第06章細(xì)菌的染色與形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察

1、細(xì)菌的染色與形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察細(xì)菌的染色與形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察生物工程系 龍中兒細(xì)菌染色法死菌正染色負(fù)染色莢膜染色法等簡單染色法鑒別染色法革蘭氏染色法抗酸性染色法芽孢染色法姬姆薩染色法活菌用美藍(lán)或TTC（氧化三苯基四氮唑）等染色革蘭氏染色丹麥醫(yī)生Hans Christian Gram于1884年發(fā)明的一種鑒別不同類型細(xì)菌的染色方法。1用堿性染料結(jié)晶紫對菌液涂片進(jìn)行初染用堿性染料結(jié)晶紫對菌液涂片進(jìn)行初染2用碘溶液進(jìn)行媒染用碘溶液進(jìn)行媒染，其作用是提高染料和細(xì)，其作用是提高染料和細(xì) 胞間的相互作用從而使二者結(jié)合得更牢固。胞間的相互作用從而使二者結(jié)合得更牢固。3用乙醇或丙酮沖洗進(jìn)行脫色。用乙醇或丙酮沖洗進(jìn)行脫

2、色。在經(jīng)歷脫色后在經(jīng)歷脫色后 仍將結(jié)晶紫保留在細(xì)胞內(nèi)的為革蘭氏陽性細(xì)仍將結(jié)晶紫保留在細(xì)胞內(nèi)的為革蘭氏陽性細(xì) 菌，而革蘭氏陰性細(xì)菌的結(jié)晶紫被洗掉，細(xì)菌，而革蘭氏陰性細(xì)菌的結(jié)晶紫被洗掉，細(xì) 胞呈無色。胞呈無色。4用一種與結(jié)晶紫具有不同顏色的堿性染料對用一種與結(jié)晶紫具有不同顏色的堿性染料對 涂片進(jìn)行復(fù)染。涂片進(jìn)行復(fù)染。例如沙黃，它使原來無色的例如沙黃，它使原來無色的 革蘭氏陰性細(xì)菌最后呈現(xiàn)桃紅到紅色，而革革蘭氏陰性細(xì)菌最后呈現(xiàn)桃紅到紅色，而革 蘭氏陽性細(xì)菌繼續(xù)保持深紫色蘭氏陽性細(xì)菌繼續(xù)保持深紫色革蘭氏染色（的過程）革蘭氏染色一、實驗?zāi)康?學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡單染色法和革蘭氏染

3、色法的基本原理及其染色技術(shù) 認(rèn)識微生物的基本形態(tài) 了解革蘭氏染色法在細(xì)菌分類中的重要性 學(xué)習(xí)并掌握顯微鏡油鏡的原理和使用方法二、實驗方法1. 簡單染色法涂片干燥固定染色水洗干燥鏡檢2. 革蘭氏染色法二、實驗方法涂片干燥固定初染水洗媒染水洗脫色水洗復(fù)染水洗鏡檢1min1min0.5min3. 顯微鏡油鏡的使用二、實驗方法3. 顯微鏡油鏡的使用二、實驗方法顯微鏡的安裝光源調(diào)節(jié)目鏡調(diào)節(jié)聚光器數(shù)值孔徑的調(diào)節(jié)顯微觀察低倍鏡觀察高倍鏡觀察油鏡觀察顯微鏡用畢后的處理顯微鏡用畢后的處理： 上升鏡筒，取下載玻片 用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油 用蘸有少量二甲笨的擦鏡紙擦去鏡頭上殘留的油跡，然后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留

4、的二甲苯 用擦鏡紙清潔其他物鏡和目鏡，用稠布清潔顯微鏡的金屬部件 顯微鏡各部件還原三、實驗內(nèi)容 細(xì)菌的簡單染色法染色 細(xì)菌的革蘭氏染色法染色四、實驗報告 結(jié)果報告：根據(jù)細(xì)菌革蘭氏染色觀察結(jié)果，繪出兩種或兩種以上細(xì)菌的形態(tài)圖（說明各菌的形狀、顏色和革蘭氏染色反應(yīng)，需要當(dāng)場完成上交）。你認(rèn)為制備細(xì)菌染色標(biāo)本時，尤其應(yīng)該注意哪些環(huán)節(jié)？為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡進(jìn)行觀察？如果你的涂片未經(jīng)熱固定，將會出現(xiàn)什么問題？如果加熱溫度過高、時間過長，又會怎么樣呢？你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？進(jìn)行革蘭氏染色時，為什么特別強(qiáng)調(diào)菌齡不能太老，用老齡細(xì)菌染色會出現(xiàn)什么問題？請設(shè)計一實驗方法驗證你的革蘭氏