實驗七_稀釋平板計數(shù)法及土壤中真菌的分離純化)

1、實驗七實驗七 稀釋平板計數(shù)法及土壤中真稀釋平板計數(shù)法及土壤中真菌的分離純化菌的分離純化一、實驗目的一、實驗目的l掌握活菌計數(shù)的基本原理及方法l掌握從樣品中分離目的微生物的原理及方法二、實驗原理二、實驗原理-稀釋平皿計數(shù)法稀釋平皿計數(shù)法l將微生物細胞充分稀釋到單個分散，把這些單個分散的細胞均勻涂布在平皿培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后長出的菌落肉眼可見，每個菌落都由原液中單個細胞發(fā)育而來，計算菌落數(shù)，通過公式可以求出單位原樣品中的活菌數(shù)。l每ml(g)樣品中的活菌數(shù)=（每皿菌落數(shù)平均值/取樣體積）稀釋倍數(shù)二、實驗原理二、實驗原理-土壤中真菌的分離純化土壤中真菌的分離純化l馬丁孟加拉紅-鏈霉素培養(yǎng)基馬丁培養(yǎng)基孟加

2、拉紅鏈霉素三、實驗器材三、實驗器材（一）培養(yǎng)基1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基2、馬丁孟加拉紅-鏈霉素培養(yǎng)基（二）其他1、無菌培養(yǎng)皿2、無菌吸管3、無菌水（三）儀器1、超凈工作臺2、玻璃刮鏟3、酒精棉球四、實驗步驟四、實驗步驟-稀釋平板計數(shù)法稀釋平板計數(shù)法1 1、熔化培養(yǎng)基、熔化培養(yǎng)基2 2、倒平皿、倒平皿3 3、梯度稀釋法稀釋原菌樣品、梯度稀釋法稀釋原菌樣品四、實驗步驟四、實驗步驟4 4、涂平皿：、涂平皿： 選取選取1/101/106 6,1/10,1/107 7,1/10,1/108 8三個稀釋度計數(shù)，每皿取三個稀釋度計數(shù)，每皿取菌液菌液0.1ml0.1ml，用玻璃刮鏟涂布均勻，每個稀釋度做一，用玻

3、璃刮鏟涂布均勻，每個稀釋度做一個重復。個重復。5 5、3737倒置培養(yǎng)倒置培養(yǎng)2 2天天6 6、計數(shù)：、計數(shù)：每每ml原菌樣品中微生物的活細胞數(shù)（菌落形成數(shù)，原菌樣品中微生物的活細胞數(shù)（菌落形成數(shù)，CFU（同一稀釋度平板上菌落平均數(shù)（同一稀釋度平板上菌落平均數(shù)稀釋倍數(shù)）稀釋倍數(shù)）/原菌樣品體積原菌樣品體積（ml）菌落計數(shù)規(guī)則：菌落計數(shù)規(guī)則：（一）選擇平均菌落數(shù)在（一）選擇平均菌落數(shù)在30300間的平板間的平板1、只有一個稀釋度符合，以該稀釋度的、只有一個稀釋度符合，以該稀釋度的平均菌落數(shù)平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告；乘以稀釋倍數(shù)報告；2、有兩個稀釋度符合，取決于二者比值（高稀釋度的菌落數(shù)除以低稀

4、釋、有兩個稀釋度符合，取決于二者比值（高稀釋度的菌落數(shù)除以低稀釋度的菌落數(shù)的值）：度的菌落數(shù)的值）： 1）若）若0.5比值比值2，以兩稀釋度的菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)所得的值的均值報，以兩稀釋度的菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)所得的值的均值報告。告。 2）若）若2比值或比值比值或比值 0.5，則取其中較少的菌落總數(shù)進行報告。，則取其中較少的菌落總數(shù)進行報告。（二）所有菌落數(shù)均不在（二）所有菌落數(shù)均不在30300間間以最接近以最接近30或或300的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)1、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均大于、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均大于300，則按稀釋倍數(shù)最高的平均菌，則按稀釋倍數(shù)最高的平均菌落數(shù)乘

5、以稀釋倍數(shù)報告；落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告；2、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均小于、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均小于30，則按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落，則按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告；數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告；四、實驗步驟四、實驗步驟-從土壤里分離真菌從土壤里分離真菌1 1、熔化培養(yǎng)基、熔化培養(yǎng)基2 2、倒平皿、倒平皿3 3、捻碎土樣，將土樣溶解在、捻碎土樣，將土樣溶解在90ml90ml無菌水三角瓶中無菌水三角瓶中4 4、梯度稀釋法稀釋土樣、梯度稀釋法稀釋土樣10g90ml10-110-210-310-410-54 4、涂平皿：、涂平皿： 每個稀釋度均需要涂布平皿，每皿取菌液每個稀釋度均需要涂布平皿，每皿取菌液0.1ml0.1ml，用玻璃刮鏟涂布均勻。用玻璃刮鏟涂布均勻。5 5、28倒置培養(yǎng)倒置培養(yǎng)37天天6 6、觀察并描述真菌菌落特征、觀察并描述真菌菌落特征五、實驗結(jié)果及分析五、實驗結(jié)果及分析l稀釋平皿計數(shù)法：稀釋平皿計數(shù)法：稀釋倍數(shù)106107108菌落數(shù)每每ml原菌樣品中微生物的活細胞數(shù)（菌落形成數(shù)，原菌樣品中微生物的活細