組織培養(yǎng)復(fù)習(xí)題

1、細(xì)胞全能型：植物器官培養(yǎng)：愈傷組織培養(yǎng)：19世紀(jì)30年代，德國(guó)植物學(xué)家施萊登和德國(guó)動(dòng)物學(xué)家施旺創(chuàng)立了細(xì)胞學(xué)說(shuō)，根據(jù)這一學(xué)說(shuō)，如果給細(xì)胞提供和生物體內(nèi)一樣的條件，每個(gè)細(xì)胞都應(yīng)該能夠獨(dú)立生活。1902年，德國(guó)植物學(xué)家哈伯蘭特在細(xì)胞全能性的理論是植物組培的理論基礎(chǔ)。1958年，一個(gè)振奮人心的消息從美國(guó)傳向世界各地，美國(guó)植物學(xué)家斯蒂瓦特等人，用胡蘿卜韌皮部的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，終于得到了完整植株，并且這一植株能夠開(kāi)花結(jié)果，證實(shí)了哈伯蘭特在五十多年前關(guān)于細(xì)胞全能的預(yù)言。植物組培的簡(jiǎn)單過(guò)程如下：剪接植物器官或組織經(jīng)過(guò)脫分化（也叫去分化）形成愈傷組織再經(jīng)過(guò)再分化形成組織或器官經(jīng)過(guò)培養(yǎng)發(fā)育成一顆完整的植株。植物組培

2、的大致過(guò)程是：在無(wú)菌條件下，將植物器官或組織（如芽、莖尖、根尖或花藥）的一部分切下來(lái)，用纖維素酶與果膠酶處理用以去掉細(xì)胞壁，使之露出原生質(zhì)體，然后放在適當(dāng)?shù)娜斯づ囵B(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，這些器官或組織就會(huì)進(jìn)行細(xì)胞分裂，形成新的組織。不過(guò)這種組織沒(méi)有發(fā)生分化，只是一團(tuán)薄壁細(xì)胞，叫做愈傷組織。在適合的光照、溫度和一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與激素等條件下，愈傷組織便開(kāi)始分化，產(chǎn)生出植物的各種器官和組織，進(jìn)而發(fā)育成一棵完整的植株。 植物組織培養(yǎng)即植物無(wú)菌培養(yǎng)技術(shù)，又稱(chēng)離體培養(yǎng)，是根據(jù)植物細(xì)胞具有全能性的理論，利用植物體離體的器官如根、莖、葉、莖尖、花、果實(shí)等）組織（如形成層、表皮、皮層、髓部細(xì)胞、胚乳等）或細(xì)胞（如大孢子

3、、小孢子、體細(xì)胞等）以及原生質(zhì)體,在無(wú)菌和適宜的人工培養(yǎng)基及光照、溫度等人工條件下，能誘導(dǎo)出愈傷組織、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的學(xué)科 編輯本段植物組織的培養(yǎng)培養(yǎng)方法1、非試管微組織快繁 非試管微組織快繁技術(shù)是將外植體（一般要求帶一葉一芽）放置在室內(nèi)外普通沙子培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，利用植物腋芽自然倍增達(dá)到快速繁殖的目的。一般植物715天可以生長(zhǎng)出根系。此技術(shù)投資低，操作環(huán)節(jié)少。 2、試管組織培養(yǎng) 試管組織培養(yǎng)是將外植體（即離體組織、器官或細(xì)胞）放置在組培瓶等器皿中在無(wú)菌的條件下進(jìn)行組織培養(yǎng)獲得組培瓶苗。 培養(yǎng)步驟第一步，將采來(lái)的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細(xì)洗干凈，如用適當(dāng)?shù)乃⒆?/p>

