AB液質(zhì)操作規(guī)程完整

1、第一部分開關(guān)機(jī)AA、開機(jī)1打開UPS電源，打開氮?dú)獍l(fā)生器（氣瓶）,確認(rèn)Curtaingas的輸入壓力為0.4MPa,gas1/2為0.7MPa,exhuast為0.4MPa。打開機(jī)械泵電源開關(guān)（5500系列直接打開質(zhì)譜主機(jī)電源，儀器自動(dòng)啟動(dòng)機(jī)械泵）等機(jī)械泵工作至少30min打開質(zhì)譜主機(jī)電源開關(guān)過夜抽真空BB、關(guān)機(jī)1?停止輸液：關(guān)停針泵或液相泵，或斷開輸液管線（一般質(zhì)譜主機(jī)Standby后液相系統(tǒng)也自動(dòng)待機(jī)，輸液泵自動(dòng)關(guān)停，但建議操作人員再次確認(rèn)，必須保證沒有任何液體再泵入質(zhì)譜）2?使儀器待機(jī)，并滅活配置2?關(guān)閉質(zhì)譜儀主機(jī)電源開關(guān)（5500系列只需按下電源開關(guān)旁的VENT按鍵排放真空）3?B械泵

2、繼續(xù)工作至少30min4?關(guān)閉機(jī)械泵上的電源開關(guān)（5500系列會(huì)自動(dòng)關(guān)停機(jī)械泵，待機(jī)械泵停止后即可關(guān)閉5500系列主機(jī)上的電源開關(guān)）5?關(guān)閉氣體發(fā)生器或氣瓶第二部分調(diào)諧1、PPG就是正離子校正液，PPG3000負(fù)離子調(diào)諧液，本臺(tái)儀器只用兩瓶校正液，正離子一瓶，負(fù)離子一瓶。洗液一瓶50%的甲醴水。調(diào)諧前先用洗液洗針兩次。吸校正液的時(shí)候慢慢吸，避免吸入氣泡，吸好以后將針泵卡住。再將高度調(diào)到5,將管路重新連接。不再連接六通閥，由質(zhì)譜直接進(jìn)樣，且將針泵的速度調(diào)到10PL/m。2、調(diào)諧液弄好后在儀器面板工具欄上：TOOH項(xiàng)目一創(chuàng)建項(xiàng)目。此項(xiàng)目為一個(gè)文件夾，文件夾里面包括所有此次采集的信息，方法、序列等，

3、且所有采集的項(xiàng)目都固定在一個(gè)文件夾下面：D:/AnalystData/Project。新建項(xiàng)目的時(shí)候，彈出窗口中有個(gè)AddAll,可以創(chuàng)建孫文件夾。3、聯(lián)機(jī)：軟件打開后在左上方硬件配置（單機(jī)選中，雙擊打開）-只需選中儀器MBactiveprofile。圖標(biāo)變?yōu)榫G色，表示聯(lián)機(jī)成功。調(diào)諧只需要選中質(zhì)譜。儀器的實(shí)時(shí)狀態(tài)可以點(diǎn)擊右下方的圖標(biāo)，質(zhì)譜和液相都是單獨(dú)觀察，質(zhì)譜要注意真空度，為0.5.4、調(diào)諧一手動(dòng)調(diào)諧一項(xiàng)目（文件夾）選中下拉菜單中的Installation20161102（為系統(tǒng)默認(rèn)的調(diào)諧文件夾）,先Q仔startsyringpump（打開針泵）一start（質(zhì)譜），開始采集以后觀察基線是否

4、平衡，若等兩分鐘還未平衡好，則手動(dòng)將針泵往上抬。5、平衡好后（基線平穩(wěn)則為平衡好），重新進(jìn)樣，重新點(diǎn)擊startsyringpumpoResolution（分辨率）一advaneed（高級(jí)選項(xiàng)）（看到結(jié)果后調(diào)節(jié)質(zhì)量軸和分辨率做準(zhǔn)備，只能先打開這個(gè)，再打開譜圖）一實(shí)時(shí)質(zhì)譜圖右鍵一openfile隨便點(diǎn)一個(gè)框一軟件上方的從譜圖校正-PPG.POS正離子）-start曲現(xiàn)三行：（1、質(zhì)量軸。2、分辨率。3、兩次調(diào)諧的差異）一若質(zhì)量軸有差異一右上角一yes若分辨率飛離出虛線一offset（偏大調(diào)大，偏小調(diào)小）輸入校正的數(shù)值，再重新進(jìn)樣，如此反復(fù)，直到點(diǎn)落在虛線以內(nèi)，實(shí)線代表最合適。&校正好后儀

