)籃法多用于膠囊劑或漂浮的制劑。4.轉(zhuǎn)速的選擇：轉(zhuǎn)籃法以100轉(zhuǎn)/分為主（作100與50轉(zhuǎn)比較），槳法以50轉(zhuǎn)/分為主（作50與75轉(zhuǎn)比較），一般認(rèn)為槳法50轉(zhuǎn)/分相當(dāng)于轉(zhuǎn)籃法100轉(zhuǎn)/分。轉(zhuǎn)速的設(shè)置與具體品種有關(guān)，通常，藥物制劑的溶出速度隨著轉(zhuǎn)速的增加而增大，轉(zhuǎn)速過快，可能會導(dǎo)致對不同制劑溶出行為的區(qū)分能力差，所以不推薦選擇過高轉(zhuǎn)速。轉(zhuǎn)速的選擇應(yīng)以能區(qū)分不同處方和生產(chǎn)工藝的產(chǎn)品為宜，如確實(shí)需要選擇高轉(zhuǎn)速，應(yīng)進(jìn)行充分的驗(yàn)證

31、。在不同轉(zhuǎn)速條件下，同時測定12片自制品與上市品的溶出曲線，并計(jì)算f2因子，其應(yīng)大于50%。5.溶出度測定方法的驗(yàn)證5.1方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容與含量測定基本相同，應(yīng)進(jìn)行專屬性試驗(yàn)（輔料、膠囊殼的干擾試驗(yàn)）、線性試驗(yàn)、回收率試驗(yàn)、溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)等。應(yīng)該注意的是，在方法學(xué)驗(yàn)證中，試驗(yàn)所用的溶媒應(yīng)為溶出介質(zhì)，即應(yīng)考查輔料、膠囊殼在溶出介質(zhì)中的干擾，藥物在溶出介質(zhì)中的線性、回收率及穩(wěn)定性等。5.2膠囊殼的干擾試驗(yàn)經(jīng)常被忽視。參照中國藥典2010年版二部附錄XC溶出度測定法進(jìn)行；取6?？漳z囊，按該品種項(xiàng)下的分析方法測定每個膠囊的空白值，若空膠囊的干擾在2%以下時，可忽略不計(jì)；大于2%時，應(yīng)對溶出度測定結(jié)果進(jìn)行

32、校正；大于25%時，則不能通過校正消除干擾，溶出試驗(yàn)無效，應(yīng)重新選擇溶出度測定方法。 5.3在溶出度研究資料中，另一個被忽視的問題是濾膜吸附情況的考察（濾膜孔徑不大于0.8um）。在溶出度研究時，一定要考慮試驗(yàn)所用濾膜對主成分是否有吸附。中國藥典溶出度測定法對微孔濾膜的規(guī)定為“濾孔應(yīng)不大于0.8um，并使用惰性材料制成的濾器，以免吸附活性成分或干擾分析測定 。”工作中常用濾膜有水系和有機(jī)系兩種，濾膜孔徑0.45um、0.80um。判定吸附與否的方法和采用：（1）取溶出液過濾，分別舍去不同的體積（如5ml、6ml）的初濾液后測定觀察響應(yīng)值的變化，了解被測藥物與濾膜的吸附情況。（2）取樣后，一部分

33、不過濾直接采用高速離心，取上清液測定。另一部分采用過濾法，取所得的續(xù)濾液測定，考察兩者間測定數(shù)據(jù)的差異。（3）取對照品溶液，比較濾膜過濾前后數(shù)據(jù)的變化。如果對照品溶液用溶出介質(zhì)配制，采用第三種方法；否則，采用第二種。一般認(rèn)為吸附量在2%以下時可忽略不計(jì)，超過2%建議或在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明確注明濾膜規(guī)格或?yàn)V膜預(yù)處理方法（如煮沸1.5h），增加增加初濾液量（常規(guī)為5ml）或規(guī)定樣品高速離心后取上清液測定。 5.4另外在溶出度研究中還應(yīng)注意溶出度試驗(yàn)儀的校正、溶出介質(zhì)的脫氣等，保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，以全面正確和客觀地反映藥物的溶出情況。5.5幾點(diǎn)說明：溶出度測定的方法學(xué)驗(yàn)證、記住所用溶媒應(yīng)為溶出介質(zhì)，如果

34、是紫外法測定，供試品溶液吸光度在0.30.7之間，線性范圍可作為至0.20.8之間?；厥章试囼?yàn)一般按限度的±20%配制三個水平各三份樣品。根據(jù)實(shí)際需要，可在溶出介質(zhì)中添加表面活性劑，但應(yīng)對添加劑種類與濃度進(jìn)行評價。濃度研究應(yīng)從0.01%（w/v）起點(diǎn)，按照1、2、5級別逐步增加，不建議采用3%以上的濃度。禁止使用有機(jī)溶劑！當(dāng)體內(nèi)生物利用度優(yōu)良，必須放寬體外溶出度試驗(yàn)參數(shù)時，可通過加大表面活性劑濃度的方式得以實(shí)現(xiàn)。試驗(yàn)前應(yīng)首先進(jìn)行原料藥在各pH值溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性考察，以確保試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確測定。溶出均一性試驗(yàn)：考察同一批樣品的溶出曲線（1批，12片，每片畫一條曲線，共12條曲線）。溶出

