免疫比濁法檢測免疫球蛋白

1、編輯ppt免疫比濁法檢測免疫球蛋白免疫學(xué)系免疫學(xué)系編輯ppt 實驗原理實驗原理免疫濁度法是可溶性抗原、抗體在液相中免疫濁度法是可溶性抗原、抗體在液相中特異結(jié)合，產(chǎn)生一定大小的復(fù)合物，形成特異結(jié)合，產(chǎn)生一定大小的復(fù)合物，形成光的折射或吸收，光的折射或吸收，測定這種折射或吸收后測定這種折射或吸收后的透射光或散射光的透射光或散射光作為計算單位。作為計算單位。編輯ppt免免疫疫比比濁濁法法分分類類當(dāng)一束光當(dāng)一束光線通過溶線通過溶液受到光液受到光散射和光散射和光吸收兩個吸收兩個因素的影因素的影響而使光響而使光的強度減的強度減弱弱編輯ppt 透射比濁法和散射比濁法光路透射比濁法和散射比濁法光路檢測器檢測器

2、A檢測器檢測器B IC I0 I I 透射比濁法透射比濁法 散射比濁法散射比濁法編輯ppt（一）（一）基本原理基本原理v 是個極其簡單的方法。在抗原過量情況下，與待測是個極其簡單的方法。在抗原過量情況下，與待測樣品中相應(yīng)的樣品中相應(yīng)的IgIg發(fā)生抗原發(fā)生抗原- -抗體反應(yīng)，形成可溶性復(fù)合抗體反應(yīng)，形成可溶性復(fù)合物，使反應(yīng)介質(zhì)的濁度發(fā)生改變。物，使反應(yīng)介質(zhì)的濁度發(fā)生改變。v 測量方法利用分光光度計測量被吸收的量。讀數(shù)以測量方法利用分光光度計測量被吸收的量。讀數(shù)以吸收單位（吸收單位（A A）或）或ODOD值表示，值表示，A A值反映了入射光和透射光值反映了入射光和透射光的比率。待測物中的比率。待測

3、物中IgIg含量可通過標(biāo)準曲線計算得出。含量可通過標(biāo)準曲線計算得出。v 待測樣品中的抗原含量與吸光度呈正比，而與透射待測樣品中的抗原含量與吸光度呈正比，而與透射光呈反比。光呈反比。v 反應(yīng)在反應(yīng)在PEGPEG的作用下，加速復(fù)合物的形成。的作用下，加速復(fù)合物的形成。 編輯ppt透射比濁法測定原理光光 源源誘誘導(dǎo)導(dǎo)劑劑編輯ppt樣品光電計濾光片光源透射比濁法測定原理編輯ppt透射比濁法的缺陷：(1)溶液中存在的抗原抗體復(fù)合物分子應(yīng)足夠大，分子太小則阻擋不了光線的通過。(2)溶液中的抗原抗體復(fù)合物的數(shù)量要足夠多。如果數(shù)量太小，溶液濁度變化太小，對光通量影響不大。(3) 透射比濁是依據(jù)透射光減弱的原理

4、來定量的，因此只能測定抗原抗體反應(yīng)的第二階段，檢測仍需抗原抗體溫育反應(yīng)時間，檢測時間較長。光通量是每單位時間到達、離開或通過曲面光通量是每單位時間到達、離開或通過曲面的的光能數(shù)量光能數(shù)量 編輯ppt散射比濁法散射比濁法在入射光的在入射光的一定角度一定角度檢測粒子發(fā)出的散檢測粒子發(fā)出的散射光，射光，散射光的強度與散射光的強度與ICIC的含量呈正比的含量呈正比。編輯ppt散射比濁法測定原理增增 加加 散散 透透 率率 : 660nm 測測 定定 散散 射射 光光聚集形成聚集形成誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)劑編輯ppt檢測器 (LED)光電計樣品100 %0 %時間散射光強度編輯ppt（一）（一）基本原理基本原理 是

5、測定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動態(tài)過程。是測定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動態(tài)過程。 所謂速率，是在所謂速率，是在單位時間內(nèi)單位時間內(nèi)抗原抗體結(jié)合形成抗原抗體結(jié)合形成 復(fù)合物的速度。將各單位時間內(nèi)形成復(fù)合物的復(fù)合物的速度。將各單位時間內(nèi)形成復(fù)合物的 速率及測定的散射信號連接在一起，即是動態(tài)速率及測定的散射信號連接在一起，即是動態(tài) 的速率比濁分析。的速率比濁分析。 當(dāng)儀器測定到某一時當(dāng)儀器測定到某一時 間內(nèi)形成速率下降時，間內(nèi)形成速率下降時， 即出現(xiàn)即出現(xiàn)速率峰速率峰，該峰，該峰 值的高低，即代表所值的高低，即代表所 測抗原的量。測抗原的量。編輯pptCONCENTRATIONRATE在速率峰基礎(chǔ)上完成的標(biāo)準曲線

6、在速率峰基礎(chǔ)上完成的標(biāo)準曲線編輯ppt方法評價：方法評價： 敏感度高敏感度高 快速快速( (不必達平衡）不必達平衡） 抗原抗體結(jié)合的動態(tài)測定，理論上測定不抗原抗體結(jié)合的動態(tài)測定，理論上測定不受本底散射信號的影響受本底散射信號的影響 可檢測微量樣品可檢測微量樣品編輯ppt2.2.終點散射比濁法終點散射比濁法讓抗原抗體作用一定時間，使其反應(yīng)讓抗原抗體作用一定時間，使其反應(yīng)達到平衡達到平衡后，后，測定其測定其ICIC形成的量。形成的量。ICIC的濁度不再受時間的影響的濁度不再受時間的影響，但反應(yīng)但反應(yīng)ICIC聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前，進行濁度測定。聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前，進行濁度測定。編輯ppt散射比濁法

