原子吸收分光光度法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、 1目的制訂，規(guī)范。2范圍適用于3責(zé)任3.1 QC檢驗(yàn)人員負(fù)責(zé)對(duì)本規(guī)程的執(zhí)行。3.2 QC主管負(fù)責(zé)對(duì)本規(guī)程的執(zhí)行進(jìn)行監(jiān)督。4定義無(wú)5內(nèi)容5.1簡(jiǎn)介:原子吸收分光光度法由待測(cè)元素?zé)舭l(fā)出的特征譜線通過(guò)供試品蒸氣時(shí)，被蒸氣中待測(cè)元素的基態(tài)原子所吸收，吸收遵循一般分光光度法的吸收定律，通過(guò)測(cè)定輻射光強(qiáng)度減弱的程度可求出供試品中待測(cè)元素的含量。通常借比較標(biāo)準(zhǔn)品和供試品的吸收度，求得樣品中待測(cè)元素的含量。原子吸收分光光度法測(cè)定對(duì)象是成原子狀態(tài)的金屬元素和部分非金屬元素，測(cè)定的樣品一般經(jīng)高溫破壞成原子狀態(tài)，在氣態(tài)下利用自由原子的光譜性質(zhì)進(jìn)行測(cè)量，常用在藥物中無(wú)機(jī)元素的測(cè)定。5.2 儀器原子吸收分光光度法所用

2、儀器為原子吸收分光光度計(jì)，它由光源、原子化器、單色器和檢測(cè)器、記錄顯示系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部件組成。5.2.1光源 通常用待測(cè)元素作為陰極的空心陰極燈，燈的陰極由待分析元素的物質(zhì)構(gòu)成，工作時(shí)使該元素激發(fā)并發(fā)射特征光譜。被測(cè)元素只能用于該元素的空心陰極燈進(jìn)行分析。5.2.2 原子化器常用的原子化器有火焰型、電熱型、氫化物發(fā)生型和冷蒸氣型四種?；鹧嫘驮踊?樣品溶液導(dǎo)入霧化器中使試樣溶液霧化成氣溶膠，并與燃?xì)夂椭細(xì)獬浞只旌虾笤谌紵魃铣苫鹧嫒紵?，不同物質(zhì)所需不同能量使其離子化態(tài)轉(zhuǎn)變成基態(tài)的原子，入射光通過(guò)基態(tài)原子時(shí)部分能量被吸收，并由傳感器轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，用記錄儀進(jìn)行記錄。改變?nèi)細(xì)夂椭細(xì)夥N類及

3、比例可以控制火焰溫度，以提供使供試品轉(zhuǎn)變成原子狀態(tài)所需的能量。常用的混合物氣體為空氣乙炔。電熱型原子化器 又稱無(wú)火焰原子化器，其中又以石墨爐應(yīng)用最廣。石墨爐原子化器為電流控制溫度的爐子，其中放入可置放樣品的石墨管或其他合適的樣品置放裝置。在測(cè)定規(guī)程中爐內(nèi)通過(guò)氬或其他保護(hù)氣體，以防止?fàn)t的氧化。5.2.3單色器 通常用衍射光柵為色散元件。儀器光路應(yīng)能保證有良好的光譜分辨率和相當(dāng)窄的光譜帶（0.2nm）下正常工作的能力。單色器的結(jié)構(gòu)與一般紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)相同。5.2.4檢測(cè)器 一般采用對(duì)紫外及可見(jiàn)光敏感的寬譜帶工作范圍的光電倍增管作為檢測(cè)元件。要求檢測(cè)器的輸出信號(hào)靈敏度高、噪音低、漂移小及穩(wěn)定性好

4、。5.2.5 記錄儀和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 原子吸收分光光度計(jì)常用繪圖打印機(jī)記錄測(cè)定結(jié)果。數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)需能測(cè)量信號(hào)積分值和制備標(biāo)準(zhǔn)曲線及統(tǒng)計(jì)計(jì)算處理。有的儀器將參數(shù)設(shè)定操作系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)放在一起工作。5.2.6背景干擾的消除 。背景吸收干擾是原子吸收測(cè)定中常見(jiàn)的現(xiàn)象，造成背景干擾的原因多種多樣，并往往隨樣品情況的變化而變化。5.2.7原子吸收分光光度計(jì)的的檢定5.2.7.1波長(zhǎng)準(zhǔn)確度與重復(fù)性 根據(jù)中華人民共和國(guó)國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程JJG694-90的規(guī)定，雙光束原子吸收分光光度計(jì)波長(zhǎng)示值誤差應(yīng)不大于0.5mm，波長(zhǎng)重復(fù)性優(yōu)于0.3mm。波長(zhǎng)準(zhǔn)確度與重復(fù)性檢定方法 按空心陰極燈上規(guī)定的工作電流，將汞燈點(diǎn)