5、器會(huì)自動(dòng)保存，直接關(guān)掉窗口即可。負(fù)離子調(diào)諧和正離子調(diào)諧步驟一樣，只是在選擇方法的時(shí)候要注意選擇負(fù)離子模式。還有看結(jié)果時(shí)要選擇PPG3000此為負(fù)離子調(diào)諧液。調(diào)諧因針泵流速很小，10PL/ml,所以不需要設(shè)定離子源溫度及輔助氣，直接設(shè)定噴霧器流速為50,就可以將樣品霧化，氣簾氣也不需要設(shè)置，因?yàn)闆]有多余的溶劑需要吹走。1. 第三部分：方法優(yōu)化在Analyst軟件Tools菜單中選擇ProjectCreateProject在Projectname項(xiàng)輸入新建的Project名稱。注意，不要點(diǎn)選窗口中的其他按鈕！點(diǎn)擊OK,確認(rèn)新建Projecto在Analyst軟件界面下，雙擊導(dǎo)航欄內(nèi)Hardware

6、Configuration。在彈出窗口中選擇MassOnly，點(diǎn)擊ActivateProfile，激活MassOnly（只聯(lián)接質(zhì)譜主機(jī)）。2. 在導(dǎo)航欄內(nèi)單擊TuneandCalibrate進(jìn)入調(diào)諧模式。點(diǎn)擊上方工具條中的T鈕。此時(shí)，應(yīng)注意到主機(jī)有才卜”聲音，表明進(jìn)入調(diào)諧狀態(tài)。此時(shí)右下角質(zhì)譜狀態(tài)顯示綠色。雙擊ManualTuning,進(jìn)入質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置及運(yùn)彳亍窗口。4使用1mL玻璃進(jìn)樣針吸取適當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于進(jìn)樣針座上。點(diǎn)擊MSMethod下拉菜單，選擇SyringePumpMethod,設(shè)定針泵流速FlowRate為10PL/mirt點(diǎn)擊StartSyringePump按鈕開針泵進(jìn)樣。5. 返

7、回MSMethod，選擇掃描模式ScanType為Q1MS,設(shè)定掃描速度ScanRate為10Da/s,設(shè)定掃描范圍StartStop設(shè)定為50化合物分子量。DP預(yù)輸入60。點(diǎn)擊start開始采集數(shù)據(jù)。運(yùn)行穩(wěn)定后，注意觀察是否有預(yù)期的母離子出現(xiàn)，并控制其響應(yīng)值在約E4以下。點(diǎn)擊stop,選擇第一個(gè)峰（后面是同位素峰）的平穩(wěn)段，雙擊，選中母離子。點(diǎn)擊右鍵，選擇DeletePane設(shè)定Scantype為產(chǎn)物離子掃描ProductIon（Ms2）,掃描速度200Da/s,選擇掃描正/負(fù)離子，輸入母離子（productof）,設(shè)定掃描范圍startstop為50MW+20，遺蓋可能的子離子質(zhì)量范圍，點(diǎn)

8、擊compoud標(biāo)簽，設(shè)定（DP）60,（CE）5。6. 點(diǎn)擊start,開始采集數(shù)據(jù)，注意觀察是否有預(yù)期的母離子出現(xiàn)。手動(dòng)調(diào)節(jié)CE,以5eV為步長(zhǎng)，逐漸增加。每次增加后稍作等待，直至目標(biāo)化合物的子離子清晰看見。選擇平穩(wěn)的一段，雙擊，選擇子離子。7. 選擇ScanType為MRM。設(shè)定參數(shù)表格中的Q1對(duì)應(yīng)的母離子，Q3對(duì)應(yīng)的子離子,time（ms）為50,ID值設(shè)為名稱1（定量），名稱2（定性）。11點(diǎn)擊EditRamp,在Parameter下選擇CollisionEnergy，點(diǎn)擊OK。點(diǎn)擊start開始采集數(shù)據(jù)，記錄每個(gè)MRM通道的最佳CE電壓。在MRM參數(shù)設(shè)定表中，右鍵點(diǎn)擊。選擇Coll

9、isionEnergyCE，調(diào)出表格中的CE列，輸入每個(gè)MRM通道的最佳CE電壓值，精確到個(gè)位數(shù)。重復(fù)以上步驟，在Parameter項(xiàng)下選擇DeclusteringPotential,優(yōu)化并保存DP。完成后選擇菜單File/Save保存采樣方法，文件名.dam。第四部分：方法建立一、LCMS方法的建立：1、連接儀器：打開HPLC質(zhì)譜電源，將HPLC系統(tǒng)接上柱子，將6號(hào)出口管線與離子源連好。調(diào)離子源噴霧針位置到2mm處，雙擊HardwareConfigure,在硬件配置菜單下單擊LCMS（液相與質(zhì)譜聯(lián)用），單擊Activateprofile激活儀器，會(huì)聽到笛的一聲，說明儀器已經(jīng)連接上。2、確認(rèn)液