4、等刷洗。把材料切割成適當(dāng)大小，即滅菌容器能放入為宜。置自來(lái)水龍頭下流水沖洗幾分鐘至數(shù)小時(shí)，沖洗時(shí)間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細(xì)小的材料，可裝入紗布袋內(nèi)沖洗。流水沖洗在污染嚴(yán)重時(shí)特別有用。洗時(shí)可加入洗衣粉清洗，然后再用自來(lái)水沖凈洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表面的污物，除去脂質(zhì)性的物質(zhì)，便于滅菌液的直接接觸。當(dāng)然，最理想的清洗物質(zhì)是表面活性物質(zhì)吐溫。 第二步是對(duì)材料的表面浸潤(rùn)滅菌。要在超凈臺(tái)或接種箱內(nèi)完成，準(zhǔn)備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無(wú)菌水、手表等。用70%酒精浸1030秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸濕的作用，加之70%酒精穿透力強(qiáng)，也很易殺傷植物細(xì)胞，所以浸潤(rùn)時(shí)間

5、不能過(guò)長(zhǎng)。有一些特殊的材料，如果實(shí)、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗，多層鱗片的休眠芽等等，以及主要取用內(nèi)部的材料，則可只用70%酒精處理稍長(zhǎng)的時(shí)間。處理完的材料在無(wú)菌條件下，待酒精蒸發(fā)后再剝除外層，取用內(nèi)部材料。 第三步是用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類(lèi)較多，可根據(jù)情況選取12種使用見(jiàn)表。第四步是用無(wú)菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，視采用的消毒液種類(lèi)，涮洗3-l0次左右。無(wú)菌水涮洗作用是免除消毒劑殺傷植物細(xì)胞的副作用注意：酒精滲透性強(qiáng)，幼嫩材料易在酒精中失綠，所以浸泡時(shí)間要短，防止酒精殺死植物細(xì)胞。老熟材料，特別是種子等可以在酒精中浸泡時(shí)間長(zhǎng)一些，如種子可以浸泡5分鐘。升汞的滲透力弱，一般浸泡1

6、0分鐘左右，對(duì)植物材料的殺傷力不大。漂白粉容易導(dǎo)致植物材料失綠，所以對(duì)于幼嫩材料要慎用。在消毒液中加入濃度為0.080.12%的吐溫20或80（一種濕潤(rùn)劑），可以降低植物材料表面的張力，達(dá)到更好的消毒效果。 培養(yǎng)特點(diǎn)1、培養(yǎng)條件可以人為控制 組培采用的植物材料完全是在人為提供的培養(yǎng)基和小氣候環(huán)境條件下進(jìn)行生長(zhǎng)，擺脫了大自然中四季、晝夜的變化以及災(zāi)害性氣候的不利影響，且條件均一，對(duì)植物生長(zhǎng)極為有利，便于穩(wěn)定地進(jìn)行周年培養(yǎng)生產(chǎn)。 2、生長(zhǎng)周期短，繁殖率高 組培是由于人為控制培養(yǎng)條件，根據(jù)不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培養(yǎng)條件，因此生長(zhǎng)較快。另外，植株也比較小，往往20-30天為一個(gè)周期。所

7、以，雖然組培需要一定設(shè)備及能源消耗，但由于植物材料能按幾何級(jí)數(shù)繁殖生產(chǎn)，故總體來(lái)說(shuō)成本低廉，且能及時(shí)提供規(guī)格一致的優(yōu)質(zhì)種苗或脫病毒種苗。 3、管理方便，利于工廠(chǎng)化生產(chǎn)和自動(dòng)化控制 植物組織培養(yǎng)是在一定的場(chǎng)所和環(huán)境下，人為提供一定的溫度、光照、濕度、營(yíng)養(yǎng)、激素等條件，極利于高度集約化和高密度工廠(chǎng)化生產(chǎn)，也利于自動(dòng)化控制生產(chǎn)。它是未來(lái)農(nóng)業(yè)工廠(chǎng)化育苗的發(fā)展方向。它與盆栽、田間栽培等相比省去了中耕除草、澆水施肥、防治病蟲(chóng)等一系列繁雜勞動(dòng)，可以大大節(jié)省人力、物力及田間種植所需要的土地。 培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)1、占用空間小，不受地區(qū)、季節(jié)限制。 2、培養(yǎng)脫毒作物 3、培養(yǎng)周期短 4、可用組培中的愈傷組織制取特殊的生化

