紫外-可見分光光度計(jì)

1、實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 紫外可見分光光度計(jì)紫外可見分光光度計(jì)的性能檢驗(yàn)的性能檢驗(yàn) 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1 1、掌握紫外可見分光光度計(jì)性能的檢驗(yàn)方法、掌握紫外可見分光光度計(jì)性能的檢驗(yàn)方法 2 2、學(xué)會(huì)、學(xué)會(huì)UV1100UV1100型紫外可見分光光度計(jì)的使用方法型紫外可見分光光度計(jì)的使用方法 二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)行性能檢查，以保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確。對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)行性能檢查，以保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確。三、儀器與試劑三、儀器與試劑 UVUV11001100型紫外可見分光光度儀型紫外可見分光光度儀 石英比色皿（一對(duì)）石英比色皿（一對(duì)） 擦鏡紙擦鏡紙 蒸餾水蒸餾水 6mg/100ml K6mg/

2、100ml K2 2CrCr2 2O O7 7溶液溶液 0.002mol/mol KMnO0.002mol/mol KMnO4 4溶液溶液 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟 1 1、比色皿的配對(duì)性、比色皿的配對(duì)性注入注入蒸餾水蒸餾水兩個(gè)比色皿兩個(gè)比色皿分別分別440nm440nm以一個(gè)比色皿以一個(gè)比色皿為空白（為空白（T T1 1100100）測(cè)定測(cè)定另一個(gè)比色皿的另一個(gè)比色皿的T T2 2T=TT=T1 1-T-T2 2T0.5%T0.5%T0.5%兩個(gè)比色皿配對(duì)兩個(gè)比色皿配對(duì)兩個(gè)比色不配對(duì)，應(yīng)進(jìn)行校正兩個(gè)比色不配對(duì)，應(yīng)進(jìn)行校正 2 2、波長(zhǎng)精度的檢查、波長(zhǎng)精度的檢查以蒸餾水為空

3、白以蒸餾水為空白 測(cè)定測(cè)定KMnOKMnO4 4溶液的吸收曲線溶液的吸收曲線若測(cè)得的最大吸收波長(zhǎng)在若測(cè)得的最大吸收波長(zhǎng)在5255251nm1nm以內(nèi)以內(nèi)說明說明儀器波長(zhǎng)精度符合使用要求儀器波長(zhǎng)精度符合使用要求5008000.40.2(nm)A0 3 3、重復(fù)性的檢查、重復(fù)性的檢查以以0.02mol/L0.02mol/L的的H H2 2SOSO4 4為空白為空白在在257nm257nm處處同一同一K K2 2CrCr2 2O O7 7溶液的溶液的T T，連續(xù)測(cè)定連續(xù)測(cè)定7 7次次測(cè)定測(cè)定求出極差求出極差 若極差若極差0.5%0.5%儀器的重復(fù)性符合儀器的重復(fù)性符合使用要求使用要求 4.4.吸收吸

4、收值值準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度的檢查的檢查235nm235nm、257nm257nm分別測(cè)定分別測(cè)定 K K2 2CrCr2 2O O7 7溶液溶液吸光度吸光度并計(jì)算吸收系數(shù)并計(jì)算吸收系數(shù)以以0.02mol/L0.02mol/L的的H H2 2SOSO4 4為空白為空白(T(T100%100%）313nm313nm、350nm350nm與下表規(guī)定的與下表規(guī)定的吸收系數(shù)比較吸收系數(shù)比較 若相對(duì)偏差在若相對(duì)偏差在1%1%以內(nèi)以內(nèi)說明說明儀器符合使用要求儀器符合使用要求波長(zhǎng)波長(zhǎng)/nm/nm 吸收系數(shù)吸收系數(shù) 235235123.0123.0126.0126.0257257142.8142.8146.2146.2

5、31331347.047.050.350.3350350105.5105.5108.5108.5五、思考題五、思考題1 1、同種比色皿透光度的差異對(duì)測(cè)定有何影響？、同種比色皿透光度的差異對(duì)測(cè)定有何影響？2 2、檢查分光光度計(jì)的重復(fù)性對(duì)測(cè)定有什么實(shí)際意義？、檢查分光光度計(jì)的重復(fù)性對(duì)測(cè)定有什么實(shí)際意義？實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 吸收曲線的測(cè)繪及吸收曲線的測(cè)繪及吸收系數(shù)的測(cè)定吸收系數(shù)的測(cè)定 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1 1、掌握測(cè)繪吸收曲線的方法、掌握測(cè)繪吸收曲線的方法 2 2、學(xué)會(huì)測(cè)定吸收系數(shù)、學(xué)會(huì)測(cè)定吸收系數(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 1 1、若溶劑固定不變，化合物吸收曲線所出現(xiàn)的、若溶劑固定不變，化合物吸收

