實驗動物學(xué)課件-lzw

1、人類疾病動物模型人類疾病動物模型15-12-1劉志瑋劍橋-蘇大基因組資源中心12007-20142014綱要綱要人類疾病動物模型人類疾病動物模型意義及優(yōu)越性動物模型的設(shè)計原則動物模型的分類動物模型的選擇遺傳工程動物模型遺傳工程動物模型基因工程改造動物模型建立方法2PART I人類疾病動物人類疾病動物模型模型3 概念概念 意義意義 優(yōu)越性優(yōu)越性4人類疾病動物模型人類疾病動物模型 是指是指醫(yī)學(xué)研究中建立的醫(yī)學(xué)研究中建立的具有人類疾病表現(xiàn)的動物具有人類疾病表現(xiàn)的動物實驗對象和相關(guān)實驗對象和相關(guān)材料材料。 應(yīng)用動物模型是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)識生命科學(xué)客觀規(guī)應(yīng)用動物模型是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)識生命科學(xué)客觀規(guī)律律的的實驗方法

2、和手段實驗方法和手段。 5意義意義 人類疾病動物模型的研究，本質(zhì)上是比較醫(yī)學(xué)的人類疾病動物模型的研究，本質(zhì)上是比較醫(yī)學(xué)的應(yīng)用科學(xué)，研究人員可利用各種動物的生物特征應(yīng)用科學(xué)，研究人員可利用各種動物的生物特征和疾病特點與和疾病特點與人類疾病人類疾病進(jìn)行比較研究。進(jìn)行比較研究。 長期以來人們發(fā)現(xiàn)，選用人作為實驗對象來推動長期以來人們發(fā)現(xiàn)，選用人作為實驗對象來推動醫(yī)學(xué)的發(fā)展是困難的，臨床所積累的經(jīng)驗不僅在醫(yī)學(xué)的發(fā)展是困難的，臨床所積累的經(jīng)驗不僅在時間和空間上存在著時間和空間上存在著局限性局限性，許多實驗在，許多實驗在道義道義上上和和方法學(xué)方法學(xué)上還受到種種上還受到種種限制限制。 動物模型克服了這些不足

3、，其在生物學(xué)醫(yī)學(xué)研究動物模型克服了這些不足，其在生物學(xué)醫(yī)學(xué)研究中所起到的獨特作用，正受到越來越多的重視。中所起到的獨特作用，正受到越來越多的重視。6優(yōu)越性優(yōu)越性1.1. 避免了直接人體實驗造成的危害避免了直接人體實驗造成的危害臨床上直接研究外傷、中毒、腫瘤病因等研究是有困難的。動物可以作為人類的替代者，在人為設(shè)計的條件下反復(fù)觀察和研究?？梢钥朔惱砗蜕鐣赖碌南拗?，允許采用某些不能應(yīng)用于人類的方法途徑，可以方便的獲取樣品。7優(yōu)越性優(yōu)越性2.2. 臨臨床上平時不易見到的疾病可用動物復(fù)制床上平時不易見到的疾病可用動物復(fù)制出來出來臨床上一些疾病不常見,如放射病、毒氣中毒、烈性傳染病、外傷、腫瘤等，可

4、以采用實驗性誘發(fā)的方法在動物身上復(fù)制出來。8優(yōu)越性優(yōu)越性3.3.可提供發(fā)病率低可提供發(fā)病率低，潛伏期和病程長的疾病，潛伏期和病程長的疾病的動物的動物模型模型9臨床上還有一些如遺傳性、免疫性、代謝性和內(nèi)分泌、血液等疾病，發(fā)生發(fā)展緩慢、潛伏期長，病程也長，可能幾年或幾十年,在人體很難進(jìn)行3世代以上的連續(xù)觀察。人們可有意選用動物種群中發(fā)病率高的動物，通過不同手段復(fù)制出各種模型，在人為設(shè)計的實驗條件下反復(fù)觀察和研究，甚至可進(jìn)行幾十世代的觀察，同時也避免了人體實驗造成的傷害。優(yōu)越性優(yōu)越性4. 4. 可以嚴(yán)格控制實驗可以嚴(yán)格控制實驗條件，增強實驗條件，增強實驗材料的材料的可比性可比性10一般疾病多為零散發(fā)