8、制品 5、可短時(shí)間大量繁殖，用于拯救瀕危植物 6、可誘導(dǎo)之分化成需要的器官，如根和芽 7、解決有些植物產(chǎn)種子少或無(wú)的難題， 8、不存在變異，可保持原母本的一切遺傳特征 9、投資少，經(jīng)濟(jì)效益高 10、繁殖方式多，試用品種多 培養(yǎng)材料采集要根據(jù)培養(yǎng)目的適當(dāng)選取材料，選擇原則：易于誘導(dǎo)、帶菌少。要選取植物組織內(nèi)部無(wú)菌的材料。這一方面要從健壯的植株上取材料，不要取有傷口的或有病蟲(chóng)的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，決不要在雨天、陰天或露水未干時(shí)取材料。因?yàn)榻训闹仓旰颓缣旃夂虾粑⒌慕M織，有自身消毒作用，這種組織一般是無(wú)菌的。培養(yǎng)材料的消毒 從外界或室內(nèi)選取的植物材料，都不同程度地帶有

9、各種微生物。這些污染源一旦帶人培養(yǎng)基，便會(huì)造成培養(yǎng)基污染。因此，植物材料必須經(jīng)嚴(yán)格的表面滅菌處理，再經(jīng)無(wú)菌操作手續(xù)接到培養(yǎng)基上。 試劑 · 乙醇。 · 吲哚乙酸（ IAA） 或 2 ，4 D （生長(zhǎng)素類(lèi)似物）。 · 氯化汞（升汞）或次氯酸鈉。 · 6- 芐基氨基腺嘌呤（ 6-BA ） · MS 培養(yǎng)基 ·0.1 mol/L NaOH與 0.1 mol/L HCl 配制培養(yǎng)基 （ 1 ）愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基： MS 培養(yǎng)基（蔗糖含量為 10 g/L ， 2,4 D 含量為 2 mg/L ，瓊脂10 g/L ）。 （ 2 ）試驗(yàn)培養(yǎng)基：在

10、MS 培養(yǎng)基中加入 IAA 和 6BA 。 吲哚乙酸（IAA)先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解， 6- 芐基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸餾水稀釋?zhuān)偌尤肱囵B(yǎng)基中。 儀器設(shè)備 培養(yǎng)室，高壓滅菌鍋，水浴鍋，解剖刀，三角燒瓶（ 100mL ），燒杯，量筒，組培瓶，組培蓋或封口膜，棉線(xiàn)，接種箱或超凈工作臺(tái)，分析天平，長(zhǎng)鑷子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮紙。 培養(yǎng)基滅菌 將配好的培養(yǎng)基加入瓊脂加熱溶解，調(diào)至 pH 5.8 ，趁熱分裝于 100 mL組培瓶中，每瓶約 20 mL 。待培養(yǎng)基冷卻凝固后，蓋上組培蓋，或蓋上封口膜并用棉線(xiàn)扎牢，然后在高壓滅菌鍋中 12

11、1 （ 1 kg/cm 2 ）下滅菌 20 min 。取出組培瓶放在臺(tái)子上，冷卻后備用。接種操作所需的一切用具（如長(zhǎng)鑷子、解剖刀、剪刀等）及滅菌水，需同時(shí)滅菌。 編輯本段組織培養(yǎng)分類(lèi)1、胚胎培養(yǎng) 指以從胚珠中分離出來(lái)的成熟或未成熟胚為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。 2、器官培養(yǎng) 指以植物的根、莖、葉、花、果等器官為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng)，如根的根尖和切段，莖的莖尖、莖節(jié)和切段，葉的葉原基、葉片、葉柄、葉鞘和子葉，花器的花瓣、雄蕊（花藥、花絲）、胚珠、子房、果實(shí)等的離體無(wú)菌培養(yǎng)。 3、組織培養(yǎng) 指以分離出植物各部位的組織（如分生組織、形成層、木質(zhì)部、韌皮部、表皮、皮層、胚乳組織、薄壁組織、髓部等），或已誘

