植物組織培養(yǎng)設備及條件

1、第二章第二章 實驗室實驗室設計設計和和培養(yǎng)培養(yǎng)條件條件第一節(jié)第一節(jié) 實驗室設計及基本技術實驗室設計及基本技術第二節(jié)第二節(jié) 植物組織培養(yǎng)所要求的環(huán)境條件植物組織培養(yǎng)所要求的環(huán)境條件第一節(jié)第一節(jié) 實驗室設計及實驗室設計及基本技術基本技術一、實驗室組成一、實驗室組成二、儀器設備二、儀器設備三、培養(yǎng)器皿三、培養(yǎng)器皿及實驗用具及實驗用具四、洗滌技術四、洗滌技術五、滅菌技術五、滅菌技術六、無菌操作六、無菌操作 組織培養(yǎng)實驗室布局的總體要求組織培養(yǎng)實驗室布局的總體要求 便于隔離便于隔離 便于操作便于操作 便于滅菌便于滅菌 便于觀察便于觀察一一、實驗室組成基本實驗室基本實驗室輔助實驗室輔助實驗室實驗室實驗室組

2、成組成準備室準備室緩沖室緩沖室無菌操作室無菌操作室培養(yǎng)室培養(yǎng)室細胞生物學實驗室細胞生物學實驗室溫溫 室室生化分析實驗室生化分析實驗室水槽水槽實實驗驗臺臺擱擱架架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培培養(yǎng)養(yǎng)架架培培養(yǎng)養(yǎng)架架藥藥品品及及儀儀器器柜柜無菌臺無菌臺無菌臺無菌臺擱擱架架拉拉窗窗冰箱冰箱擱擱 架架電電爐爐門門4.5m3.0m3.5m4.0m準備室準備室緩沖室緩沖室無菌室無菌室培養(yǎng)室培養(yǎng)室組織培養(yǎng)準備實驗室組織培養(yǎng)準備實驗室準備室準備室緩緩 沖沖 室室無無 菌菌 室室無無 菌菌 室室培培 養(yǎng)養(yǎng) 室室培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)間二、儀器設備二、儀器設備1）、基本儀器設備 冰箱、電（磁）爐、酸度計、純水器、天平、移液

3、器、解剖鏡、光照培養(yǎng)箱、搖床、生化培養(yǎng)箱、培養(yǎng)基分裝器、攪拌器等。冰箱冰箱酸度計酸度計電爐電爐天平天平純水純水器培養(yǎng)基分裝器培養(yǎng)基分裝器攪拌器攪拌器搖 床體式顯微鏡體式顯微鏡倒置顯微鏡倒置顯微鏡冷光源冷光源 電磁攪拌器電磁攪拌器搖床搖床 2）、）、滅菌設備滅菌設備 蒸汽壓力滅菌鍋、干熱消毒柜、過濾滅蒸汽壓力滅菌鍋、干熱消毒柜、過濾滅菌裝置、噴霧消毒器、紫外燈。菌裝置、噴霧消毒器、紫外燈。蒸汽壓力滅菌鍋蒸汽壓力滅菌鍋高壓滅菌器干熱消毒柜干熱消毒柜75%酒精噴霧器酒精噴霧器噴霧消毒器噴霧消毒器3）、）、無菌操作設備無菌操作設備 超凈工作臺超凈工作臺二、設備、儀器二、設備、儀器超凈工作臺超凈工作臺

4、（一）設備（一）設備1.紫外線滅菌燈紫外線滅菌燈 2.日光燈日光燈 3.工作臺工作臺 4.凳子凳子 5.擱物架擱物架 6.窗窗 7.推拉門推拉門 8.緩沖間緩沖間無菌接種箱無菌接種箱4、細胞培養(yǎng)設備、細胞培養(yǎng)設備 搖 床培養(yǎng)架培養(yǎng)架HZC-250恒溫振蕩培養(yǎng)箱恒溫振蕩培養(yǎng)箱 150C 250D 光照培養(yǎng)箱光照培養(yǎng)箱 光照培養(yǎng)箱光照培養(yǎng)箱烘箱烘箱5、細胞學鑒定設備、細胞學鑒定設備 光學顯微鏡、體視光學顯微鏡、體視顯微鏡、倒置顯微鏡顯微鏡、倒置顯微鏡倒置顯微鏡倒置顯微鏡光學顯微鏡光學顯微鏡電子天平電子天平（0.0001g， 0.001g） 酸度計酸度計1、玻璃器皿、玻璃器皿三、培養(yǎng)器皿及實驗用具三