10、質(zhì)同步：選擇項(xiàng)目（之前優(yōu)化方法的時(shí)候已經(jīng)建立的項(xiàng)目）；雙擊Buildacquisitionmethod新建方法，彈出新建方法模板。在模板左側(cè)點(diǎn)擊acquisitionmethod，模板右邊顯示對(duì)應(yīng)的參數(shù)，確認(rèn)synchronizationmode選擇LCSync,表示液質(zhì)同步。3、設(shè)置MRM參數(shù)：點(diǎn)擊方法模板左側(cè)的MRM，在模板右側(cè)ScanType下選擇MRM;在polarity下選擇化合物極性：Positive正離子）、Negative（負(fù)離子）；Duration為15min（與液相分離相同的時(shí)間）；表格中Q1:母離子分子量,Q3（Da）:子離子分子量,Time（mse?:50,ID欄：化合

11、物名稱（離子對(duì)名稱后空格加1為定量，空格加2為定性），在表格中右鍵分別單擊DP、CE,點(diǎn)擊工具欄的OPEN打開之前優(yōu)化的方法參數(shù)，調(diào)出DP,CE值，選中整行,Ctrl+c（復(fù)制）參數(shù)，關(guān)閉窗口，再Ctrl+v（粘貼）參數(shù)）；最后點(diǎn)擊Editparameter設(shè)置離子源參數(shù)：Source/Gas項(xiàng)用以下推薦值：CUR35,IS:5500（正離子）或-4500（負(fù)離子）,TEM600,GS160,GS270,點(diǎn)擊OK。4、設(shè)置液相參數(shù)：點(diǎn)擊模板左邊的shimadzuLCsystem在右邊的pumps欄下，設(shè)置stoptime（運(yùn)彳亍時(shí)間）為15min,flow流速為1mL/min,A為水相設(shè)為95

12、%,B為有機(jī)相設(shè)為5%（設(shè)置時(shí)改B,A自動(dòng)），泵最大壓力為50;點(diǎn)擊timeprogram設(shè)置液相梯度：例咪口坐類梯度設(shè)置：Time(min)ABp95%5%55%95%105%95%10.195%5%1595%5%接著在右邊的Autosampler欄下，設(shè)置清洗時(shí)間，在Rinsemode下選擇Beforeandafter（前后都洗），并設(shè)置清洗時(shí)間為5s,清洗液用50%甲醴水。最后點(diǎn)擊保存按鈕，在保存窗口輸入該方法的名稱。二、建立批處理：1、雙擊Buildacquisitionbatch，在右邊窗口set欄為批處理保存的文件夾命名以便識(shí)別，再點(diǎn)擊addse，最后點(diǎn)擊addsample再選擇之

13、前建立的LC-MS方法，在彈出的窗口內(nèi)的number（進(jìn)樣樣品數(shù)）處填入需要進(jìn)樣的樣品個(gè)數(shù)，點(diǎn)擊OK。2、在加入的樣品列表內(nèi)依次填寫samplenam（樣品名稱）、viaposition（樣品瓶的位置）、inj.volunme（進(jìn)樣體積：一般5微升或10微升）。3、在submit項(xiàng)下點(diǎn)擊submit按鈕以提交樣品序列。4、點(diǎn)擊工具條上左上角的viewqueue按鈕，可查看已提交的樣品。此時(shí)將儀器從校正狀態(tài)退出，進(jìn)入分析模式。確認(rèn)泵已打開，首次進(jìn)樣液相先排氣，再平衡儀器：先點(diǎn)擊工具條上的equilibrate平衡按鈕，在彈出的平衡窗口中輸入平衡時(shí)間10min，點(diǎn)擊ok。右下角圖標(biāo)會(huì)變黃，待平衡結(jié)

14、束后此處圖標(biāo)會(huì)變成綠色，此時(shí)即可點(diǎn)擊startsample按鈕采集樣品信息，儀器會(huì)自動(dòng)對(duì)已提交的全部樣品進(jìn)彳亍采集。第五部分?jǐn)?shù)據(jù)處理雙擊打開Multiquilt,選擇項(xiàng)目，點(diǎn)擊File下的熒光棒型圖標(biāo)，點(diǎn)擊sample,選擇需要的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊next,createnewmethod為方法命名，點(diǎn)擊next，選擇一個(gè)有代表性的樣品（一般選擇濃度較大的標(biāo)品數(shù)據(jù)），設(shè)置分組（同一物質(zhì)定量離子和定性離子設(shè)置為一組），并指定內(nèi)標(biāo)，next,對(duì)每個(gè)物質(zhì)進(jìn)行積分。1. 設(shè)置積分參數(shù)：a、CausianSmoth（平滑）：一般是0,如有毛刺可改成1或2;b、ExpecetedTime（保留時(shí)間）：一