12、導(dǎo)的愈傷組織為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。這是狹義的植物組織培養(yǎng)。 4、細(xì)胞培養(yǎng) 指以單個(gè)游離細(xì)胞（如用果酸酶從組織中分離的體細(xì)胞，或花粉細(xì)胞，卵細(xì)胞）為接種體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。 5、原生質(zhì)體培養(yǎng)。 指以除去細(xì)胞壁的原生質(zhì)體為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。植物組織培養(yǎng)試題植物組織培養(yǎng)考試題5 一、名詞解釋?zhuān)海啃☆}3分，共15分）1初代培養(yǎng)基；2脫分化； 3液體培養(yǎng)； 4細(xì)胞全能性；5再分化. 二、填空（每空1分，共40分）1 植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，最常用的培養(yǎng)基是 ，培養(yǎng)基的pH因外植體的來(lái)源不同而異，常用 和 調(diào)節(jié)pH，大多數(shù)植物的pH要求調(diào)節(jié)在 范圍內(nèi)。2 可以通過(guò) 、 、 、 、 等措施預(yù)防褐變的發(fā)生。

13、3 植物組織培養(yǎng)時(shí)，外植體可以是 、 、 、 。 4 應(yīng)用微尖嫁接技術(shù)進(jìn)行脫毒培養(yǎng)無(wú)病毒苗，主要程序?yàn)?。5 組織培養(yǎng)植株的再生途徑有兩條：一是 發(fā)生，另一是 發(fā)生。6 在配制培養(yǎng)基時(shí)，可以在培養(yǎng)基中添加 ，利用其吸附能力，可以降低褐變的發(fā)生，但它對(duì)物質(zhì)的吸附 。 7 培養(yǎng)基的滅菌要求壓力為 、溫度為 、維持時(shí)間為 。8 組織培養(yǎng)中常用的生長(zhǎng)素有吲哆乙酸（IAA），2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D），吲哆丁酸（IBA），萘乙酸（NAA），它們的作用強(qiáng)弱順序?yàn)?> > > 。9. 莖尖微繁殖過(guò)程一般包括五個(gè)階段，即 、 、 、 、 。10莖尖分生組織培養(yǎng)的目的主要是 ，其莖尖一

14、般取 毫米。為了使脫毒效果更好，可以將莖尖分生組織培養(yǎng)與 結(jié)合起來(lái)。脫毒處理的試管苗，在用于生產(chǎn)之前，必須進(jìn)行 。11污染的原因從病源菌上分析主要有兩大類(lèi) 、 。三、判斷正誤，并改錯(cuò)。（每小題2分，共20分）1一般將微量元素母液均配制成10倍，在配制培養(yǎng)基時(shí)，使用量為10ml/L。 細(xì)胞分裂素/生長(zhǎng)素的比值較高時(shí)，有利于愈傷組織的誘導(dǎo)。2 對(duì)于金邊虎尾蘭等遺傳學(xué)上的嵌合體植物，要是組織培養(yǎng)繁殖的植株保持原有的園藝價(jià)值，只能通過(guò)葉培養(yǎng)。3 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)使用不當(dāng)時(shí)，材料也容易褐變，生長(zhǎng)素有刺激多酚氧化酶活性提高的作用。4 利用莖尖分生組織進(jìn)行脫毒培養(yǎng)時(shí)，莖尖外植體大小與脫毒效果成正比。5某些植