5、、培養(yǎng)器皿及實驗用具培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿三角瓶三角瓶培養(yǎng)瓶培養(yǎng)瓶2、金屬材質(zhì)用具、金屬材質(zhì)用具鑷子鑷子 解剖刀解剖刀接種針接種針（二）各類器皿（二）各類器皿 1 1器皿的類型器皿的類型（1 1）培養(yǎng)器皿）培養(yǎng)器皿三角瓶三角瓶、培養(yǎng)瓶、圓形培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)瓶、圓形培養(yǎng)瓶、試管試管、L L形管和形管和T T形管形管 （2 2）分注器）分注器 （3 3）刻度移液管）刻度移液管（4 4）微量移液器微量移液器（5）細菌過濾器細菌過濾器（三）器械用具（三）器械用具 打孔器打孔器 鑷子鑷子 解剖刀解剖刀 接種針接種針 剪刀剪刀 電熱滅菌器電熱滅菌器 四、洗滌技術四、洗滌技術1、玻璃器皿洗滌、玻璃器皿洗滌已用過的玻已用過

6、的玻璃璃器皿器皿浸漬浸漬12h洗衣粉洗洗衣粉洗滌滌清水清水沖洗沖洗晾干晾干備用備用新購置玻璃新購置玻璃器皿器皿2、塑料用品洗滌、塑料用品洗滌新的塑料器皿打開即用新的塑料器皿打開即用已用過的塑已用過的塑料器皿料器皿2%NaOH浸泡浸泡12h清水沖清水沖洗洗2%5%鹽酸鹽酸浸泡浸泡30min清水清水沖洗沖洗蒸餾水沖蒸餾水沖洗洗晾干備用晾干備用3、金屬用品洗滌、金屬用品洗滌熱洗衣粉水熱洗衣粉水洗凈洗凈沖洗沖洗擦干擦干五、滅菌技術五、滅菌技術物理方法物理方法：干干熱、濕熱、射線處理、過濾除菌等熱、濕熱、射線處理、過濾除菌等化學方法化學方法： 消毒劑、抗菌素滅菌消毒劑、抗菌素滅菌1、滅菌方法、滅菌方法2

7、、滅菌、滅菌（1）培養(yǎng)基滅菌：高溫高壓濕熱滅菌法 壓力在0.1M0.2MPa 溫度在121 滅菌1030min（2）玻璃器皿滅菌：蒸汽高壓消毒滅菌 干熱消毒滅菌飽和蒸汽壓力與其對應的溫度飽和蒸汽壓力與其對應的溫度飽和蒸汽壓力飽和蒸汽壓力溫度（溫度（）飽和蒸汽壓力飽和蒸汽壓力溫度（溫度（）kg/cm21b/m2kg/cm21b/m20.00.1410.2810.4420.5630.7030.8440.98402468101214100103.6106.9109.8112.6115.2117.6119.91.0551.1251.2661.4061.5431.68115161820222430501

8、21.0122.0124.1126.0127.8129.6134.5147.6（3）塑料器皿滅菌：塑料器皿滅菌： 多采用多采用高壓蒸汽消毒滅菌高壓蒸汽消毒滅菌（4）金屬用具滅菌：）金屬用具滅菌：灼燒滅菌灼燒滅菌 浸入浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼燒，冷酒精，后置于酒精火焰上灼燒，冷卻后使用卻后使用（5）接種室滅菌）接種室滅菌空氣消空氣消毒滅菌毒滅菌接種室接種室超凈工超凈工作臺作臺紫外燈紫外燈照射照射70%75%的酒精擦洗的酒精擦洗培養(yǎng)材料培養(yǎng)材料的接種的接種紫外燈紫外燈照射照射（6）外植體滅菌）外植體滅菌流水沖洗流水沖洗1020min或更長時間或更長時間70%75%酒精中浸泡酒精中浸泡30