15、般不動(dòng)c、Expectedtime范圍：一般30s,表示在保留時(shí)間甘s范圍d、最小峰寬e、最小峰高f、背景噪音扣除：可調(diào)整目標(biāo)峰基線以下被積分的面積，比例越高積分越往下，必要時(shí)調(diào)整。g、分峰因子：峰有分叉時(shí)設(shè)置，如有兩個(gè)分叉，設(shè)置為2,峰分叉不能大于2h、單位：設(shè)置單位，勾選Applyunitstoall可將此單位用于所有化合物點(diǎn)擊next,點(diǎn)擊finish。在新跳出窗口內(nèi)將標(biāo)準(zhǔn)品選定，輸入濃度。查看各化合物積分是否正常，點(diǎn)擊第三個(gè)圖標(biāo)查看標(biāo)準(zhǔn)曲線。報(bào)告打?。狐c(diǎn)擊File,createreport,Reporttemplate（選擇才艮告模板，一般用sample1和標(biāo)線，內(nèi)標(biāo)報(bào)告只能用samp

16、le1,2,3），命名，選擇存儲(chǔ)報(bào)告位置，點(diǎn)ok。信噪比：選擇項(xiàng)目，雙擊opendatefile，點(diǎn)擊sample,選擇低濃度樣品，點(diǎn)擊ok,點(diǎn)擊XIC,選擇定量離子，點(diǎn)擊ok,選中峰，按住shift，選峰附近的一段時(shí)間，點(diǎn)Script，點(diǎn)擊S-ToNScript,即可得到結(jié)果。第六部分：LC-MS離子阱原理及其應(yīng)用原理：在進(jìn)行多級(jí)質(zhì)譜分析（MS-MS）時(shí)，首先限定目標(biāo)質(zhì)量的離子。通過調(diào)整交變電壓，將大于以及小于目標(biāo)質(zhì)量的離子射出，從而使得僅有一個(gè)質(zhì)量的離子存在于離子阱中并將其富集。目標(biāo)質(zhì)量的范圍被稱為IsolationWidth。之后通過向離子阱內(nèi)注入氣體（通常為氮?dú)饣虻獨(dú)猓?，與離子發(fā)生碰撞

17、使其被打成碎片。操作方法：首先在Analyst中打開一個(gè)成熟的MRM采樣方法，然后右鍵單擊AcquisitionMethod中的MRM,在彈出菜單中選擇AddIDACriteriaLevel。在新增的IDA-FirstLevelCriteria頁(yè)面中設(shè)置相關(guān)邏輯選項(xiàng)（其中四項(xiàng)尤為重要）1）Select“X”to“Y”mostintens，表ea在多個(gè)組分色譜共流出時(shí),指定觸發(fā)最強(qiáng)的若干個(gè)母離子，“1to2表示最強(qiáng)和次強(qiáng)的兩個(gè)母離子，“1to3表示最強(qiáng)和次強(qiáng)和第三位三個(gè)母離子，以此類推。請(qǐng)注意，如果選擇了“1to2或“1to3,則后續(xù)的EPI個(gè)數(shù)應(yīng)調(diào)整為對(duì)應(yīng)的兩個(gè)或三個(gè)。（一般選擇兩個(gè)以下）2）

18、AfterDynamicBackgroundSubtractionofSurveyScan,表示執(zhí)彳亍動(dòng)態(tài)背景扣除，使得感興趣的母離子都盡可能的獲得觸發(fā)EPI的機(jī)會(huì)。該選項(xiàng)尤為重要，為必選項(xiàng)。3）Excludeformertargetions在某些情況下，一次數(shù)據(jù)采集中，如果同一個(gè)MRM通道內(nèi)可能有幾個(gè)不同保留時(shí)間的色譜法出現(xiàn)，那么應(yīng)選擇Never,表示所有色譜法都依次觸發(fā)執(zhí)行EPI。4）Whichexceeds設(shè)定MRM信號(hào)強(qiáng)度閾值超過此閾值才會(huì)觸發(fā)EPI。通常為500或1000.然后點(diǎn)選IncludeList激活強(qiáng)制觸發(fā)的母離子。Mass（Da）列輸入需要的母離子質(zhì)量數(shù)，RT（min）列輸入該母離子的保留時(shí)間，Width（sec）列輸入開放的保留時(shí)間窗口。完成以上IDACriteria邏輯選項(xiàng)設(shè)定后，添加EPI方法。首先，在IDACriteria上點(diǎn)擊右鍵，在彈出菜單中選擇Addexperimento軟件會(huì)添加一個(gè)新的experiment,并自動(dòng)與上一個(gè)MRM保持一致。然后在ScanType處選擇EnhancdeProduc