15、物通過(guò)愈傷組織培養(yǎng)可以獲得無(wú)病毒苗。6無(wú)病毒植株不具有抗病毒的能力，而且在清除病毒之后，體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)和生理狀況發(fā)生改變，因而對(duì)其他病毒和病原體的侵染更為敏感，因此在種植脫毒苗的一定要隔離種植。7微繁不定芽的產(chǎn)生有兩個(gè)途徑，一是不定芽不通過(guò)愈傷組織由外植體直接產(chǎn)生，二是外植體誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，由愈傷組織上產(chǎn)生不定芽。后一途徑相對(duì)較為優(yōu)越，因?yàn)橥ㄟ^(guò)愈傷組織不會(huì)出現(xiàn)一些突變。8細(xì)胞的全能性，可以通過(guò)分裂細(xì)胞的脫分化和再分化過(guò)程得以體現(xiàn)。9培養(yǎng)基中的鐵鹽，常用不易分解的乙二胺四乙酸鐵螯合物，以防在pH較高時(shí)鐵被氧化為不溶的氫氧化鐵。四、簡(jiǎn)答題：（每小題5分，共15分）1植物生長(zhǎng)物質(zhì)如何調(diào)控外植體形態(tài)發(fā)生？

16、2為什么要對(duì)脫毒苗進(jìn)行多次檢定？3莖尖培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)的目的和取材大小可分為哪幾種類(lèi)型？各有何特點(diǎn)？五、綜述題（每小題10分，共10分）試管苗移栽時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？ 答案5一、名詞解釋?zhuān)海啃☆}3分，共15分）1 初代培養(yǎng)基：是指用來(lái)第一次接種外植體的培養(yǎng)基。2 脫分化：一個(gè)已停止分裂的成熟細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)，并形成未分化的愈傷組織的現(xiàn)象。一個(gè)已停止分裂的成熟細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)，并形成未分化的愈傷組織的現(xiàn)象。3 液體培養(yǎng)：指在進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中不加瓊脂等凝固劑，一般需要通過(guò)振蕩等方法解決培養(yǎng)基的通氣情況。4 細(xì)胞全能性：一個(gè)細(xì)胞能產(chǎn)生一個(gè)完整植株的固有能力，或植物細(xì)胞具有全部的遺傳信息，不論是性

17、細(xì)胞還是體細(xì)胞，在特定環(huán)境下，能進(jìn)行表達(dá)而產(chǎn)生一個(gè)獨(dú)立完整的個(gè)體。5 再分化：愈傷組織形成不定芽或不定根或胚狀體。二、填空（每空1分，共40分）1 MS、HCL、NaOH、5.66.02 適宜外植體、最佳的培養(yǎng)基、連續(xù)轉(zhuǎn)接、加抗氧化劑、加活性炭。3 器官、組織、細(xì)胞、去掉細(xì)胞壁的原生質(zhì)體4 無(wú)菌砧木、莖尖準(zhǔn)備、嫁接、嫁接苗培養(yǎng)、移植5 器官、胚胎6 活性炭、無(wú)選擇性。7 10005000Lx、16h、25±28 2，4-D、NAA、 IBA、IAA9 無(wú)菌外植體的建立、芽的增殖、中間繁殖體的增殖、誘導(dǎo)生根、試管苗的移栽。10 脫毒、0.1 熱處理、病毒檢定11 細(xì)菌、真菌三、判斷正誤

18、，并改錯(cuò)。（每小題2分，共20分）1×一般將微量元素母液均配制成100倍，在配制培養(yǎng)基時(shí)，使用量為10ml/L。2× 細(xì)胞分裂素/生長(zhǎng)素的比值較高時(shí)，有利于愈傷組織芽的誘導(dǎo)。3× 對(duì)于金邊虎尾蘭等遺傳學(xué)上的嵌合體植物，要是組織培養(yǎng)繁殖的植株保持原有的園藝價(jià)值，只能通過(guò)莖尖和側(cè)芽培養(yǎng)。4×植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)使用不當(dāng)時(shí)，材料也容易褐變，細(xì)胞分裂有刺激多酚氧化酶活性提高的作用。5. ×利用莖尖分生組織進(jìn)行脫毒培養(yǎng)時(shí)，莖尖外植體大小與脫毒效果成反比。6.某些植物通過(guò)愈傷組織培養(yǎng)可以獲得無(wú)病毒苗。7.無(wú)病毒植株不具有抗病毒的能力，而且在清除病毒之后，體內(nèi)營(yíng)