9、s0.1%0.2%氯化汞氯化汞液中浸泡液中浸泡10min左右左右蒸餾水沖洗蒸餾水沖洗45次次在在10%的的次氯酸鈉次氯酸鈉、飽和飽和漂白粉漂白粉浸泡浸泡30min左右左右備用備用常用消毒劑消毒滅菌比較表常用消毒劑消毒滅菌比較表消毒劑消毒劑使用濃度使用濃度（%）去除難易去除難易消毒時間消毒時間（min）效果效果次氯酸鈣次氯酸鈣次氯酸鈉次氯酸鈉漂白粉漂白粉溴水溴水過氧化氫過氧化氫升汞升汞酒精酒精抗生素抗生素硝酸銀硝酸銀9102飽和溶液飽和溶液1210120.11707545（mg/L1易易易易易易易易最易最易較難較難易易中中較難較難5305305302105152100.223060530很好很好

10、很好很好很好很好很好很好好好最好最好好好較好較好好好 消毒消毒，更換實驗服、帽子與鞋子，進入接，更換實驗服、帽子與鞋子，進入接種室。種室。 打開打開超凈工作臺和無菌操作室的紫外燈，超凈工作臺和無菌操作室的紫外燈，照射照射40min左右，后關閉。左右，后關閉。 開啟過濾風機開啟過濾風機，使無菌風吹拂工作臺面和，使無菌風吹拂工作臺面和四周的臺壁。四周的臺壁。 用用70%75%的酒精擦拭工作臺和雙手的酒精擦拭工作臺和雙手。（7）接種準備）接種準備六、無菌操作六、無菌操作實驗員消毒實驗員消毒實驗室、無實驗室、無菌臺滅菌菌臺滅菌實驗器材實驗器材的滅菌的滅菌無菌接種無菌接種消消 毒毒實驗臺實驗臺衛(wèi)生衛(wèi)生培

11、養(yǎng)室培養(yǎng)室培養(yǎng)培養(yǎng) 植物組織培養(yǎng)是在嚴格植物組織培養(yǎng)是在嚴格無菌的條件下無菌的條件下進行的，要做到無菌的條進行的，要做到無菌的條件，需要一定的設備、器材和用具，同時還需要件，需要一定的設備、器材和用具，同時還需要人工控制溫度、人工控制溫度、光照、濕度光照、濕度等培養(yǎng)條件。等培養(yǎng)條件。 準備室準備室：器具的洗滌、干燥、保存、滅菌，各種藥品的儲備、：器具的洗滌、干燥、保存、滅菌，各種藥品的儲備、稱量、溶解、配制、培養(yǎng)基分裝等，稱量、溶解、配制、培養(yǎng)基分裝等，設備：設備：藥品柜、防塵廚、冰藥品柜、防塵廚、冰箱、天平、純水儀、酸度計、操作臺、滅菌鍋、烘箱。箱、天平、純水儀、酸度計、操作臺、滅菌鍋、烘箱

12、。 實驗室設計原則：實驗室設計原則：保證無菌操作，達到工作方便，防止污染。保證無菌操作，達到工作方便，防止污染?；瘜W室化學室/準備室、接種室、培養(yǎng)室。準備室、接種室、培養(yǎng)室。小小 結(jié)結(jié) 接種室：接種室：植物材料的消毒、接種、培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移、試管苗繼代、植物材料的消毒、接種、培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移、試管苗繼代、原生質(zhì)體制備及其它需要進行的無菌操作。原生質(zhì)體制備及其它需要進行的無菌操作。設備：設備：紫外光源、超紫外光源、超凈工作臺、消毒器、酒精燈、接種器械（鑷子、剪刀、解剖刀、凈工作臺、消毒器、酒精燈、接種器械（鑷子、剪刀、解剖刀、接種針）。清潔和消毒，減少與外界空氣對流，接種針）。清潔和消毒，減少與外界空氣對流