6、曲線所出現(xiàn)的maxmax、minmin或或(S(S) )為一定值，且數(shù)目也一定，為鑒別化合物提為一定值，且數(shù)目也一定，為鑒別化合物提供了有力的證據(jù)。供了有力的證據(jù)。 2 2、百分吸收系數(shù)是指當(dāng)溶液濃度為、百分吸收系數(shù)是指當(dāng)溶液濃度為1%1%，液層厚度為，液層厚度為1cm1cm時(shí)的吸光度。時(shí)的吸光度。 即即 1 %11c mAEC三、儀器與試劑三、儀器與試劑 UVUV11001100型紫外可見分光光度計(jì)型紫外可見分光光度計(jì) 石英比色皿（一對(duì)）石英比色皿（一對(duì)） 95%95%乙醇（乙醇（A.RA.R） 0.005%0.005%丹皮酚對(duì)照品溶液丹皮酚對(duì)照品溶液四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作

7、步驟丹皮酚對(duì)照品丹皮酚對(duì)照品10mg10mg9595乙醇溶解乙醇溶解定容至定容至10ml10ml搖勻搖勻精密吸取精密吸取5ml5ml置置100ml100ml量瓶量瓶9595乙醇定容乙醇定容作為母液備用作為母液備用母液中丹皮酚的含量為母液中丹皮酚的含量為0.005%0.005%1 1、吸收曲線的測(cè)繪、吸收曲線的測(cè)繪精密吸取母液精密吸取母液1ml1ml置置10ml10ml量瓶量瓶9595乙醇定容乙醇定容以以9595乙醇為空白，進(jìn)行光譜掃描，得到吸收曲線圖。乙醇為空白，進(jìn)行光譜掃描，得到吸收曲線圖。2 2、吸收曲線的測(cè)繪、吸收曲線的測(cè)繪 利用上述溶液，在利用上述溶液，在274nm274nm波長(zhǎng)處測(cè)定

8、其吸光度并計(jì)算波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度并計(jì)算百分吸收系數(shù)。百分吸收系數(shù)。實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 分光光度法測(cè)定槐花中分光光度法測(cè)定槐花中總黃酮的含量總黃酮的含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?1 1、掌握用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定槐花中總黃酮含量的方法、掌握用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定槐花中總黃酮含量的方法 2 2、鞏固紫外可見分光光度計(jì)的操作方法、鞏固紫外可見分光光度計(jì)的操作方法二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 黃酮類化合物分子中的羰基、羥基等結(jié)構(gòu)可與金屬鹽黃酮類化合物分子中的羰基、羥基等結(jié)構(gòu)可與金屬鹽類試劑如鋁鹽、鉛鹽等生成有色配合物，可用于定量分類試劑如鋁鹽、鉛鹽等生成有色配合物，可用于定量分析。析。三、儀器與試劑三、儀器與試劑 UVUV

9、11001100型紫外可見分光光度儀型紫外可見分光光度儀 石英比色皿（一對(duì)）石英比色皿（一對(duì)） 5% NaNO5% NaNO2 2溶液溶液 10% Al(NO10% Al(NO3 3) )3 3溶液溶液 NaOHNaOH試液試液 蘆丁對(duì)照品蘆丁對(duì)照品 槐花藥材槐花藥材 其余試劑均為分析純其余試劑均為分析純； 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟1 1、對(duì)照品溶液的制備、對(duì)照品溶液的制備加甲醇，水浴使溶解加甲醇，水浴使溶解蘆丁對(duì)照品蘆丁對(duì)照品50mg50mg置置25ml25ml量瓶中量瓶中放冷，加甲醇至刻度，搖勻放冷，加甲醇至刻度，搖勻精密吸取精密吸取10ml10ml置置100ml100