5、生,在同一時期內(nèi),很難獲得一定數(shù)量的定性材料,而模型動物不僅在群體數(shù)量上容易得到滿足，而且可以在方法學(xué)上嚴(yán)格控制實驗條件，在對飼養(yǎng)條件及遺傳、微生物、營養(yǎng)等因素嚴(yán)格控制的情況下，通過物理、化學(xué)或生物因素的作用，限制實驗的可變因子，并排除研究過程中其它因素的影響，取得條件一致的、數(shù)量較大的模型材料，從而提高實驗結(jié)果的可比性和重復(fù)性，使所得到的成果更準(zhǔn)確更深入。優(yōu)越性優(yōu)越性5.5.可以簡化實驗可以簡化實驗操作，操作，便于樣品收集便于樣品收集動物模型作為人類疾病的“復(fù)制品”,可按研究者的需要隨時采集各種樣品或分批處死動物收集標(biāo)本，以了解疾病全過程，這是臨床難以辦到的。實驗動物向小型化的發(fā)展趨勢更有利

6、于實驗者的日常管理和實驗操作。11優(yōu)越性優(yōu)越性6.6.有助于有助于更全面地認(rèn)識疾更全面地認(rèn)識疾病的本質(zhì)病的本質(zhì)在臨床上研究疾病的本質(zhì)難免帶有一定局限性。許多病原體除人以外也能引起多種動物的感染，其癥狀體征表現(xiàn)可能不完全相同。但是通過對人畜共患病的比較，則可以充分認(rèn)識同一病原體給不同機體帶來的各種危害，使研究工作上升到立體的水平來揭示某種疾病的本質(zhì)。動物模型能夠細(xì)致觀察環(huán)境或遺傳因素對疾病發(fā)生發(fā)展的影響，可以全面地認(rèn)識疾病的本質(zhì)。12總結(jié)總結(jié)因此，一個好的疾病模型應(yīng)具有因此，一個好的疾病模型應(yīng)具有以下特點以下特點：1. 再現(xiàn)性好，應(yīng)再現(xiàn)所要研究的人類疾病，動物疾病表現(xiàn)應(yīng)與人類疾病相似。2. 動物

7、背景資料完整，生命周期滿足實驗需要。3. 復(fù)制率高。4. 專一性好，即一種方法只能復(fù)制出一種模型。應(yīng)該指出，任何一種動物模型都不能全部復(fù)制出人類疾病的所有表現(xiàn)，動物畢竟不是人體，模型實驗只是一種間接性研究，只可能在一個局部或一個方面與人類疾病相似。所以，模型實驗結(jié)論的正確性是相對的，最終還必須在人體上得到驗證。復(fù)制過程中一旦發(fā)現(xiàn)與人類疾病不同的現(xiàn)象，必須分析差異的性質(zhì)和程度，找出異同點，以正確評估。132.2.設(shè)計原則設(shè)計原則 相似性相似性 重復(fù)性重復(fù)性 可靠性可靠性 適用性和可控性適用性和可控性 易行性和經(jīng)濟(jì)性易行性和經(jīng)濟(jì)性14？15相似性相似性能夠找到與人類疾病能夠找到與人類疾病相同的動物

8、自發(fā)性疾病當(dāng)然最好。相同的動物自發(fā)性疾病當(dāng)然最好。例如日本人找到的大白鼠原發(fā)性高血壓例如日本人找到的大白鼠原發(fā)性高血壓(SHR(SHR大鼠大鼠) )就是研究就是研究人類原發(fā)性高血壓的理想模型，小型豬自發(fā)性冠狀動脈粥樣人類原發(fā)性高血壓的理想模型，小型豬自發(fā)性冠狀動脈粥樣硬化是研究人類冠心病的理想模型；自發(fā)性狗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)硬化是研究人類冠心病的理想模型；自發(fā)性狗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎與人類幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎十分相似，也是一種理想模炎與人類幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎十分相似，也是一種理想模型，等等。型，等等。與人類與人類完全相同的動物自發(fā)性疾病模型畢竟不可多得，完全相同的動物自發(fā)性疾病模型畢竟不可多得，往往需要