5、亮穩(wěn)定后，在光譜帶寬0.2mm條件下，從汞、氖譜線253.7、365.0、435.8、546.1、640.2、724.5和871.6nm中按均勻分布原則，選取35條逐一作三次單向（從短波長(zhǎng)向長(zhǎng)波長(zhǎng)方向）測(cè)量最大能量波長(zhǎng)示值，計(jì)算譜線波長(zhǎng)測(cè)量值與標(biāo)準(zhǔn)值的平均誤差，波長(zhǎng)重復(fù)性為3次測(cè)定中最大值與最小值之差。5.2.7.2分辨率 儀器光譜帶寬為0.2nm時(shí)，應(yīng)可分辨錳279.5nm和279.8nm的雙線。5.2.7.2.1 分辨率檢定方法 將錳燈點(diǎn)亮，穩(wěn)定后在光譜帶寬為0.2nm時(shí)調(diào)節(jié)光電倍增管的高壓，使279.5nm譜線能量讀數(shù)為100.掃描測(cè)量錳雙線。應(yīng)能分辨出279.5nm和279.8nm兩條

6、譜線，且兩線間峰谷能量應(yīng)不超過(guò)40%。5.2.7.3基線穩(wěn)定性 火焰原子化法測(cè)定30min內(nèi)靜態(tài)基線和點(diǎn)火基線的穩(wěn)定度，應(yīng)不大于下表的指標(biāo)。5.2.7.3.1基線穩(wěn)定性檢定方法靜態(tài)穩(wěn)定性的測(cè)定 光譜帶寬0.2nm、量程擴(kuò)展10倍，點(diǎn)亮銅燈，原子化器未工作狀態(tài)下測(cè)定。單光束儀器與銅燈同時(shí)預(yù)熱30min、銅燈預(yù)熱3min后，按按上述相同條件測(cè)定。點(diǎn)火基線穩(wěn)定性的測(cè)定 按測(cè)銅的最佳條件，用乙炔/空氣火焰，吸噴去離子水10min后，在吸噴狀況下重復(fù) 的測(cè)量。5.2.7.4邊緣波長(zhǎng)能量 帶寬為0.2nm，響應(yīng)時(shí)間不大于1.5s條件下，對(duì)砷193.7nm和銫852.1nm譜線進(jìn)行測(cè)量，譜線的峰值應(yīng)能調(diào)到1

7、00%，背景值/峰值應(yīng)不大于2%。5min內(nèi)譜線的最大瞬時(shí)噪聲（峰-峰）應(yīng)不大于0.03A，譜線能量為100%時(shí)，光電倍增管的高壓應(yīng)不超過(guò)最大高壓值的85%。5.2.7.5火焰法測(cè)定銅的檢出限（CL(n=3）)和精密度（RSD）使用中的儀器應(yīng)分別不大于0.02g/ml和1.5%。5.2.7.5.1檢出限的檢定 儀器參數(shù)調(diào)至最佳工作狀態(tài)，用空白溶液0.5mol/LHNO3調(diào)零，分別對(duì)3種銅標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.50、1.00、3.00g/ml）各進(jìn)行3次重復(fù)測(cè)定，取3次測(cè)定平均值，按線性回歸法求出工作曲線的斜率，即為儀器測(cè)定銅的靈敏度（S）。S=dAdcA(g/ml)在上述條件下，擴(kuò)展標(biāo)尺10倍，對(duì)空白

