柿葉總黃酮提取工藝的研究

1、柿葉總黃酮提取工藝的研究                   作者：張秀梅 曾祖平 王永紅  【摘要】目的對柿葉中總黃酮的提取工藝進行優(yōu)選。方法采用正交實驗法，以總黃酮含量（· ）為指標(biāo)，對乙醇濃度、溶劑量及提取次數(shù)和時間 種因素進行了研究。結(jié)果將柿葉最粗粉用 倍乙醇提取 次，可以獲得較高的提取率。結(jié)論此工藝有效成分提取率較高，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定可行。 【關(guān)鍵詞】   柿葉 總黃酮 正交實驗

2、 提取工藝Abstract:Objective Methods ， Results Conclusion Key words: ；   ；   ；   柿樹是我國的重要 樹種之一，柿葉為柿樹科落葉喬木植物柿Diospyros kaki 的新鮮或干燥葉片。國內(nèi)外研究表明，柿葉制劑、柿葉茶及柿葉提取物具有降壓、利尿、抑菌、止血、降脂、抑制癌瘤生長等多方面的生理活性。 研究表明，柿葉中的主要有效成分為黃酮類，大多以苷的形式存在，其具有抗急性腦缺血損傷神經(jīng)保護作用，對心血管系統(tǒng)有增加冠脈流量、降低血壓、降低心肌耗氧量、改善全身血液循環(huán)作用，能

3、增加小鼠對窒息性缺氧的耐力，并對大鼠急性心肌缺血有一定的保護作用。此外，柿葉黃酮還有抗氧化清除自由基、抗過敏、保肝2、抗炎、抗菌、抗腫瘤等功能，在防治中老年人腦動脈硬化、預(yù)防腦血栓形成、防治老年人癡呆和其它神經(jīng)退行性疾病、皮膚抗衰老、美容等方面有廣泛的開發(fā)前景3。為了有效利用柿葉所含的黃酮類物質(zhì)，本實驗以總黃酮含量為指標(biāo)，采用正交實驗優(yōu)選了總黃酮最佳提取條件。 1  儀器與試藥   儀器 紫外可見分光光度計（）；傾斜式高速萬能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）； 電子 精密天平（ 儀器上海有限公司）； 電子精密天平（ ）。  試藥實驗用藥材采自北京市昌平區(qū)，落葉晾

4、干，經(jīng)鑒定為柿樹科柿屬柿Diospyros Kaki ；蘆丁對照品（ 中國 藥品生物制品檢定所，批號： ）； · 等均為分析純。 2  方法與結(jié)果   因素水平表乙醇作為提取溶劑，對乙醇濃度、溶劑量及提取次數(shù)和時間 種因素進行考察，每種因素分為 個水平，結(jié)果見表。2.2  供試品溶液的制備精密稱取柿葉最粗粉（ 目之間） 共 份，按照表 （ ）正交實驗設(shè)計方案，用對應(yīng)濃度和體積的乙醇回流提取相應(yīng)次數(shù)和時間?；亓鹘Y(jié)束后合并提取液，放冷，抽濾，濾液轉(zhuǎn)移至 或 量瓶中，分別以其相應(yīng)的提取溶劑定容，過微孔濾膜（ ），作為供試品溶液。表1  正交設(shè)計因素水

5、平（略）表2   L9（34）正交實驗設(shè)計及結(jié)果分析（略）2.3  對照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的蘆丁對照品 于 量瓶中，乙醇超聲溶解，定容至刻度，得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液 · 。2.4  顯色試劑及測定波長的選擇（ ） 顯色法 ：精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液 和供試液、各適量至 量瓶中，分別加入 ，放置 ，然后加入（ ） ，混勻，放置 ，再加入 ，用乙醇定容至刻度，放置 。在 范圍內(nèi)掃描測定吸收光譜。 顯色法 ：精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液 和供試液、各適量至 量瓶中，分別加入 · ，用乙醇定容至刻度，搖勻，放置 。在 范圍內(nèi)掃描測定吸收光譜。 &

6、#160;       比較上述兩種顯色法，用（ ） 顯色后，明顯生成紅色絮狀沉淀，此法不宜采用；而 顯色后，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的 ， 個樣品溶液的 ，故選擇 顯色后 測定吸光度。2.5  顯色穩(wěn)定性考察精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液 和供試液 ，依法顯色后放置不同時間，測定吸光度，結(jié)果見表，吸光度RSD 分別為和，可見蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液和供試液顯色后 內(nèi)基本穩(wěn)定。2.6  線性關(guān)系考察取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液 置 容量瓶中，用乙醇定容至刻度，搖勻，分別取， 置 量瓶中，加入 · ，用乙醇定容至刻度搖勻， 后于 處測定吸光度值，結(jié)果見表。線性回

7、歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線：A × C × ，R ，線性范圍為 。2.7  樣品測定分別取 份供試品溶液適量至 量瓶中，加 · ，用乙醇定容至刻度，搖勻， 后于 處測定吸光度 值，換算為總黃酮含量（· ），如表 所示，極差分析得最佳提取工藝為 ，即乙醇， 倍量，提取 次（， ）。表3  顯色穩(wěn)定性考察（略）表4  蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作（略）2.8  驗證實驗精密稱取柿葉最粗粉（ 目之間） 份， 置于 錐形瓶中，按照 條件提取，合并提取液，放冷，抽濾，濾液轉(zhuǎn)移至 量瓶中，乙醇定容至刻度，過微孔濾膜，測定樣品中總黃酮的含量，結(jié)果見表，其平均值為 · ，RSD ，表明此條件重復(fù)性良好。表5  驗證實驗結(jié)果（略） 3  結(jié)論與討論 3.1  結(jié)論柿葉乙醇提取最佳工藝為 ，即乙醇， 倍量，提取 次（， ）。證樣品中總黃酮平均含量為 · （RSD），表明正交實驗結(jié)果可靠。3.2  討論【參考文獻】 1 郭 玫，董曉萍，徐文萍柿葉的研究概況甘肅中院學(xué)報，（增）：2 譚仁祥植物成分分析北京：