9、人工加以復(fù)制。為了盡量做到與人類疾病相似，首往往需要人工加以復(fù)制。為了盡量做到與人類疾病相似，首先要注意動物的選擇。其次，為了盡可能做到模型與人類相先要注意動物的選擇。其次，為了盡可能做到模型與人類相似，還要在實踐中對方法不斷加以改進(jìn)。似，還要在實踐中對方法不斷加以改進(jìn)。如果動物模型與臨床情況如果動物模型與臨床情況不相似，在動物身上有效治療不相似，在動物身上有效治療方案就不一定能用于臨床，反之亦然。方案就不一定能用于臨床，反之亦然。16重復(fù)重復(fù)性性理想的人類疾病動物模型應(yīng)該是可重復(fù)的，應(yīng)是可標(biāo)準(zhǔn)化的，不能重復(fù)的動物模型是無法進(jìn)行應(yīng)用研究的。為了增強動物模型復(fù)制時的重復(fù)性，必須在動物品種、品系、

10、年齡、性別、體重、健康情況、飼養(yǎng)管理；實驗及環(huán)境條件，季節(jié)、晝夜節(jié)律、應(yīng)激、室溫、濕度、氣壓、消毒滅菌；實驗方法步驟；藥品生產(chǎn)廠家、批號、純度規(guī)格、給藥劑型、劑量、途徑、方法；麻醉、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等用藥情況；儀器型號、靈敏度、精確度；實驗者操作技術(shù)熟練程度等等方面保持一致，因為一致性是重復(fù)性的可靠保證。17可靠可靠性性復(fù)制的動物模型應(yīng)力求可靠的反映人類疾病，即可特異地可靠地反映該種疾病或某種機能、代謝、結(jié)構(gòu)變化。同時應(yīng)具備該種疾病的主要癥狀和體征，并經(jīng)受一系列檢測 (如心電圖、臨床生理、生化指標(biāo)檢驗、病理切片等) 加以證實。若易自發(fā)地出現(xiàn)某些相應(yīng)病變的動物，就不應(yīng)加以選用，易產(chǎn)生與復(fù)制疾病相混淆的

11、疾病者也不宜選用。如：大鼠易患進(jìn)行性腎病，容易與鉛中毒所致的腎病相混淆，不適合復(fù)制鉛中毒模型。蒙古沙鼠較為適合。18適適用性和可控性用性和可控性設(shè)計復(fù)制人類疾病動物模型，應(yīng)盡量考慮在今后臨床能應(yīng)和便于控制其疾病的發(fā)展，以便于開展研究工作。如：雌激素能中止大小鼠的妊娠，不能中止人的妊娠。含有雌激素活性的避孕藥無法使用大小鼠篩選。 有些動物對致病因子特別敏感，易死亡，不好控制不適宜復(fù)制動物模型。如犬腹腔注射糞便濾液而引起腹膜炎，犬可很快大量死亡，來不及觀察和治療。19易易行性和經(jīng)濟(jì)性行性和經(jīng)濟(jì)性 復(fù)制動物模型設(shè)計，應(yīng)盡量做到方法容易執(zhí)行和合乎經(jīng)濟(jì)原則。小動物如大小鼠、地鼠、豚鼠等也可以復(fù)制出十分近