10、ml量瓶中量瓶中加水至刻度，搖勻加水至刻度，搖勻即得（每即得（每1ml1ml中含無水蘆丁中含無水蘆丁0.2mg0.2mg）2 2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液精密量取對(duì)照品溶液0 0、1 1、2 2、3 3、4 4、5ml5ml分別置分別置25ml25ml量瓶中量瓶中各加各加H H2 2O O加加5% NaNO5% NaNO2 2 1ml 1ml搖勻搖勻放置放置6min6min10% Al(NO10% Al(NO3 3) )3 3 1ml 1ml搖勻搖勻放置放置6min6min加加加加NaOHNaOH試液試液 10ml10ml加水至刻度加水至刻度搖勻，放置搖勻，放置15mi

11、n15min至至5ml5ml=500nm=500nm以相應(yīng)試劑為空白以相應(yīng)試劑為空白測(cè)定吸光度（測(cè)定吸光度（A A）以以吸光度吸光度為縱坐標(biāo)，為縱坐標(biāo)，濃度濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光度吸光度濃度（濃度（mg/mlmg/ml）3 3、供試品溶液的制備、供試品溶液的制備槐花粗粉槐花粗粉1g1g精密稱定精密稱定置置索氏提取器索氏提取器中中加加乙醚乙醚加熱回流至加熱回流至提取液無色提取液無色放冷放冷棄乙醚液棄乙醚液加加甲醇甲醇90ml90ml加熱回流至加熱回流至提取液無色提取液無色移至移至100ml100ml量瓶中量瓶中甲醇少量多次洗滌容器甲醇少量多次洗滌容器洗液并入量瓶中洗

12、液并入量瓶中加甲醇至刻度加甲醇至刻度搖勻搖勻精密吸取精密吸取10ml10ml置置100ml100ml量瓶中量瓶中加水至刻度，搖勻加水至刻度，搖勻即得即得4 4、樣品的測(cè)定、樣品的測(cè)定精密吸取精密吸取供試品供試品溶液溶液3ml3ml置置25ml25ml量瓶中量瓶中照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法自自“加水至加水至5ml”5ml”起起從標(biāo)準(zhǔn)曲線上從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求求出供試品溶液中蘆丁的重量出供試品溶液中蘆丁的重量，即得即得依法測(cè)定吸光度依法測(cè)定吸光度槐花中含總黃酮以無水蘆?。ɑ被ㄖ泻傸S酮以無水蘆?。– C2727H H3030O O1616）計(jì)，）計(jì)，不得少于不得少于8.0%8.0%

13、。五、注意事項(xiàng)五、注意事項(xiàng) 1 1、對(duì)照品和樣品應(yīng)同時(shí)顯色、對(duì)照品和樣品應(yīng)同時(shí)顯色 2 2、顯色劑加入的順序、加入量和顯色時(shí)間要正確、顯色劑加入的順序、加入量和顯色時(shí)間要正確六、思考題六、思考題 1.1.分光光度法有哪些影響因素？分光光度法有哪些影響因素？ 2.2.試述標(biāo)準(zhǔn)曲線法的優(yōu)點(diǎn)。試述標(biāo)準(zhǔn)曲線法的優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)四、薄層板的制備實(shí)驗(yàn)四、薄層板的制備一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆毡影宓闹瓢宸椒āＵ莆毡影宓闹瓢宸椒?。二、儀器與試劑二、儀器與試劑 天平（天平（0.1g） 研缽研缽 玻璃板玻璃板 10 cm20cm CMC-Na水溶液水溶液 （3） 蒸餾水蒸餾水 薄層層析用硅膠薄層層析用硅膠GF25

14、4（青島海（青島海洋化工廠）洋化工廠）三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟 1. 洗板洗板 選取板面平整的玻璃板，洗凈后選取板面平整的玻璃板，洗凈后放置在干凈、平整的臺(tái)面上，陰干備用。放置在干凈、平整的臺(tái)面上，陰干備用。2勻漿勻漿 將吸附劑將吸附劑1份（份（3.0g）和）和水水3份在研缽中向同一方向研磨混合份在研缽中向同一方向研磨混合均勻。均勻。 3 3鋪制鋪制 將已調(diào)制好的吸附劑勻漿倒至玻璃板的將已調(diào)制好的吸附劑勻漿倒至玻璃板的一端，用研棒將勻漿引到玻板的各個(gè)邊緣，輕輕震一端，用研棒將勻漿引到玻板的各個(gè)邊緣，輕輕震動(dòng)，使吸附劑均勻鋪開成一薄層。置水平臺(tái)上陰干。動(dòng)，使吸附劑均勻鋪開成一