7、散射比濁法的缺陷的缺陷(1)(1)因為是一次性測定光吸收值，沒有考慮每一個因為是一次性測定光吸收值，沒有考慮每一個待測樣本的吸收和散射效果，可測定結(jié)果不準待測樣本的吸收和散射效果，可測定結(jié)果不準確確(2)(2)測定的仍是抗原抗體反應(yīng)的第二階段，不測定的仍是抗原抗體反應(yīng)的第二階段，不適合快速檢測。適合快速檢測。(3) (3) 終點法存在反應(yīng)本底終點法存在反應(yīng)本底，測定樣本的含量越低，測定樣本的含量越低本底比例越大，故在微量測定時，本底的干擾本底比例越大，故在微量測定時，本底的干擾是影響準確測定的重要因素。是影響準確測定的重要因素。 編輯ppt影響免疫比濁測定的因素1 1、抗原抗體比例、抗原抗體比

8、例2 2、抗體的質(zhì)量、抗體的質(zhì)量 抗體的特異性、效價、親和力抗體的特異性、效價、親和力3 3、反應(yīng)的溶液、反應(yīng)的溶液4 4、增濁劑的使用、增濁劑的使用編輯ppt1 1、透射比濁操作簡便，適用于普通的自動生化分析儀、透射比濁操作簡便，適用于普通的自動生化分析儀和普通的分光光度計，幾乎所有的實驗室均能開展。不和普通的分光光度計，幾乎所有的實驗室均能開展。不足的是靈敏度和精密度均不夠理想，所需的抗血清量大足的是靈敏度和精密度均不夠理想，所需的抗血清量大，檢測的周期較長。，檢測的周期較長。2 2、散射比濁的優(yōu)點是靈敏度、精密度均較高，檢測快、散射比濁的優(yōu)點是靈敏度、精密度均較高，檢測快速。其缺點是需特

9、定的分析儀器，試劑價格高。速。其缺點是需特定的分析儀器，試劑價格高。透射比濁法和散射比濁法優(yōu)缺點比較透射比濁法和散射比濁法優(yōu)缺點比較編輯ppt免疫濁度法測定中應(yīng)注意的問題免疫濁度法測定中應(yīng)注意的問題1 1、偽濁度的影響、偽濁度的影響 偽濁度形成原因很復(fù)雜，主要是抗血清含有非特偽濁度形成原因很復(fù)雜，主要是抗血清含有非特異性的交叉反應(yīng)性雜抗體成分；增濁劑濃度和反應(yīng)時間異性的交叉反應(yīng)性雜抗體成分；增濁劑濃度和反應(yīng)時間掌握不當(dāng)；樣品本身的濁度處理不當(dāng)；試劑的污染和變掌握不當(dāng)；樣品本身的濁度處理不當(dāng)；試劑的污染和變質(zhì)；器材尤其是比色杯等不夠清潔等因素。質(zhì)；器材尤其是比色杯等不夠清潔等因素。2 2、非特異

10、性散射光的影響、非特異性散射光的影響 免疫濁度法經(jīng)常受內(nèi)源性光散射的干擾，為避免這免疫濁度法經(jīng)常受內(nèi)源性光散射的干擾，為避免這些非特異性光散射的影響，應(yīng)用透射比濁法時需保證抗些非特異性光散射的影響，應(yīng)用透射比濁法時需保證抗體組分在體組分在3 3以下，散射比濁法需保證在以下，散射比濁法需保證在 0.50.5以下。以下。 編輯ppt本實驗中應(yīng)用聚乙二醇的生理特性本實驗中應(yīng)用聚乙二醇的生理特性 聚乙二醇是聚乙二醇是中性、無毒中性、無毒且具有獨特理化性質(zhì)和良好的且具有獨特理化性質(zhì)和良好的生物相溶性的高分子聚合物，生物相溶性的高分子聚合物，聚乙二醇即聚乙二醇即PEGPEG具有高具有高度的親水性度的親水性，在水溶液中有較大的水動力學(xué)體積，并，在水溶液中有較大的水動力學(xué)體積，并且且沒有免疫原性沒有免疫原性。當(dāng)藕聯(lián)到藥物分子或藥物表面時，。當(dāng)藕聯(lián)到藥物分子或藥物表面時，可以將其優(yōu)良性質(zhì)賦予修飾后的藥物分子，可以將其優(yōu)良性質(zhì)賦予修飾后的藥物分子，改變它們改變它們在水溶液中的生物分配行為和溶解性在水溶液中的生物分配行為和溶解性，在其修飾的藥，在其修飾的藥物周圍產(chǎn)生空間屏障，減少藥物的酶解，避免在腎臟物周圍產(chǎn)生空間屏障，減少藥物的酶解，避免在腎臟的代謝中很快消除，并使藥物能被免疫系統(tǒng)的細胞識的代謝中很快消除，并使藥物能被免疫系統(tǒng)的細胞識別別。編輯ppt 材料材料1. 1.免疫球蛋白試劑免疫球