12、似的人類疾病模型。它們?nèi)菀鬃龅竭z傳背景明確，體內(nèi)微生物可加控制，模型性狀顯著且穩(wěn)定，年齡、性別、體重等可任意選擇，而且價廉易得、便于飼養(yǎng)管理，因此可盡量采用。除非不得已或一些特殊疾病（如痢疾、脊髓灰白質(zhì)炎等）研究需要外，盡量不用靈長類動物。除了在動物選擇上要考慮易行性和經(jīng)濟(jì)性原則外，在模型復(fù)制的方法上、指標(biāo)的觀察上也都要注意這一原則。3.3.動物模型的分類動物模型的分類按產(chǎn)生原因分類：按產(chǎn)生原因分類：1 1、誘發(fā)、誘發(fā)性動物模型性動物模型2 2、自發(fā)性動物、自發(fā)性動物模型模型3 3、抗疾病型動物、抗疾病型動物模型模型4 4、生物醫(yī)學(xué)動物、生物醫(yī)學(xué)動物模型模型20誘發(fā)性動物模型誘發(fā)性動物模型又稱

13、為實驗性動物模型，是指研究者通過使用物理的、化學(xué)的、生物的或復(fù)合的致病因素作用于動物，造成動物組織、器官或全身一定的損害，出現(xiàn)某些類似人類疾病時的功能、代謝或形態(tài)結(jié)構(gòu)方面的病變。21優(yōu)缺點優(yōu)缺點 誘發(fā)性疾病動物模型具有能在短時間內(nèi)復(fù)制出大量疾病模型，并能嚴(yán)格控制各種條件使復(fù)制出的疾病模型適合研究目的需要等特點，因而為近代醫(yī)學(xué)研究所常用，特別是藥物篩選研究工作所首選。 但誘發(fā)模型和自然產(chǎn)生的疾病模型在某些方面畢竟存在一定差異。因此在設(shè)計誘發(fā)性動物模型要盡量克服其不足，發(fā)揮其特點。22誘發(fā)因素誘發(fā)因素 物理因素 ：機械損傷、放射線損傷、氣壓、手術(shù) 化學(xué)因素 ：化學(xué)藥致癌、化學(xué)毒物中毒、強酸強堿燒傷

14、、某種有機成分的增加或減少導(dǎo)致營養(yǎng)性疾病等。 生物因素 ：細(xì)菌、病毒、寄生蟲、生物毒素等。 復(fù)合因素 ：應(yīng)用單一因素誘發(fā)難以達(dá)到實驗的要求時23應(yīng)用實例應(yīng)用實例24High Fat Diet induced Obesity252627Bone marrow transplantation自發(fā)性動物模型自發(fā)性動物模型指實驗動物未經(jīng)任何人工處置，在自然條件下動物自發(fā)產(chǎn)生，或由于基因突變的異常表現(xiàn)通過遺傳育種保留下來的動物模型。利用這類動物疾病模型來研究人類疾病的最大優(yōu)點，就是疾病的發(fā)生、發(fā)展與人類相應(yīng)的疾病很相似，均是在自然條件下發(fā)生的疾病，其應(yīng)用價值就很高。如自發(fā)性高血壓大鼠、中國地鼠的自發(fā)性糖

15、尿病、肥胖癥小鼠等。28應(yīng)用實例應(yīng)用實例29抗疾病型動物模型抗疾病型動物模型是指特定的疾病不會在某種動物身上發(fā)生，從而可以用來探討為何這種動物對該疾病有天然的抵抗力。如哺乳動物均易感染血吸蟲病，但居住于洞庭湖流域的東方田鼠卻不能復(fù)制血吸蟲病。生物醫(yī)學(xué)動物模型生物醫(yī)學(xué)動物模型是指利用健康動物生物學(xué)特征來提供人類疾病相似表現(xiàn)的疾病模型。如：沙鼠缺乏完整的基底動脈環(huán)，是研究中風(fēng)的理想動物；兔胸腔的特殊結(jié)構(gòu)30按系統(tǒng)范圍分類按系統(tǒng)范圍分類：1 1、疾病的基本病理過程動物模型、疾病的基本病理過程動物模型2 2、各系統(tǒng)疾病動物模型、各系統(tǒng)疾病動物模型31疾病的基本病理過程動物模型疾病的基本病理過程動物模型