13、，穿實驗服及換鞋穿實驗服及換鞋以減少帶入雜菌。以減少帶入雜菌。 培養(yǎng)室：培養(yǎng)室：墻壁要求墻壁要求絕熱防火的性能絕熱防火的性能，培養(yǎng)架由金屬制成，底，培養(yǎng)架由金屬制成，底層離地高約層離地高約10cm，層間隔層間隔40cm，總高總高1.7m左右，長度根據(jù)日光燈左右，長度根據(jù)日光燈的長度而設計，的長度而設計，寬度為寬度為60cm。第二節(jié)第二節(jié) 植物組織培養(yǎng)所需的環(huán)境植物組織培養(yǎng)所需的環(huán)境 條件及營養(yǎng)成分條件及營養(yǎng)成分一、環(huán)境條件一、環(huán)境條件 與自然條件一樣，組織培養(yǎng)中的外植體的生長要受到與自然條件一樣，組織培養(yǎng)中的外植體的生長要受到溫度、光照、濕度溫度、光照、濕度等各種物理條件，等各種物理條件，不同

14、不同培養(yǎng)基培養(yǎng)基組組成、成、pH值、滲透壓值、滲透壓等各種化學條件，以及等各種化學條件，以及外植體部位、大小、細胞外植體部位、大小、細胞密度密度等各種生物條件等環(huán)境條件的影響。如何根據(jù)需要來控等各種生物條件等環(huán)境條件的影響。如何根據(jù)需要來控制培養(yǎng)條件是組織培養(yǎng)中的一個重要問題。制培養(yǎng)條件是組織培養(yǎng)中的一個重要問題。溫度溫度光照光照濕度濕度氣體氣體滲透壓滲透壓pH值值一般最適溫度在一般最適溫度在252之間之間環(huán)境條件環(huán)境條件最常用的是最常用的是光照光照16h，黑暗，黑暗8h 一般情況下，培養(yǎng)器內(nèi)相對濕度應達一般情況下，培養(yǎng)器內(nèi)相對濕度應達100%，培養(yǎng)，培養(yǎng)室內(nèi)環(huán)境的相對濕度在室內(nèi)環(huán)境的相對濕度

15、在70%80% 氧氣氧氣是愈傷組織生長所必需是愈傷組織生長所必需的的調(diào)節(jié)滲透壓常常從調(diào)節(jié)滲透壓常常從糖糖入手入手 培養(yǎng)基的培養(yǎng)基的pH值大多在值大多在5.06.5，5.8溫度在溫度在20-27左右，空調(diào)控溫，濕度恒定，相對濕度左右，空調(diào)控溫，濕度恒定，相對濕度在在70-80%，光照由定時開關控制，每天，光照由定時開關控制，每天光照光照10-16h左右，左右，不同植物決定光照時間，培養(yǎng)室可采用太陽光為能源，不同植物決定光照時間，培養(yǎng)室可采用太陽光為能源，易成活，陰雨天用室內(nèi)燈光補光。易成活，陰雨天用室內(nèi)燈光補光。二、營養(yǎng)成分二、營養(yǎng)成分 植物體內(nèi)至少含有幾十種化學元素，其中大部分元素在植植物體內(nèi)

16、至少含有幾十種化學元素，其中大部分元素在植物體內(nèi)起到一定的生理作用：物體內(nèi)起到一定的生理作用：a a、組成各種化合物，參與機體的建造，成為、組成各種化合物，參與機體的建造，成為結(jié)構物質(zhì)結(jié)構物質(zhì)；b b、構成一些特殊的、構成一些特殊的生理活性物質(zhì)生理活性物質(zhì)，參與活躍的新陳代謝；，參與活躍的新陳代謝；c c、元素之間相互協(xié)調(diào)，以維持、元素之間相互協(xié)調(diào)，以維持離子濃度平衡離子濃度平衡、膠體穩(wěn)、膠體穩(wěn) 定、電荷平衡點等化學方面的作用；定、電荷平衡點等化學方面的作用；d d、發(fā)育方面發(fā)育方面，特定的元素影響植物的形態(tài)發(fā)生和組織、，特定的元素影響植物的形態(tài)發(fā)生和組織、 器官建成。器官建成。Arnon和和