19、養(yǎng)和生理狀況發(fā)生改變，因而對(duì)其他病毒和病原體的侵染更為敏感，因此在種植脫毒苗的一定要隔離種植。8. ×微繁不定芽的產(chǎn)生有兩個(gè)途徑，一是不定芽不通過(guò)愈傷組織由外植體直接產(chǎn)生，二是外植體誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，由愈傷組織上產(chǎn)生不定芽。前一途徑相對(duì)較為優(yōu)越，因?yàn)橥ㄟ^(guò)愈傷組織會(huì)出現(xiàn)一些突變。9. 細(xì)胞的全能性，可以通過(guò)成熟細(xì)胞的脫分化和再分化過(guò)程得以體現(xiàn)。10培養(yǎng)基中的鐵鹽，常用不易分解的乙二胺四乙酸鐵螯合物，以防在pH較高時(shí)鐵被氧化為不溶的氫氧化鐵。四、簡(jiǎn)答題：（每小題5分，共15分）1答案要點(diǎn)： 在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，常用的植物激素有生長(zhǎng)素類(lèi)和細(xì)胞分裂素類(lèi)，在高生長(zhǎng)素（如使用高濃度2，4D）時(shí)

20、能促進(jìn)外植體的脫分化，在生長(zhǎng)素 / 細(xì)胞分裂素比值較高時(shí)，促進(jìn)不定根的發(fā)生，比值較低時(shí)促進(jìn)不定芽的發(fā)生。2答案要點(diǎn)：由莖尖分生組織培養(yǎng)獲得的試管苗，經(jīng)第一次擴(kuò)繁后要對(duì)試管苗進(jìn)行病毒檢測(cè)，以確定材料的脫毒情況。因?yàn)閯內(nèi)∏o尖的大小直接關(guān)系到脫毒效果，一船剝?nèi)〉那o尖愈小成苗率愈低，但脫毒率高，而培養(yǎng)的莖尖愈大，成苗率愈高，但脫毒率低。脫毒苗中病毒有可能再次出現(xiàn)，病毒的再現(xiàn)可能有三方面的原因，一是脫毒不徹底，脫毒后試管苗血清檢測(cè)沒(méi)有病毒反映，是因?yàn)橹仓牦w內(nèi)病毒含量非常少，以致檢測(cè)不到，試管苗多次繼代后，病毒逐漸積累，從而再次出現(xiàn)病毒侵染；二是一些弱系病毒或一些暫時(shí)沒(méi)有條件檢測(cè)到的病毒，在強(qiáng)系病毒脫掉后

21、快速繁殖造成危害，三是由于操作及其它一些原因造成的病毒再次侵染。3答案要點(diǎn)：莖尖培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)目的和取材大小可分為莖尖分生組織培養(yǎng)和普通莖尖培養(yǎng)兩種類(lèi)型。莖尖分生組織培養(yǎng)主要是指對(duì)莖尖長(zhǎng)度不超過(guò)0.l mm，最小只有幾十微米的莖尖進(jìn)行培養(yǎng)，這種培養(yǎng)可獲得無(wú)病毒植株。但這樣小的莖點(diǎn)分離實(shí)際上是很困難的，而且成苗時(shí)間也很長(zhǎng)，需要一年乃至更長(zhǎng)的時(shí)間。因此在莖尖分生組織培養(yǎng)中往往采用帶有l(wèi)2個(gè)葉原基的生長(zhǎng)錐進(jìn)行培養(yǎng)。普通莖尖培養(yǎng)是指對(duì)幾毫米乃至幾十毫米長(zhǎng)的莖尖、芽尖及側(cè)芽的培養(yǎng)，這類(lèi)莖尖的培養(yǎng)技術(shù)簡(jiǎn)單，操作方便，莖尖容易成活，成苗所需要的時(shí)間短，能加快繁殖速度。 五、總述題（每小題10分，共10分）答題