16、 是指各種疾病共同性的一些病理變化過程模型。 疾病的基本病理過程：致病因素在一定條件下作用于動物，使動物組織、器官或全身造成一定病理損傷，出現(xiàn)各種功能、代謝和形成結(jié)構(gòu)的變化，其中有些變化是各種疾病都可能發(fā)生的，不是某種疾病所特有的一些變化，如發(fā)熱、缺氧、水腫、炎癥、休克、彌漫性血管內(nèi)凝血、電解質(zhì)紊亂、酸堿平衡障礙等。32各系統(tǒng)疾病動物模型各系統(tǒng)疾病動物模型 是指與人類各系統(tǒng)疾病相應(yīng)的人類疾病動物模型。 如心血管、呼吸、消化、造血、泌尿、生殖、內(nèi)分泌、神經(jīng)、運動等系統(tǒng)疾病模型，還包括各種傳染病、寄生蟲病、地方病、維生素缺乏病、物理損傷性疾病、職業(yè)病和化學(xué)中毒性疾病的動物模型。33按模型種類分類按

17、模型種類分類： 疾病模型的種類包括整體動物、離體器官和組織、細(xì)胞株等。整體動物模型是常用的疾病模型之一，也是研究人類疾病的常用手段。34按中醫(yī)藥體系分類按中醫(yī)藥體系分類 根據(jù)中醫(yī)證分類，動物模型可分為陰虛、陽虛動物模型、氣虛動物模型、血虛動物模型、脾虛和腎虛動物模型、厥脫證動物模型等。按中藥理論分類，人類疾病動物模型包括解表藥動物模型，清熱藥、瀉下藥、祛風(fēng)濕藥、利水滲濕、溫里藥、止血藥、止咳藥、化痰藥、平喘藥、安神藥、平肝息風(fēng)藥、補益藥、理氣藥、活血化瘀藥等動物模型。 354.4.動物模型的選擇動物模型的選擇 物種 遺傳背景 品系 性別 年齡 動物級別36動物動物模型的選擇模型的選擇: :物種

18、物種常見的模式動物常見的模式動物 線蟲 果蠅 斑馬魚 小鼠37線蟲線蟲38 線蟲模型對基礎(chǔ)和應(yīng)用生物學(xué)產(chǎn)生了巨大的推動作用, 并直接導(dǎo)致了細(xì)胞凋亡現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)。果蠅果蠅39雙翅目昆蟲，生活史短，易飼養(yǎng)，繁殖快，染色體少，突變型多，個體小，是一種很好的遺傳學(xué)實驗材料。斑馬魚斑馬魚40斑馬魚產(chǎn)卵量多、繁殖迅速、胚胎通體透明, 是進(jìn)行胚胎發(fā)育機理和基因組研究的好材料。小鼠小鼠41Mouse Genome ProjectKOMP&EUCOMMIMPC 小鼠是由小家鼠演變而來。它廣泛分布于世界各地，經(jīng)長期人工飼養(yǎng)選擇培育，已育成1000多近交系和獨立的遠(yuǎn)交群。早在17世紀(jì)就有人用小鼠做實驗，現(xiàn)已成為使用量

19、最大、研究最詳盡的哺乳類實驗動物。動物動物模型的選擇模型的選擇: :遺傳背景遺傳背景 近交系 遠(yuǎn)交系 F1雜交系42近交系近交系 近交系：經(jīng)至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配培育而成，品系內(nèi)所有個體都可追溯到起源于第20代或以后代數(shù)的一對共同祖先。 經(jīng)連續(xù)20代以上親代與子代交配與全同胞兄妹交配有等同效果。 基因高度一致，表型相近43常見近交系常見近交系44C57BL/6JBALB/cJ129遠(yuǎn)交系(封閉群） 以非近親交配方式進(jìn)行繁殖生產(chǎn)的一個實驗動物種群，在不從其外部引入新個體的條件下，至少連續(xù)繁殖4 代以上，封閉群亦稱遠(yuǎn)交群。 基因組成復(fù)雜。45常見遠(yuǎn)交系 ICR小鼠 KM小鼠 Wistar大