17、Stout（1939）提出的確定植物必需營養(yǎng)元素的）提出的確定植物必需營養(yǎng)元素的3個個標準標準:A、缺乏該元素，、缺乏該元素，植物生育發(fā)生障礙植物生育發(fā)生障礙，不能完成其生活史，不能完成其生活史;B、缺乏該元素，就表現(xiàn)為專一的、缺乏該元素，就表現(xiàn)為專一的病癥病癥，且這種缺素癥可以用補充，且這種缺素癥可以用補充該元素來預防和恢復該元素來預防和恢復;C、該元素在、該元素在植物營養(yǎng)生理上表現(xiàn)直接的效果植物營養(yǎng)生理上表現(xiàn)直接的效果，而不是由于土壤的，而不是由于土壤的物理、化學、微生物條件物理、化學、微生物條件的變化而的變化而產(chǎn)生的間接效果。產(chǎn)生的間接效果。 國內(nèi)外公認的高等植物所必需的營養(yǎng)元素有國內(nèi)外

18、公認的高等植物所必需的營養(yǎng)元素有16（17）種：）種： C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（、（Ni） 在植物中在植物中含量含量差別很大，同一元素在植物不同時期、不同條差別很大，同一元素在植物不同時期、不同條件下含量也不同。件下含量也不同。根據(jù)植物體內(nèi)含量多少，可把這些元素分為根據(jù)植物體內(nèi)含量多少，可把這些元素分為大量營養(yǎng)元素大量營養(yǎng)元素：占干物質(zhì)重量的：占干物質(zhì)重量的0.1%以上以上；C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等等9種種微量營養(yǎng)元素微量營養(yǎng)元素：占干物質(zhì)重量的：占干物質(zhì)重量的0.1%以下，有以下，有的只含的只含0.1mg/kg， Fe

19、、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等等7種種按照國際植物生理協(xié)會的建議：按照國際植物生理協(xié)會的建議： 所需濃度所需濃度 0.5mmol/L 0.5mmol/L的元素為大量元素的元素為大量元素 所需濃度所需濃度 0.5mmol/L 0.5mmol/L的元素為微量元素的元素為微量元素1、大量元素、大量元素N N是蛋白質(zhì)、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、生物堿等的是蛋白質(zhì)、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、生物堿等的組成成分，在植物生命活動中占有重要的位置。組成成分，在植物生命活動中占有重要的位置。 P P是磷脂的主要成分。培養(yǎng)基中常用是磷脂的主要成分。培養(yǎng)基中常用KHKH2 2POPO4 4 、Na

20、HNaH2 2POPO4 4等。等。 K K對碳水化合物合成，轉(zhuǎn)移，以及氮素代謝等有密切關系。對碳水化合物合成，轉(zhuǎn)移，以及氮素代謝等有密切關系。MgMg、S S、CaCa是葉綠素的組成成分，又是激酶的活化劑，對核蛋是葉綠素的組成成分，又是激酶的活化劑，對核蛋白體結(jié)構具有穩(wěn)定作用；白體結(jié)構具有穩(wěn)定作用；S S是含是含S S氨基酸的蛋白質(zhì)的組成成分。氨基酸的蛋白質(zhì)的組成成分。CaCa是構成細胞壁的成分，對細胞分裂，穩(wěn)定質(zhì)膜結(jié)構有顯著作是構成細胞壁的成分，對細胞分裂，穩(wěn)定質(zhì)膜結(jié)構有顯著作用，此外，用，此外，CaCa及鈣調(diào)素在細胞信號轉(zhuǎn)導中起重要作用。及鈣調(diào)素在細胞信號轉(zhuǎn)導中起重要作用。2、微量元素、

21、微量元素 在微量元素中，在微量元素中，鐵鐵的使用最大：的使用最大： 一些氧化酶的組成成分一些氧化酶的組成成分 葉綠素形成的必要條件葉綠素形成的必要條件 使用乙二胺四乙酸鐵（使用乙二胺四乙酸鐵（EDTA-FeEDTA-Fe）鰲合物防止鐵的沉淀）鰲合物防止鐵的沉淀 硼硼與蛋白質(zhì)合成、糖類運輸有著密切的關系與蛋白質(zhì)合成、糖類運輸有著密切的關系 銅銅是某些氧化酶的成分，能夠促進離體根的生是某些氧化酶的成分，能夠促進離體根的生長長 錳錳參與植物的光合、呼吸代謝參與植物的光合、呼吸代謝 鉬鉬參與氮素的代謝參與氮素的代謝 氯氯是光合作用水光解的活化劑是光合作用水光解的活化劑 微量元素的主要作用是作為微量元素