22、要點(diǎn)： 1保持試管苗的水分平衡2要選擇合適的基質(zhì)3要防止雜菌滋生4要注意光、溫的管理。 植物組織培養(yǎng)試題 一、名詞解釋1.初代培養(yǎng)：2.再分化： 3.細(xì)胞融合：4.細(xì)胞的全能性：5. 外植體： 6. 花藥培養(yǎng)7.繼代培養(yǎng)8. 體細(xì)胞雜交9. 液體淺置培養(yǎng)10植物組織培養(yǎng)二專(zhuān)用名翻譯（縮寫(xiě)譯成中文名或相反） NAA： 多效唑： BA： 水解乳蛋白： ZT： 水解酪蛋白： KT： 鹽酸硫胺素： IBA： 鹽酸吡哆醇： 三填空 目前植物組織培養(yǎng)的農(nóng)業(yè)應(yīng)用主要是和。 培養(yǎng)基的母液一般是配成和類(lèi)存放備用。 培養(yǎng)基中組成大量元素的鹽類(lèi)分別是和。 組培過(guò)程要進(jìn)行徹底滅茵的是和。 植物組織培養(yǎng)，從接種到商品苗

23、可分為五階段，它們是，和。 一般情況下，細(xì)胞分裂/生長(zhǎng)素的比值高，有利于愈傷組織長(zhǎng)，比值低有利于長(zhǎng)。 組培中不同的植物對(duì)生長(zhǎng)素的敏感性不同 ，雙子葉植物要求的濃度，單子葉植物要求的濃度。 植物組培獲得單倍體植株的方法是進(jìn)行而獲得三倍體的方法是進(jìn)行。 在植物的材料滅菌中，酒精的濃度用，處理時(shí)間一般在范圍，是靠_殺菌的；升汞的濃度一般用，處理的時(shí)間在范圍，升汞是靠_殺菌的；殺菌劑中的次氯酸鈉是靠_殺菌的。10培養(yǎng)植物適宜的溫度大多在，光照強(qiáng)度在，光照時(shí)間在。11、進(jìn)行熱處理植物脫毒的溫度在_左右。12、配制螯合態(tài)鐵鹽需要的成分是_和_。13、培養(yǎng)基中有機(jī)態(tài)N素營(yíng)養(yǎng)主要是­­&#

24、173;­_和_。14、目前認(rèn)為植物組培誘導(dǎo)分化成苗的方式有4種_、_、_和_。15、常用生長(zhǎng)素類(lèi)中作用再?gòu)?qiáng)的是_，細(xì)胞分裂素中作用再?gòu)?qiáng)的是_。16、植物病毒檢測(cè)方法有_、_、_、等幾種。17、減少組培苗變異的主要措施有_、_、_。 四選擇題（單或多項(xiàng)選擇，錯(cuò)或漏選扣分，每題分） 組培材料選擇應(yīng)選以下情況的 A休眠期 B旺盛生長(zhǎng)期 C潮濕天氣 D干燥天氣 植物組培初代接種易污染的可能原因 A材料過(guò)嫩 B材料過(guò)老 C接種材料過(guò)大 D每瓶接種數(shù)量太少3.影響培養(yǎng)基凝固程度因素有_。A瓊脂的質(zhì)量好壞；B 高壓滅菌的時(shí)間；C 高壓滅菌的溫度；D 培養(yǎng)基的PH 愈傷組織不分化、生長(zhǎng)過(guò)旺、疏松，

25、其原因有 A糖的濃度過(guò)高 B培養(yǎng)基的滲透壓過(guò)低 C生長(zhǎng)素和分裂素過(guò)高 D生長(zhǎng)素和分裂素過(guò)低 有一種植物經(jīng)初代培養(yǎng)得到株無(wú)菌苗，以后按每天繼代增殖一次，每次增殖倍數(shù)為倍，一年后繁殖苗有A 3×410株 B 4 × 312株 C × 310株 D× 412株6. 下列不屬于生長(zhǎng)素類(lèi)的植物激素是_。 A BA； B NAA； C ZT； D 2.4D7. 植物組織培養(yǎng)可用于：_。A 快速繁殖；B 脫除病毒；C 提高品質(zhì)；D 育種；E 減少品種變異8、誘導(dǎo)試管苗分化叢芽，培養(yǎng)基的調(diào)整應(yīng)_。 A加大生長(zhǎng)素的濃度 B加大分裂素的濃度 C加活性炭 D 降低鹽的濃度。9