20、鼠46雜交系雜交系 雜交系:兩個不同近交系交配后生產(chǎn)的第一代 優(yōu)點:基因型和表型一致;雜交優(yōu)勢;可以接受來自雙親品系的器官移植 缺點:不能自我維持品系延續(xù) F1雜交系命名：B6CBF1 47非模式動物非模式動物48動物動物模型的選擇模型的選擇: :品系品系 近交系 品系不同，表型不同495001020300153060120Glucose(mmol/L）Time（min）Glucose ToleranceB6N-MaleB6J-MaleB6N-FemaleB6J-Female動物動物模型的選擇模型的選擇: :性別性別 不同性別的動物對同一藥物的敏感程度是有差異的，對各種刺激的反應(yīng)也不一致，雌性

21、動物性周期不同階段和懷孕、授乳時的機體反應(yīng)性有較大的改變。 有人分析149種毒物對不同性別大小鼠的毒性，發(fā)現(xiàn)雌性的敏感性稍大于雄性。如實驗無特殊要求應(yīng)選擇雌雄各半做實驗，以避免因性別差異所造成的結(jié)果誤差。51動物動物模型的選擇模型的選擇: :年齡年齡 年齡是重要的生物量，動物的解剖生理特征和反應(yīng)性隨年齡增加而發(fā)生明顯的變化。一般幼年動物比成年動物敏感。老年動物的代謝功能低下，反應(yīng)不靈敏，一般不選用。 對毒物反應(yīng)的年齡差異，可能與解毒酶活性有關(guān)。人類胎兒時期缺乏這些酶，對毒物敏感，新生兒8周內(nèi)達(dá)到成人水平。 實驗動物年齡與體重一般成正相關(guān)，大小鼠可根據(jù)體重推算年齡。體重和飼養(yǎng)管理密切相關(guān)。52動

22、物模型的選擇動物模型的選擇: :動物級別動物級別 普通級普通級Conventional Animal(CV)不攜帶所規(guī)定的人畜共患病病原和動物烈性傳染病的病原。 清潔級清潔級Clean Animal(CL)除普通動物應(yīng)排除的病原外，不攜帶對動物危害大和對科學(xué)研究干擾大的病原。 無特定病原體動物無特定病原體動物Specific Pathogen Free Animal(SPF)是指機體內(nèi)無特定的微生物和寄生蟲存在的動物。 無菌動物無菌動物Germ Free Animal(GF)無可檢出的一切生命體。53病毒檢測項目病毒檢測項目54動物等級動物等級病病 毒毒小鼠小鼠無無菌菌動動物物無無特特定定病病

23、原原體體動動物物清清潔潔動動物物淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒 Lymphocytic Choriomeningitis Virus (LCMV)漢坦病毒漢坦病毒 Hantavirus (HV)鼠痘病毒鼠痘病毒 Ectromelia Virus (Ect.)小鼠肝炎病毒小鼠肝炎病毒 Mouse Hepatitis Virus (MHV)仙臺病毒仙臺病毒 Sendai Virus (SV)小鼠肺炎病毒小鼠肺炎病毒 Pneumonia Virus of Mice (PVM)呼腸孤病毒呼腸孤病毒型型 Reovirus type (Reo-3)小鼠細(xì)小病毒小鼠細(xì)小病毒 Minute

24、Virus of Mice (MVM)小鼠腦脊髓炎病毒小鼠腦脊髓炎病毒 Theilers Mouse Encephalomyelitis Virus(TMEV)小鼠腺病毒小鼠腺病毒 Mouse Adenovirus (Mad)多瘤病毒多瘤病毒 Polyoma Virus (POLY)無任何可查到的病毒無任何可查到的病毒 注：必須檢測項目，要求陰性；必要時檢查項目，要求陰性。注：必須檢測項目，要求陰性；必要時檢查項目，要求陰性。病原菌檢測項目病原菌檢測項目55動物等級動物等級病病 原原 菌菌小鼠小鼠無無菌菌動動物物無無特特定定病病原原體體動動物物清清潔潔動動物物沙門菌沙門菌 Salmonella