22、的主要作用是作為酶的輔助因子或激酶的輔助因子或激活劑活劑參與代謝的調(diào)節(jié)參與代謝的調(diào)節(jié)。 組織培養(yǎng)的條件組織培養(yǎng)的條件營養(yǎng)條件營養(yǎng)條件（培養(yǎng)基），組織培養(yǎng)的重要基質(zhì)，不同植物的組織（培養(yǎng)基），組織培養(yǎng)的重要基質(zhì)，不同植物的組織對營養(yǎng)有不同的要求，合適培養(yǎng)基才能成功。對營養(yǎng)有不同的要求，合適培養(yǎng)基才能成功。MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基：1962年由年由Murashige和和Skoog為培養(yǎng)煙草細胞設計，為培養(yǎng)煙草細胞設計，無機鹽濃度較高，硝酸鹽含量高，用于無機鹽濃度較高，硝酸鹽含量高，用于植物器官、花藥、細胞植物器官、花藥、細胞的組培，有些培養(yǎng)基是由它演變而來。的組培，有些培養(yǎng)基是由它演變而來。B5培養(yǎng)基培養(yǎng)

23、基：1968年由年由Galmborg為培養(yǎng)大豆為培養(yǎng)大豆根細胞根細胞設計，含有設計，含有較低的銨鹽，適合雙子葉植物、木本植物較低的銨鹽，適合雙子葉植物、木本植物White培養(yǎng)基培養(yǎng)基：1943年由年由White為培養(yǎng)番茄為培養(yǎng)番茄根尖根尖設計，設計，MgSO4、硼鹽濃度高，無機鹽濃度低，適于生根培養(yǎng)。硼鹽濃度高，無機鹽濃度低，適于生根培養(yǎng)。N6培養(yǎng)基培養(yǎng)基：1974年由朱至清為禾谷類年由朱至清為禾谷類花藥培養(yǎng)花藥培養(yǎng)而設計，而設計，KNO3和（和（NH4）2SO4濃度高，適于花藥培養(yǎng)。濃度高，適于花藥培養(yǎng)。KM-8P培養(yǎng)基培養(yǎng)基：1974年為年為原生質(zhì)體培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)而設計，有機成分復雜，而

24、設計，有機成分復雜，包括了所有的單糖及維生素，適于原生質(zhì)體融合培養(yǎng)。包括了所有的單糖及維生素，適于原生質(zhì)體融合培養(yǎng)。培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分主要是成分主要是水、無機鹽、有機物、天然復合物、培養(yǎng)基中的水、無機鹽、有機物、天然復合物、培養(yǎng)基中的凝膠凝膠無機鹽無機鹽：大量元素（大于：大量元素（大于0.5mmol/L的元素）、微量元素。的元素）、微量元素。N：是蛋白、維生素、核酸、磷脂等的組成成分，培養(yǎng)基中有是蛋白、維生素、核酸、磷脂等的組成成分，培養(yǎng)基中有NO3-、NH4+供應形式，如供應形式，如KNO3、NH4NO3、（、（NH4）2SO4等。等。P：磷脂、：磷脂、ATP等的組成成分，常用的有等的組成成分

25、，常用的有KH2PO4、NaH2PO4等等K：與糖類合成、蛋白代謝有關，常以：與糖類合成、蛋白代謝有關，常以KCL、KNO3在培養(yǎng)基中提供在培養(yǎng)基中提供Mg、S、Ca：是葉綠素、酶、細胞壁的組成成分，：是葉綠素、酶、細胞壁的組成成分，MgSO47H2O、CaCL2 7H2O微量元素：微量元素：小于小于0.5mmol/L，F(xiàn)e、Zn、B、Mn、Cu、Mo、Co等；等；FeSO47H2O與與Na2-EDTA配成配成鐵鹽溶液鐵鹽溶液。碳水化合物：碳水化合物：常用的是蔗糖、葡萄糖，常用濃度為常用的是蔗糖、葡萄糖，常用濃度為3%。維生素：維生素：以輔酶的形式參與多種代謝，對生長、分化有促進作用，以輔酶的