8、溶液（或濃度3倍于檢出限的溶液）進(jìn)行11次吸光度測(cè)量，并求出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（SA），計(jì)算銅的檢出限如下CL(n=3)=3SA/S（g/ml）5.2.7.5.2精密度的檢定 在上一項(xiàng)測(cè)定中選擇標(biāo)準(zhǔn)溶液之一，其吸光度在0.10.3范圍進(jìn)行7次測(cè)定，求出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），即為儀器測(cè)銅的精密度。 5.2.7.6石墨爐法測(cè)定鎘的檢出限（QL（n=3），特征量（C,M.）和精密度（RSD），使用中的儀器應(yīng)分別不大于4pg、2pg和7%。5.2.7.6.1 檢出限和特征量的檢定 儀器參數(shù)調(diào)至最佳工作狀態(tài)，分別對(duì)空白溶液（0.5mol/LHNO3）和3種鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.50、1.00、3.00g/ml）各

9、進(jìn)行3次重復(fù)測(cè)定，取3次測(cè)定平均值后，按線性回歸法求出工作曲線的斜率，即為儀器測(cè)定鎘的靈敏度（S）。S=dA/dQ= dA/d（cV）(A /pg)式中 C為溶液濃度（ng/ml）; V為取樣體積（l）。上述條件下對(duì)空白溶液進(jìn)行11次吸光度測(cè)定，并求出其標(biāo)準(zhǔn)偏差（SA）。計(jì)算鎘的檢出限如下QL（n=3）=3SA/S(g)儀器測(cè)定鎘的特征量計(jì)算如下CM=0.004/S(pg)5.2.7.6.2精密度的檢定 在（2.6.1）測(cè)定中，對(duì)3.00ng/ml的鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行了7次重復(fù)測(cè)定，即為儀器測(cè)鎘的精密度。5.2.7.7火焰法中樣品溶液吸噴量（F）和表觀霧化率（） 應(yīng)用本法可測(cè)定火焰原子化霧化的效率

10、，樣品的吸噴量應(yīng)小于3ml/min；霧化率應(yīng)不小于8%。5.2.7.7.1吸噴量和表觀霧化率的檢定 在與2，5相同條件下，于10ml量筒內(nèi)注入去離子水至10ml刻線，將毛細(xì)管插入筒底部，同時(shí)啟動(dòng)秒表，測(cè)量1min時(shí)間內(nèi)量筒中水所減少的體積，即為吸噴量（F），取出進(jìn)樣毛細(xì)管，至廢液管出口無(wú)廢液排出，將該管放入有一段水封的10ml量筒（量筒內(nèi)）。另一量筒（量筒2）內(nèi)注入10ml水，在上述條件下將毛細(xì)管插入水中，至10ml水全部系噴完畢，廢液管中無(wú)廢液排出后，測(cè)量排出廢液體積V(ml)，并計(jì)算表觀霧化率（）。=（10-V）/10100%5.2.7.8背景校正能力 背景信號(hào)約為1A時(shí)，校正后的信號(hào)應(yīng)不

11、大于該值的1/30。5.2.7.8.1火焰原子化器的儀器在鎘228.8nm時(shí)先用無(wú)背景校正方式測(cè)量，調(diào)零后將吸光度約為1A的屏網(wǎng)插入光路讀得吸光度A1；再在背景校正方式調(diào)零，插入網(wǎng)讀取吸光度A2，A1/A2值應(yīng)符合2.8規(guī)定。5.2.7.8.2石墨爐原子化器的儀器參數(shù)調(diào)至測(cè)鎘的最佳狀態(tài)，先用無(wú)背景校正方式，用移液管加入一定量的氯化鈉（5.0mg/ml）溶液使產(chǎn)生1A左右吸光度信號(hào)，讀取吸光度（峰高法）A1，再用有背景校正方式全樣測(cè)定，讀取吸光度A2，的值應(yīng)符合5.2.7.8的規(guī)定。5.3樣品測(cè)定操作方法5.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線法 先配制一個(gè)被測(cè)元素的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，通常可用該元素的基準(zhǔn)化合物或純金屬按規(guī)

12、定方法配制，亦可從有關(guān)單位中購(gòu)得，用通常用作空白的溶液稀釋成標(biāo)準(zhǔn)工作液。再按測(cè)定方法的操作步驟配制一組合適的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。在儀器推薦的濃度范圍內(nèi)，制備含待測(cè)元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液至少3份，濃度依次遞增，并分別加入供試品溶液配制中相應(yīng)的試劑。除另有規(guī)定外，一般用去離子水制成水溶液。將儀器按規(guī)定啟動(dòng)后，先將去離子水噴入火焰，調(diào)讀數(shù)為零，再將最濃的標(biāo)準(zhǔn)溶液噴入火焰，調(diào)節(jié)儀器至滿量程的讀數(shù)，然后依次噴入每一標(biāo)準(zhǔn)溶液，讀數(shù)。每噴完1份溶液后，均用去離子水噴入火焰充分沖洗燈頭并調(diào)零。取每一濃度3次讀數(shù)的平均值，與相應(yīng)濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。按各品種項(xiàng)下的規(guī)定制備供試品溶液，使待測(cè)元素的估計(jì)濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍內(nèi)，將供試