15、薄層。置水平臺(tái)上陰干。4 4活化活化 將陰干的薄層板至于將陰干的薄層板至于110110烘箱中活化烘箱中活化3030分鐘，置于有干燥器中分鐘，置于有干燥器中備用。備用。四、思考題四、思考題 1薄層板的鋪制過程中應(yīng)薄層板的鋪制過程中應(yīng)注意哪些問題？注意哪些問題？ 實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五 薄層色譜定性分薄層色譜定性分析析 （五味子的定性鑒別）（五味子的定性鑒別） 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1. 掌握薄層色譜的定性分析方法掌握薄層色譜的定性分析方法。 2. 熟悉薄層板的點(diǎn)樣方法。熟悉薄層板的點(diǎn)樣方法。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 中藥五味子中，五味子甲素為其主要中藥五味子中，五味子甲素為其主要有效成分之一，為了更好

16、的進(jìn)行定性鑒有效成分之一，為了更好的進(jìn)行定性鑒別，選用五味子甲素對(duì)照品和五味子對(duì)別，選用五味子甲素對(duì)照品和五味子對(duì)照藥材進(jìn)行對(duì)照，根據(jù)相同的組分在相照藥材進(jìn)行對(duì)照，根據(jù)相同的組分在相同的條件下，應(yīng)該有相同的顏色和比移同的條件下，應(yīng)該有相同的顏色和比移值來作為定性鑒別的依據(jù)。值來作為定性鑒別的依據(jù)。五味子植株五味子植株五味子藥材五味子藥材三、儀器與試劑三、儀器與試劑 定量毛細(xì)管定量毛細(xì)管 已制備好的薄層板（硅膠已制備好的薄層板（硅膠GF254 ） 展開缸展開缸 所用試劑均為分析純所用試劑均為分析純 五味子粉末五味子粉末定量毛細(xì)管定量毛細(xì)管雙槽展開缸雙槽展開缸對(duì)對(duì) 照照 品品四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟

17、四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟1.供試品液的制備：取五味子粉末供試品液的制備：取五味子粉末1g，加三氯甲烷，加三氯甲烷20ml，加熱回，加熱回流流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄樵尤燃淄?ml使溶解，作為使溶解，作為供試品液。供試品液。2.對(duì)照藥材溶液的制備：取五味子對(duì)照藥材溶液的制備：取五味子對(duì)照藥材對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液。溶液。3.對(duì)照品溶液的制備：取五味子甲對(duì)照品溶液的制備：取五味子甲素對(duì)照品，加三氯甲烷制成每素對(duì)照品，加三氯甲烷制成每ml含含1mg的對(duì)照品溶液。的對(duì)照品溶液。 4. 吸取上述三種溶液各吸取上述三種溶液各2l，點(diǎn)于

18、同一硅膠，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚（薄層板上，以石油醚（3060）甲酸乙酯甲酸（甲酸乙酯甲酸（15 5 1）的上層溶）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。顯相同顏色的斑點(diǎn)。五、思考題五、思考題 1如何克服薄層展開過程中的邊如何克服薄層展開過程中的邊緣效應(yīng)？引起邊緣效應(yīng)的因素有緣效應(yīng)？引起邊緣效應(yīng)的因素有哪些？哪些？ 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.掌握利用高效液相色譜法進(jìn)行定性 及定量分析。 2.鞏固高效液相色譜儀的使用方法。實(shí)驗(yàn)七、高效液相色譜定性及定量分實(shí)驗(yàn)七、高效液相色譜定性及定量分析析中藥赤芍中芍藥苷的定性鑒別和中藥赤芍中芍藥苷的定性鑒別和含量測(cè)定含量測(cè)定二、實(shí)驗(yàn)原理 1.采用與已知化合物對(duì)照,對(duì)組分進(jìn)行定 性分析。 2.采用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行含量測(cè)定。三、儀器與試劑 L-2000液相色譜儀（L-2400紫外檢測(cè)器） C18反相鍵合色譜柱（250 mm4.6 mm） 微量進(jìn)樣器（25l） 芍藥苷對(duì)照品；赤芍藥材 其余試劑均為分析純 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟 色譜條件 C18反相鍵合色譜柱； 流動(dòng)相：甲