26、. 下列不屬于MS中微量元素的鹽是_。 A NH4NO3；B KNO3；C ZnSO4.7H2O； D MgSO4.7H2O10. 對(duì)生根培養(yǎng)不起作用的激素是：_。 A GA； B IAA； C NAA； D IBA五、判斷題（對(duì)的畫(huà)""；錯(cuò)題畫(huà)"×"，并改正。每題2分，共10分）1. 在MS的培養(yǎng)基成分中，CaCl2·2H2O屬于微量元素。2. 試管苗生長(zhǎng)細(xì)長(zhǎng)有愈生組織化是因?yàn)榧?xì)胞分裂素過(guò)高3. 固體培養(yǎng)基可加進(jìn)活性炭，以利于防止產(chǎn)生褐化。4. 生根培養(yǎng)中加入多效唑可提高生根率。5. 初代接種的材料產(chǎn)生污染只與滅菌的方法有關(guān)與接種材

27、料的大小無(wú)關(guān)。六計(jì)算題(每題5分)1.培養(yǎng)基的配方是1.50.2糖 ，需配400ml，母液的濃度分別是：大量元素10倍，微量元素500倍，鐵鹽50倍，有機(jī)物50倍，1mg/ml，NAA0.1mg/ml，問(wèn)各種母液、糖應(yīng)量稱(chēng)取多少？要配制0.1N的NaOH 500ml，要稱(chēng)取98%的固體NaOH多少克？要配制0.2 N 的HCl 500ml，要量取濃NaCl多少ml？（NaOH分子量40，HCl分子量36.45 ，濃HCl含量38%，比重1.18）七問(wèn)答題(每題10分)1. 試管苗移栽較易死亡，從苗的生理看主要原因有哪些？2.請(qǐng)講述無(wú)菌操作接種的全過(guò)程。3.組培苗產(chǎn)生變異的因素有哪些？應(yīng)采取什么

28、措施減少變異的產(chǎn)生？4細(xì)胞分裂素有哪些生理作用？在組培的初代、繼代生根培養(yǎng)中如何使用？5闡述試管苗煉苗、移栽、管理的一般技術(shù)過(guò)程。6產(chǎn)生褐變的原因有哪些？采取什么措施能防止和減少褐變？一、填空題（每空0.5分，共10分） 1. 植物組織培養(yǎng)按培養(yǎng)對(duì)象分為_(kāi)、_、_、_、_等幾種類(lèi)型。 2. 在分離原生質(zhì)體的酶溶液內(nèi)，需要加入一定量的_其作用是保持原生質(zhì)體膜的穩(wěn)定，避免破裂。 3. 1902年德國(guó)植物生理學(xué)家Haberlandt第一次提出植物_的理論概念；1943年White提出植物細(xì)胞“_”學(xué)說(shuō)，并出版了植物組織培養(yǎng)手冊(cè)，從而使植物組織培養(yǎng)成為一門(mén)新興的學(xué)科。 4. 用烘箱迅速干燥洗凈后的玻璃器皿時(shí)溫度可以設(shè)在_的溫度范圍內(nèi)，而若用它高溫干燥滅菌則需在_的溫度下1-3小時(shí)；烘干植物材料的溫度是_。 5. 細(xì)胞全能性是指植物的每個(gè)細(xì)胞都具有該植物的_和_的 .植物組織培養(yǎng)綜合測(cè)試題（二）一、填空題（每空0.5分，共10分） 1. 植物組織培養(yǎng)按培養(yǎng)的方式分為_(kāi)培養(yǎng)和_培養(yǎng)。 2. 組織培養(yǎng)的特點(diǎn)是：_、_、_