35、重現(xiàn)性試驗(yàn)：考察至少3批樣品的溶出曲線（3批，每批12片，12片同一取樣點(diǎn)取平均值，不同取樣點(diǎn)畫一條曲線，共3條曲線）。溶出曲線相似性的判定：相似因子法f2。（六）含量均勻度片劑、硬膠囊劑或注射用無菌粉末：每片（個）活性成分含量小于或等于25mg或活性成分含量小于或等于每片（個）重量的25的品種；復(fù)方制劑：僅檢查符合上述條件的組分。內(nèi)容物為非均一溶液的軟膠囊、單劑量包裝的口服混懸液、透皮貼劑、吸入劑或栓劑。但對于某些主藥多、輔料少等特殊品種，如卡培他濱薄膜衣片（片重620mg，規(guī)格500mg），含主藥500mg，含輔料120mg，主藥是輔料的4倍（輔料小于主藥25%），考慮到輔料太少，難以混勻

36、，USP標(biāo)準(zhǔn)中便規(guī)定要做含量均勻度檢查。這一實(shí)際便給我們研發(fā)人一個提示，藥典標(biāo)準(zhǔn)是最低要求，也就是“這樣的必須要做”，但其他的情況要根據(jù)自己產(chǎn)品的性質(zhì)決定，作為研發(fā)不能僅以藥典為基礎(chǔ)，要有發(fā)散性思維。 如采用與含量測定相同的方法時，不需對方法進(jìn)行驗(yàn)證。具體測定法可參照含量測定下。如采用與含量測定不同的方法時，需對方法進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證內(nèi)容和方法除范圍為70%130%外，其它同含量測定四、含量測定1. 色譜條件的確定與系統(tǒng)性試驗(yàn) 如果和有關(guān)物質(zhì)檢查色譜條件一致，則注明“色譜條件同有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下相應(yīng)內(nèi)容”；如果色譜條件不一致，則同有關(guān)物質(zhì)檢查一樣作流動相篩選等試驗(yàn)?？瞻讓φ諔?yīng)無干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)

37、能完全分離，分離度不得小于2.0。拖尾因子不得大于1.5。以二極管陣列檢測器進(jìn)行純度分析時，主峰的純度因子應(yīng)大于0.9999。（若采用有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下的色譜條件，可不行此檢驗(yàn)）。 2. 定量限    主峰與噪音峰信號的強(qiáng)度比應(yīng)為10：1。 3.溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)如果色譜條件同有關(guān)物質(zhì)，則含量的溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)可不做，溶液穩(wěn)定性有關(guān)物質(zhì)溶液穩(wěn)定性結(jié)論。如果色譜條件同有關(guān)物質(zhì)不一樣，則取供試品在0、2、4、6、8h進(jìn)樣，求主峰面積的RSD值；如果不穩(wěn)定，作2h內(nèi)溶液穩(wěn)定性（常溫或低溫）。測定時，每個點(diǎn)平行進(jìn)2針。 可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：RSD錯誤！未找到引用源。2

38、%。  4.進(jìn)樣精密度    配制1份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，主峰峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，主峰保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于1.2，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離，主峰的理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。5 準(zhǔn)確度該指標(biāo)主要是通過回收率來反映。驗(yàn)證時一般要求分別配制濃度為80（對于原料藥樣品50%+對照品30%，對于制劑對照品80%+空白輔料）、100（對于原料藥樣品50%+對照品50%，對于制劑對照品100%+空白輔料）和120（對于原料藥樣品50%+對照品70%，對于制劑對照品120%+空白輔料）的供試品

39、溶液各三份，分別測定其加入對照品的量，將實(shí)測值與理論值比較，計(jì)算回收率。測定時，對照品雙樣雙針，供試品單樣雙針，共22針。 可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個回收率數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。    6線性 在50至200的濃度范圍內(nèi)配制至少5份濃度不同的供試液，分別測定其主峰的面積，平行進(jìn)兩針，計(jì)算平均峰面積。以濃度為橫坐標(biāo)（X），平均峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析。如含量測定方法與有關(guān)物質(zhì)相同時，可將有關(guān)物質(zhì)主成分的線性做到含量測定的120%時，含量測定可不做線性試驗(yàn)。 &#

40、160;  可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.999，Y軸截距應(yīng)在100響應(yīng)值的2以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。7.重復(fù)性     配制6份相同濃度的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進(jìn)行測試，所得6份供試液含量的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。測定時，對照品雙樣雙針，供試品單樣雙針，共16針。 8.中間精密度    配制6份（可配2份）相同濃度的供試品溶液，分別由兩個分析人員于使使用不同的儀器與試劑或于不同時間進(jìn)行測試，所得12個含量數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。（中間精密度1可重復(fù)性的數(shù)據(jù)）。9耐用性應(yīng)先參照上述有關(guān)物質(zhì)的耐用性進(jìn)行試系統(tǒng)適用性檢驗(yàn)：可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到