26、形式參與多種代謝，對生長、分化有促進作用，VB1（鹽酸硫胺素）、（鹽酸硫胺素）、VB6（鹽酸吡哆醇）、（鹽酸吡哆醇）、VB12、VPP（煙酸）、（煙酸）、VC（抗壞（抗壞血酸）、生物素、葉酸。血酸）、生物素、葉酸。肌醇：肌醇：環(huán)己六醇，參與細胞壁、細胞膜構建，環(huán)己六醇，參與細胞壁、細胞膜構建，100mg/L氨基酸氨基酸-有機氮源，細胞直接吸收，甘氨酸、天冬氨酸、谷酰胺、水有機氮源，細胞直接吸收，甘氨酸、天冬氨酸、谷酰胺、水解乳蛋白（氨基酸混合物）等，解乳蛋白（氨基酸混合物）等，10-1000mg/L天然復合物天然復合物-椰子乳、香蕉、馬鈴薯濾液、酵母提取液、麥芽提取液、椰子乳、香蕉、馬鈴薯濾液

27、、酵母提取液、麥芽提取液、番茄汁等，不易培養(yǎng)時使用。番茄汁等，不易培養(yǎng)時使用。植物激素植物激素-培養(yǎng)基的關鍵物質(zhì)，生長素類（培養(yǎng)基的關鍵物質(zhì)，生長素類（IAA、NAA、IBA、2,4-D；細胞分裂素（細胞分裂素（6-BA、KT、ZT）；赤霉素（）；赤霉素（GA3）生長素生長素/細胞分裂素細胞分裂素：高：高利于根、愈傷組織形成；適中利于根、愈傷組織形成；適中利于根、芽利于根、芽分化；低分化；低利于芽的形成利于芽的形成培養(yǎng)基的支持物培養(yǎng)基的支持物瓊脂（固體培養(yǎng)時的固化劑，低于瓊脂（固體培養(yǎng)時的固化劑，低于40度為凝度為凝膠，膠，6-10g/L），玻璃纖維、濾紙橋、海綿、脫脂棉、卡拉膠等，），玻璃纖

28、維、濾紙橋、海綿、脫脂棉、卡拉膠等，總的要求是降低培養(yǎng)材料產(chǎn)生的有害物影響總的要求是降低培養(yǎng)材料產(chǎn)生的有害物影響抗生素抗生素-卡那霉素、頭孢、青霉素、鏈霉素、慶大霉素等，卡那霉素、頭孢、青霉素、鏈霉素、慶大霉素等，5-20mg/L，防止菌類污染。，防止菌類污染?；钚蕴炕钚蕴?吸附培養(yǎng)基中的雜質(zhì)、酚、醌類、滅菌副產(chǎn)物等，吸附培養(yǎng)基中的雜質(zhì)、酚、醌類、滅菌副產(chǎn)物等，0.5-10g/L 缺鐵癥狀缺鐵癥狀：葉面呈綠色網(wǎng)紋狀失綠。隨病勢發(fā)展，：葉面呈綠色網(wǎng)紋狀失綠。隨病勢發(fā)展，葉片失綠程度加重，出現(xiàn)整葉變?yōu)榘咨?，葉緣枯焦，葉片失綠程度加重，出現(xiàn)整葉變?yōu)榘咨?，葉緣枯焦，引起落葉。嚴重缺鐵時，新梢頂端枯死。引起落葉。嚴重缺鐵時，新梢頂端枯死。 桃樹桃樹缺銅癥狀：缺銅癥狀： 新梢頂端葉片的葉尖失綠新梢頂端葉片的葉尖失綠變黃，葉片出現(xiàn)褐色變黃，葉片出現(xiàn)褐色斑點，斑點，擴