25、 spp單核細(xì)胞增生性李斯特桿菌單核細(xì)胞增生性李斯特桿菌 Listeria monocytogenes假結(jié)核耶爾森菌假結(jié)核耶爾森菌 Yersinia pseudotuberculosis小腸結(jié)腸炎耶爾森菌小腸結(jié)腸炎耶爾森菌 Yesinia enterocolitica皮膚病原真菌皮膚病原真菌 Pathogenic dermal fungi念珠狀鏈桿菌念珠狀鏈桿菌 Streptobacillus moniliformis支氣管鮑特桿菌支氣管鮑特桿菌 Bordetella bronchiseptica支原體支原體 Mycoplasma spp鼠棒狀桿菌鼠棒狀桿菌 Corynebacterium k

26、utscheri泰澤病原體泰澤病原體 Tyzzers organism大腸埃希菌大腸埃希菌O115 a,C,K(B)Escherichia coli O115 a,C,K(B) 嗜肺巴斯德桿菌嗜肺巴斯德桿菌 Pasteurella pneumotropica肺炎克雷伯桿菌肺炎克雷伯桿菌 Klebsiella pneumoniae金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌 Staphylococcus aureus肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌 Streptococcus pnemoniae乙型溶血性鏈球菌乙型溶血性鏈球菌 -hemolyticstreptococcus綠膿桿菌綠膿桿菌 Pseudomonas aeru

27、ginosa無任何可查到的細(xì)菌無任何可查到的細(xì)菌 注：必須檢測項目，要求陰性；必要時檢查項目，要求陰性。注：必須檢測項目，要求陰性；必要時檢查項目，要求陰性。寄生蟲檢測項目寄生蟲檢測項目56動物等級動物等級寄寄 生生 蟲蟲小鼠小鼠無無菌菌動動物物無無特特定定病病原原體體動動物物清清潔潔動動物物體外寄生蟲（節(jié)肢動物）體外寄生蟲（節(jié)肢動物）Ectoparasites弓形蟲弓形蟲Toxoplasma gondii兔腦原蟲兔腦原蟲 Encephalitozoon cuniculi卡氏肺孢子蟲卡氏肺孢子蟲 Pneumocystis carinii全部蠕蟲全部蠕蟲 All Helminths鞭毛蟲鞭毛蟲

28、Flagellates纖毛蟲纖毛蟲 Ciliates無任何可查到的寄生蟲無任何可查到的寄生蟲 注：必須檢測項目，要求陰性；必要時檢查項目，要求陰性。注：必須檢測項目，要求陰性；必要時檢查項目，要求陰性。屏障環(huán)境指標(biāo)（屏障環(huán)境指標(biāo)（SPFSPF級以上）級以上）57項項 目目指指 標(biāo)標(biāo)溫度，20-26相對濕度，4070換氣次數(shù)， 次/h1020*氣流速度， m/s0.10.2壓強梯度， Pa2050*空氣潔凈度， 級10000落下菌數(shù)，個/皿 3氨濃度，mg/m3 14噪聲，dB 60照度，lx工作照度150300動物照度1520晝夜明暗交替時間，h12/12總結(jié)：總結(jié)：動物模型的選擇動物模型的選

29、擇58物種近交系 or 遠(yuǎn)交系品系性別年齡動物級別實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康腜ARTPART IIII遺傳工程動物遺傳工程動物模型模型59基因工程改造基因工程改造 轉(zhuǎn)基因（Transgene） 基因敲除（Knockout） 全敲（Conventional Knockout） 條件性基因敲除（Conditional knockout） 基因敲入（Knockin） CRISPR/Cas9 誘導(dǎo)性調(diào)控（Inducible）601.1.轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)基因61 過表達(dá)外源基因 隨機插入 表達(dá)量與插入位點，插入量相關(guān)轉(zhuǎn)基因原件轉(zhuǎn)基因原件 Promoter CDS polyA IRES eGFP，tdTomato，YFP lacZ tTA/rtTA622.2.基因敲除基因敲除63Embryonic Stem Cells(ES Cells) 來源：囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 全能性 未分化狀態(tài) Germline Transmission Potential64ES Cell Lines 改造后適合