維生素B2對(duì)五氟尿嘧啶抗結(jié)腸腫瘤活性的影響

1、維生素B_2對(duì)五氟尿嚅咤抗結(jié)腸腫瘤活性的影響由于現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快、飲食習(xí)慣的改變,結(jié)腸癌在我國(guó)的發(fā)病率逐年升高并且向低齡化發(fā)展。結(jié)腸癌的死亡率較高僅次于常見的肺癌和肝癌,五氟尿嘧啶(5-fuorouracil,5-FU)是常用的治療藥物之一。但是,臨床數(shù)據(jù)表明,單獨(dú)使用5-FU治療中晚期結(jié)腸癌患者成功率僅為10%-15%同時(shí)還會(huì)伴隨產(chǎn)生耐藥性和較強(qiáng)的毒副作用。為了提高藥物治療效果,近年來(lái)將藥物與活性物質(zhì)聯(lián)用已成為研究的一個(gè)熱點(diǎn)方向。維生素,食物來(lái)源廣泛,作為人體生命活動(dòng)必不可少的物質(zhì)之一,承擔(dān)多樣的生理功能,近來(lái)研究表明其具有潛在的抗癌性。而臨床上,癌癥患者膳食補(bǔ)充維生素又是一個(gè)比較普遍的現(xiàn)

2、象。因此本實(shí)驗(yàn)將常見的14種維生素與5-FU聯(lián)用探究其對(duì)5-FU抗結(jié)腸腫瘤活性的影響,并篩選出具有提高5-FU療效潛力的維生素,通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探究其能否協(xié)同5-FU抑制結(jié)腸腫瘤活性,從而減少5-FU用量、緩解其毒副作用,為臨床上給予結(jié)腸癌患者科學(xué)的飲食建議提供理論依據(jù)。主要得到以下結(jié)果:(1)14種維生素對(duì)5-FU在兩種結(jié)腸癌細(xì)胞中細(xì)胞毒性作用影響比較采用MTTM胞增殖毒性試驗(yàn),比較三種濃度下14種維生素(VB₁、VB₂、VB₃、VB<sub>5

3、</sub>、VB₆、VB₉、VC、DL-a硫辛酸、VEVD<sub>3</subxVK<sub>1</subxGSHVB<sub>12</subx生物素)單獨(dú)以及聯(lián)合5-FU對(duì)兩種類型2腸癌細(xì)胞HCT11劭及C26的生長(zhǎng)、增殖的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),5-FU對(duì)C26和HCT116M月fiIC₅₀(半數(shù)致死濃度)分別為1.13±0.80叱mol/L和15.20±2.28叱mol/

4、L。三種濃度下14種維生素與IC₅₀濃度的5-FU復(fù)配后,在C26和HCT116ffl胞毒性試驗(yàn)中,VB₂是單獨(dú)和聯(lián)用后抑制率均最高的。故選取VB₂與5-FU聯(lián)用進(jìn)行后續(xù)體內(nèi)外抗月中瘤活性實(shí)驗(yàn)。（2）維生素B₂與5-FU體外抗結(jié)腸月中瘤活性的聯(lián)用效應(yīng)采用Chou-TalalayMethod法定量評(píng)價(jià)維生素與5-FU聯(lián)用對(duì)細(xì)胞抗結(jié)腸腫瘤活性的影響。通過(guò)CompuSy軟件和細(xì)胞毒性試驗(yàn)2果得到維生素與5-FU相對(duì)HC

5、T11吸C26細(xì)胞的聯(lián)用指數(shù)（CI）（CI=1加和作用；CI&lt;1協(xié)同作用；CI&gt;1拮抗作用）以及二者最佳濃度配比。結(jié)果發(fā)現(xiàn),5-FU與VB<sub>2</sub岷用，對(duì)C26HCT116細(xì)胞抑制率為50%、75%及90%時(shí),對(duì)應(yīng)的CI值分別為0.52、0.26、0.13及0.91、0.77、0.68,CI值均小于1因而二者聯(lián)用具有協(xié)同效應(yīng)，并確定二者對(duì)C26以及HCT116a胞的最佳濃度比分別為1:20和1:2。（3）維生素B₂與5-FU聯(lián)用對(duì)其體內(nèi)抗結(jié)腸月中瘤活性的影響采用Balb/c結(jié)腸癌荷瘤小鼠模

6、型觀察維生素與5-FU聯(lián)用對(duì)5-FU抗小鼠結(jié)腸腫瘤活性的影響。通過(guò)檢測(cè)不同藥物處理后荷瘤小鼠的瘤體積、瘤體比指數(shù)、抑瘤率、肝脾指數(shù)的變化探究藥物聯(lián)用對(duì)小鼠腫瘤生長(zhǎng)和免疫功能的影響,并采用Elisa酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠血液中炎癥因子水平的變化探究聯(lián)用對(duì)小鼠免疫及炎癥水平的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),5-FU與VB₂®用后小鼠月中瘤抑制率從51.53土2.32%提高至76.18±4.37%;瘤體比指數(shù)從0.16±0.03下降為0.07±0.01,且差異均具有顯著性（p&lt;0.001）;脾臟指數(shù)聯(lián)用組與5-FU

7、單用組相比顯著降低;肝腎指數(shù)以及血尿尿素氮和血漿肌酐含量各組并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;與5-FU治療組血液尿酸含量108.50±18.66叱mol/L相比，聯(lián)用組尿酸含量?jī)H為59.75±11.51叱mol/L,顯著下降(p&lt；0.001);與VB<sub>2</sub源用后,5-FU組小鼠血液炎癥因子白介素1(IL-1)、白介素3(IL-3)、月中瘤壞死因子(TNF-a)水平降低。(4)維生素B₂影響5-FU抗月中瘤活性的分子機(jī)制采用細(xì)胞流式PI單染實(shí)驗(yàn)檢測(cè)維生素與5-FU聯(lián)用對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HCT11劭及C26

8、的周期影響，并采用蛋白免疫印跡方法檢測(cè)二者聯(lián)用對(duì)細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單用5-FU或VB₂土勻使PARP5白發(fā)生切割，但聯(lián)用組切割條帶增強(qiáng)顯著，同時(shí)聯(lián)用后引起LC3B蛋白上調(diào)，Bad蛋白表達(dá)增加，p53蛋白磷酸化誘導(dǎo)下游周期蛋白p21蛋白上調(diào),促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡。周期實(shí)驗(yàn),在C26細(xì)胞中聯(lián)用組G₁ffl比例為75.12±4.90%較5-FU單用組64.02±2.54%明顯提高，而在HCT11住田胞中G₁ffi比例從61.09±0.15%±升至U70.44±0.75%,且差異具有顯著性(p&lt;0.001)。因此本文的結(jié)果表明不同維生素對(duì)5-FU的抗結(jié)腸腫瘤活性具有影響,其中VB<sub>2</subt5-FU抗月中瘤活性影響顯著。VB<sub>2</sub內(nèi)5-FU聯(lián)用能通過(guò)增強(qiáng)5-FU促凋亡、自噬作用引起細(xì)胞G₁期阻滯從而協(xié)同降低C26和H