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文檔簡介

1、. 纖維素酶活力測定（3,5-二硝基水楊酸法）姓名：高超 年級：13級生科三班 學號：201300140020同組者：樊曉航一， 實驗目的：1， 學習掌握光度計的使用；2， 學習用 3,5-二硝基水楊酸法測定纖維素酶活力二，實驗原理：1、3,5-二硝基水楊酸法測纖維素酶活力的原理 纖維素酶水解纖維素，產生纖維素二糖、葡萄糖等還原糖，能將 3,5-二硝基水楊酸中 硝基還原成橙色的氨基化合物，利用比色法測定還原物生成量來表示酶的活力。 2、3,5-二硝基水楊酸法測還原糖的原理 還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其他產物，3,5-二硝基水楊酸則被還原成棕紅 色的 3-氨基-5-硝基水楊酸。在過量的

2、 NaOH 堿性溶液中此化合物呈橘紅色，在 540nm 處有 最大吸收， 在一定的濃度范圍內還原糖的量與光吸收值呈線性關系， 利用比色法可以測定樣 品中還原糖的含量。三，實驗器材：器材; 比色管、水浴鍋、電爐、分光光度計、容量瓶 100ml、燒杯、移液槍試劑 :1、3,5-二硝基水楊酸試劑,2、0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC)水溶液，溶解后成膠裝液，靜置過夜，使用前搖勻。3、酶液（10ug/ml）四，實驗步驟：1 ，標準曲線的繪制：在還原糖實驗中已做曲線如下：2，. 空白管的測定:取1ml酶液，沸水浴5分鐘，冷卻加3ml0.5%CMC，與樣品管同時放入50度水浴30分鐘。其它操作同樣

3、品管。 3. 樣品的測定：取0.5%羧甲基纖維素鈉溶液3ml，酶液1ml分別加入到三只比色管中標記為1，2，3，于50度水浴中糖化30分鐘，取出，立即于沸水浴中煮沸10分鐘使酶失活，得糖化液，冷卻加入3ml顯色液，再沸水浴10分鐘，冷卻后加水定容至25ml，混勻，550nm測OD值4，測得的實驗值如下;空白管：01號管：0.4262號管：0.4033號管：0.402五，試驗結果分析：由三組平行實驗結果，可用0.403帶入計算得0.561mg/ml,所以在30分鐘內生成的還原糖為14.022mg;酶活力計算公式為：（14.022×100）/30=46.74六，注意事項：1，在測定OD值過程中，繪制標準曲線時要用1號葡萄糖標準液（葡萄糖濃度為0）調零，測定樣品OD值時要用樣品空白液調零。從實驗原理上看，這樣做的目的是：無論是標準液還是樣品液，都要去除葡萄糖外的其他各種成分的對OD值的影響。得到的標

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