13、品溶液噴入火焰，取3次讀數(shù)的平均值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)濃度，計(jì)算元素的含量。供試品溶液測(cè)定完后，應(yīng)用與供試品溶液濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回校。標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)取符合線性范圍的濃度。樣品的測(cè)定讀數(shù)宜在線性范圍中間或稍高處。 石墨爐原子化器的標(biāo)準(zhǔn)曲線可以用相同體積不同濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液或用相同濃度不同體積的標(biāo)準(zhǔn)液制備，一般以前者為佳。5.3.2標(biāo)準(zhǔn)加入法 取同體積按各品種項(xiàng)下規(guī)定制備的供試品溶液4份，分別加至4個(gè)同體積的量瓶中，除(1)號(hào)瓶外，其他(2)、(3)、(4)號(hào)量瓶分別再準(zhǔn)確加入比例量的待測(cè)元素標(biāo)準(zhǔn)液，均用去離子水稀釋至刻度，形成標(biāo)準(zhǔn)溶液加入量從零開(kāi)始遞增的一系列溶液。按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線法自“將儀

14、器按規(guī)定啟動(dòng)后操作，并依法將溶液噴入火焰，讀數(shù)；將讀數(shù)與相應(yīng)的待測(cè)元素加入量作圖，延長(zhǎng)此直線至與含量軸的延長(zhǎng)線相交，此焦點(diǎn)與原點(diǎn)的距離即相當(dāng)與供試品溶液取用量中待測(cè)元素的含量（如圖）。再以此計(jì)算供試品中待測(cè)元素的含量。標(biāo)準(zhǔn)加入法僅適用于上述標(biāo)準(zhǔn)曲線法的工作曲線呈線性并通過(guò)原點(diǎn)的情況。5.3.3雜質(zhì)檢查法取供試品，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，制備供試品溶液；另取等量的供試品，加入限度量的待測(cè)元素溶液，制備成對(duì)照溶液。照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線法自“將儀器按規(guī)定啟動(dòng)后”操作，并將對(duì)照溶液噴入火焰,調(diào)節(jié)儀器使具合適的讀數(shù)(a)；在相同的操作條件下噴入供試品溶液，讀數(shù)(b)；b值應(yīng)小于(a-b)。內(nèi)標(biāo)法 在標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試

15、品中分別加入第二元素作為內(nèi)標(biāo)元素。測(cè)定分析元素和內(nèi)標(biāo)譜線的吸光度比值，并以此對(duì)被測(cè)元素的含量或濃度繪制工作曲線。內(nèi)標(biāo)元素要求與被測(cè)元素在基本或原子化器中表現(xiàn)的物理、化學(xué)性質(zhì)相同或相似。且試樣中不應(yīng)含有這種元素。該方法只適用于于雙通道原子吸收分光光度計(jì)。5.4測(cè)量操作注意事項(xiàng)5.4.1樣品取樣要有代表性，取樣量應(yīng)根據(jù)被測(cè)元素的性質(zhì)、含量、分析方法及要求的分析精度決定。標(biāo)準(zhǔn)樣品的組成應(yīng)盡可能與被測(cè)樣品接近。5.4.2儀器參數(shù)選擇如空心陰極燈工作電流、光譜帶寬、原子化條件等。火焰原子化器中火焰條件的選擇如火焰類型，燃?xì)夂椭細(xì)獾谋壤?，供氣壓力和氣體流量等。石墨爐原子化器應(yīng)注意干燥-灰化-原子化各階段

