谷氨酰胺合成酶Glutamine synthetaseGS試劑盒說明書

1、貨號(hào)：MS1807 規(guī)格：100管/48樣谷氨酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）試劑盒說明書微量法正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：GS（EC .2）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲(chǔ)存和運(yùn)輸形式。測定原理：GS在ATP和Mg2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為谷氨?；惲u肟酸，在酸性條件下與鐵形成的絡(luò)合物在540nm處有最大吸收峰，可用分光光度計(jì)測定。自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)

2、式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制：提取液：100mL×1瓶，4保存。試劑一：10mL×1瓶，-20保存；臨用前37預(yù)熱20min，充分混勻，如有沉淀，靜置10min，取上清待用。試劑二：10mL×1瓶，-20保存；臨用前37預(yù)熱20min，充分混勻，如有沉淀，靜置10min，取上清待用。試劑三：粉劑×2瓶，-20保存。用時(shí)每瓶加入5mL蒸餾水充分溶解待用。試劑四：15mL×1瓶，4避光保存。樣本測定的準(zhǔn)備：1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清

3、；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為5001000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4離心10min，取上清，置冰上待測。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：510的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4離心10min，取上清，置冰上待測。2、血清（漿）樣品：直接檢測。測定步驟：1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。2、 在EP管中加入下列試劑：試劑名稱（L）測定管對照

4、管試劑一160試劑二160試劑三7070樣本7070 混勻，37（哺乳動(dòng)物）或25（其他物種）準(zhǔn)確水浴30min試劑四100100混勻，25室溫靜置10min后，8000g，25離心10min，取200L上清液至微量石英比色皿或96孔板中，測定540nm處的吸光值A(chǔ)。A=A測定管-A對照管。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對照管。GS活力單位的計(jì)算：a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下1、血清（漿）GS活性單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每min使540下吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。計(jì)算公式：GS（U/mL）=A×V反總÷V樣÷0.01÷T

5、=19×A2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞GS活性（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：單位的定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每min 使540nm下吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。GS（U/mg prot）A×V反總÷（Cpr×V樣）÷0.01÷T =19×A÷Cpr（2）按樣本鮮重計(jì)算：單位的定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每min 使540nm下吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。GS（U/g 鮮重）A×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =19

6、×A÷W（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算單位定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每min 使540nm下吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。GS（U/104 cell）A×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =0.038×AV反總：反應(yīng)體系總體積，0.4mL； V樣：加入樣本體積，0.07mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下1、血清（漿）G

7、S活性單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每min使540下吸光值變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。計(jì)算公式：GS（U/mL）=A×V反總÷V樣÷0.005÷T =38×A2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞GS活性（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：單位的定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每min 使540nm下吸光值變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。GS（U/mg prot）A×V反總÷（Cpr×V樣）÷0.005÷T =38×A÷Cpr（2）按樣本鮮重計(jì)算：單位的定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每min 使540nm下吸光值變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。GS（U/g 鮮重）A×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T =38×A÷W（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算單位定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每min 使540nm下吸光值變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。GS（U/104 cell）A×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.005÷T