從土壤中分離純化微生物

1、微生物分離與觀察微生物分離與觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛢?nèi)容n熟悉常用微生物培養(yǎng)基名稱;n掌握微生物的分離,接種技術(shù);n用平板劃線法和稀釋法分離微生物;n認(rèn)識(shí)微生物存在的普遍性;實(shí)驗(yàn)原理n從土壤中分離純化微生物n土壤中混雜著大量的微生物,從里面分離,得到只含有這一種微生物的純培養(yǎng);n根據(jù)某微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng),溫度,氧氣等條件要求不同而供給它適宜的培養(yǎng)條件,或加入某種抑制劑造成只利于該菌生長(zhǎng),而抑制其他菌生長(zhǎng);n用稀釋涂布平板法或稀釋后平板劃線分離,純化;實(shí)驗(yàn)儀器,材料和用具n實(shí)驗(yàn)材料:n菌源:土樣10g;n培養(yǎng)基:n牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基;n實(shí)驗(yàn)儀器:n取液器(5000 ul, 1000ul, 200ul 個(gè)一支);

2、n培養(yǎng)箱,搖床實(shí)驗(yàn)儀器,材料和用具n實(shí)驗(yàn)試劑:n1N NaOH, 1N HCl, n0.9% 無(wú)菌生理鹽水;n250ml三角瓶中99ml,每瓶加20粒玻璃珠;n250ml三角瓶中50ml,作10倍稀釋用;實(shí)驗(yàn)儀器,材料和用具n實(shí)驗(yàn)用具:n平皿35個(gè);n無(wú)菌有帽試管7只;n無(wú)菌涂棒2根;n無(wú)菌5000ul, 1000ul, 200ul 吸頭各3個(gè);n記號(hào)筆,酒精燈;n試管架;實(shí)驗(yàn)步驟周圍環(huán)境中微生物的觀察n在牛肉蛋白胨平板上作如下實(shí)驗(yàn)：n分別用未洗過(guò)的手指頭,用肥皂洗過(guò)的手指頭(不用毛巾擦)在平板是涂抹（用力一致）;n用正在使用的毛巾,舊紙幣在培養(yǎng)基上拖動(dòng);n放置一根頭發(fā);n用無(wú)菌接種環(huán)分別沾一

3、環(huán)自來(lái)水和河水在平板 上劃線；n用無(wú)菌牙簽取一點(diǎn)牙垢在培養(yǎng)基上劃線；n打開(kāi)培養(yǎng)皿置實(shí)驗(yàn)臺(tái)上（空氣中）10min;n按無(wú)菌操作要求在酒精燈火焰邊打開(kāi)皿蓋1min.n對(duì)著培養(yǎng)皿上的培養(yǎng)基咳嗽。n稍稍打開(kāi)嘴唇壓在培養(yǎng)基上;n以上用報(bào)紙包好倒置350C培養(yǎng)箱里培養(yǎng)48小時(shí)觀察結(jié)果;實(shí)驗(yàn)步驟從土壤中分離微生物n采土樣:n選擇肥沃土壤,去表層土,挖520cm深度的土壤數(shù)10g,裝入已滅菌的牛皮紙袋,封好袋口,帶回實(shí)驗(yàn)室;n倒平板;實(shí)驗(yàn)步驟從土壤中分離微生物n制備土壤稀釋液;n稱取土樣1.0g， 放入盛99ml無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中，置搖床振蕩5min使土壤均勻分散成為土壤懸液（10-2）。用1ml的

4、無(wú)菌吸頭從中吸取0.5ml土壤懸液，注入事先分裝有4.5ml無(wú)菌水的試管中，吹吸3次，振蕩均勻（10-3）。然后同樣方法，配置成稀釋度為10-4，10-5，10-6的土壤溶液；實(shí)驗(yàn)步驟從土壤中分離微生物n涂布n用一支新的無(wú)菌吸頭，分別由各濃度土壤稀釋液中各吸取100ul，對(duì)號(hào)較均勻地放入已寫(xiě)好稀釋度的牛肉蛋白胨培養(yǎng)基平板上，用無(wú)菌玻璃涂棒涂勻。每個(gè)濃度做2個(gè)平板。實(shí)驗(yàn)步驟從土壤中分離微生物n培養(yǎng)n將牛肉蛋白胨培養(yǎng)基平板倒置于370C溫箱中培養(yǎng)24h；統(tǒng)計(jì)所長(zhǎng)出的菌落數(shù)；n挑菌（不做）n將培養(yǎng)后所需要的單個(gè)菌落（要求是細(xì)菌菌落）分別挑取劃線于平板上， 370C培養(yǎng)48h檢查菌落是否單純，也可以用

5、顯微鏡涂片染色鏡檢是否是單一的微生物；實(shí)驗(yàn)步驟從土壤中分離微生物n菌落計(jì)數(shù)n計(jì)算相同稀釋度的平均菌落數(shù):n 有較大片菌苔生長(zhǎng)時(shí),棄用,以無(wú)片菌苔生長(zhǎng)的平皿計(jì)數(shù);n 若成片菌苔大小不到培養(yǎng)皿的一半,其余一半分布均勻,將此一半計(jì)數(shù)*2;實(shí)驗(yàn)步驟從土壤中分離微生物n菌落計(jì)數(shù)n選擇平均菌落數(shù)在30300間的平板:n 只有一個(gè)符合此范圍時(shí),以該平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)即為該樣品中微生物總數(shù);n 有兩個(gè)在30300間時(shí),按兩者菌落總數(shù)比值決定:比值小于2,取平均;比值大于2,取較少的菌落總數(shù);實(shí)驗(yàn)步驟從土壤中分離微生物n菌落計(jì)數(shù)n所有菌落數(shù)均大于300,取稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù);n所有菌落數(shù)均小于30,取稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù);n所有菌落數(shù)均不在30300間,以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù);結(jié)果與討論n