16、的溫度、時(shí)間、升溫情況等程序的合理編制。它們對(duì)測(cè)定的靈敏度、檢出限及分析精度等都有很大影響。許多儀器一般能提示或自動(dòng)調(diào)節(jié)成常用的參數(shù)，使用時(shí)可按實(shí)驗(yàn)情況予以修改。5.4.3原子吸收分管光度法實(shí)驗(yàn)室要求有合適的環(huán)境，室內(nèi)應(yīng)保持空氣潔凈，減少灰塵，應(yīng)有充足、壓力恒定的水源，儀器燃燒器上方應(yīng)有符合廠方要求的排氣罩，應(yīng)能提供足夠而恒定的排氣量，排氣速度應(yīng)能調(diào)節(jié)。排氣罩以耐腐蝕、不生銹的金屬板制造為宜。使用原子吸收分光光度計(jì)時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)室安全應(yīng)予特別主語(yǔ)，如排氣通風(fēng)是否良好，突然停電、停水或不穩(wěn)定時(shí)的安全措施，高壓燃?xì)夂椭細(xì)馐褂冒踩珕?wèn)題等。目前儀器本身大多具有自動(dòng)安全功能，發(fā)現(xiàn)故障后一般自動(dòng)停止工作。但實(shí)

17、驗(yàn)室環(huán)境的安全仍需使用者隨時(shí)注意。5.4.4 原子吸收分光光度法靈敏度很高，極易受實(shí)驗(yàn)室各種用品的污染，常見(jiàn)的污染源如下5.4.4.1 水 應(yīng)用去離子水或用石英蒸餾器蒸餾的超純水。鈉鉀鎂硅鐵等元素最易沾污實(shí)驗(yàn)室水。貯藏水的容器一般用聚乙烯塑料等材料制成。玻璃瓶久貯會(huì)將瓶中微量污染元素溶解在水中。5.4.4.2 試劑 制備樣品用的酸類、溶劑及有機(jī)萃取劑等亦為主要玷污來(lái)源之一，應(yīng)采用高純?cè)噭?.4.4.3 實(shí)驗(yàn)室容量器皿燒杯、容量瓶、移液管等的盡可能使用耐腐蝕塑料器皿，而不用玻璃，因?yàn)椴Ａ髅笠孜交蛭掌渌饘匐x子，在使用過(guò)程中緩緩釋出。自動(dòng)進(jìn)樣器應(yīng)盡量不用能直接接觸樣品的金屬附件及金屬針頭。

18、樣品前處理用的通風(fēng)廚可能有積塵、銹蝕物或粉塵、氣流等影響。大氣中塵埃的污染特別對(duì)石墨爐的高靈敏度檢測(cè)有很大影響。樣品處理過(guò)程及處理完后分析時(shí)應(yīng)盡可能防止外界塵埃落入，產(chǎn)生干擾。5.4.5標(biāo)準(zhǔn)溶液一般濃度大于1000g/ml的可以作為貯備液貯存在耐腐蝕的塑料容器中，濃度低于10g/ml的工作溶液應(yīng)注意稀釋溶劑及試劑對(duì)其污染的影響，濃度低于1g/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)在使用當(dāng)天配制使用，不宜貯存。5.4.6 樣品一般處理成溶液后進(jìn)行分析，因此樣品的前處理十分重要。處理方法很多，無(wú)機(jī)物常用酸進(jìn)行溶解，復(fù)雜基體的樣品常需用熔融、有機(jī)萃取、加入改進(jìn)劑等方法消除基體干擾及化學(xué)干擾等因素。生物樣品往往須經(jīng)濕法或干法灰化，萃取或加基體改進(jìn)劑消除基體干擾等措施以使分析順利進(jìn)行。石墨爐的樣品測(cè)試可以采用固體直接放在石墨管或石墨平面中進(jìn)行。難以避免的干擾有時(shí)可用掩蔽劑消除。5.4.7 石墨爐的分析重現(xiàn)性及精度的關(guān)鍵操作之一為進(jìn)樣方法的重現(xiàn)性。從石墨爐的小孔中加入樣品時(shí)，除石墨爐周?chē)h(huán)境升溫情況需要保持一致外，用微量吸管加入的角度、深度等均須一致，因此使用石墨爐分析樣品最好用重現(xiàn)性好、可靠的自動(dòng)進(jìn)樣器，手工進(jìn)樣欲得重現(xiàn)的結(jié)果需要較高而熟練的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。5.4.8 原子化溫度較高的元素宜用氧化亞氮-乙炔作為燃?xì)猓撉闆r下以用無(wú)焰法石墨爐進(jìn)行