植物化學(xué)保護(hù)試驗指導(dǎo)

1、基本原理：昆蟲在取食正常食物的同時將藥劑攝入消化道，經(jīng)腸壁細(xì)胞吸收進(jìn)入血液，隨血液循環(huán)到達(dá)作用部位而使昆蟲中毒。它利用昆蟲的貪食性，因此要盡量避免藥劑與昆蟲體壁接觸而產(chǎn)生其它毒殺作用。測定方法有（1）液滴飼喂法；（2）口腔注射法；（3）葉片夾毒法。一、葉片夾毒法基本原理：在兩葉片中間均勻地夾入一定量的殺蟲劑，飼喂目標(biāo)昆蟲，藥劑隨葉片被昆蟲取食，然后由被吞食的葉片面積，計算出吞食的藥量。優(yōu)點是可以減少目標(biāo)昆蟲與殺蟲劑的接觸，避免發(fā)生觸殺作用，操作方便，結(jié)果比較精確。葉片夾毒法只適用于植食性的，取食量大的咀嚼口器目標(biāo)昆蟲，如粘蟲、蝗蟲.玉米螟等。l、實驗材料：藥劑：90減百蟲溶劑：丙酮試蟲：菜青蟲

2、或斜紋夜娥幼蟲：3050頭用具：培養(yǎng)皿3050個，木塞鉆（口徑2cm）,微量注射器10微升1支，漿糊或明膠生物材料：甘藍(lán)葉、蔗麻葉等。2、實驗方法：用木塞鉆制成直徑2cm的圓心葉片60片，把圓葉片放在濕潤的培養(yǎng)皿中待用。夾毒葉的制備：用丙酮將敵百蟲稀釋成有效成分為0.1%的藥液，用微量注射器吸敵百蟲丙酮液10微升，均勻滴在葉.2.片上，計算出每張圓葉片藥量（mg/厘米）。用漿糊（或明膠）涂在無藥的圓葉片上，兩相對合，即成夾毒葉片，同時制備不夾毒葉片24片作對照。每培養(yǎng)皿中放一片，另放一團(tuán)濕棉花或濕水草紙一小塊保濕，然后編號。采回的試蟲先饑餓數(shù)小時，每頭蟲稱重，每培養(yǎng)皿放一頭蟲，飼喂夾毒葉片。3

3、、結(jié)果觀察及計算：觀察試蟲取食情況，控制食葉量一部份蟲食葉片1/3,一部分蟲食葉片1/2,一部分食葉片3/4或全部葉片。然后取出剩余的夾毒葉片，飼喂新鮮葉片，經(jīng)3-24小時后，檢查死亡率。食量的計算：將剩余的葉片放在直徑2cm的方格紙上，計數(shù)被吃去的方格數(shù)（1毫米2/1格），然后按每張圓葉片上的總藥量，計算每一方格的劑量，即可求出取食藥量。從而求得每頭蟲單位體重所取食的劑量（mg或彳g/g體重）。致死中量的計算：按每頭蟲食劑量的大小順序排列。將供試?yán)ハx分為三組（1）生存組；（2）中間組（有生存的，也有死亡的）；（3）死亡組；在計算L%時只用中間組，所以設(shè)計濃度時，生存組和死亡組反應(yīng)試蟲數(shù)目越少

4、越好。中間組又分生存部分和死亡部分。£（中間組活蟲劑量工（中間組死蟲劑量）A=中間組活蟲總數(shù)B=中間組死蟲總數(shù)AB致死中量（LN）=2（單位：mg或微g/g體重）藥劑對昆蟲的劑量一反應(yīng)記錄表實驗報告：寫出供試藥劑對供試?yán)ハx劑量反應(yīng)的實驗報告。實驗八殺蟲劑內(nèi)吸作用毒力測定基本原理:將藥劑接觸到植物的某一部分（如根、莖、葉、種子），藥劑可滲入植物體內(nèi)，并隨體液傳導(dǎo)到全株或植株的某一部分，在一定時間內(nèi)，讓昆由取食沒有直接用藥的植物組織，觀察其致毒反應(yīng)。本實驗采用包扎法和藥液培養(yǎng)法，目的是通過實驗了解藥劑的內(nèi)吸性能并初步掌握內(nèi)吸殺蟲劑的測定原理及方法。實驗材料:供試?yán)ハx：花生朗蟲：供試植物：

5、花生苗供試藥劑：50%樂果EC,25%螟蛉畏EC,50%殺螟松EC用具：燒壞（250ml）,試管（2X180）,移液管，試管架、藥棉、塑料布、剪刀、紙?zhí)椎取嶒灧椒?藥劑配制：將三種供試藥劑配成有效含量為0.5%的乳液各50ml。內(nèi)吸測定方法：1、涂抹包扎法：挑選生長發(fā)育一致，葉片帶財量較一致（20-25頭）的花生苗12株，每株在頸部包扎一圈脫脂棉，用移液管吸取上述藥液0.2ml滴于脫脂棉上。外部用塑料布纏繞后，用線結(jié)扎，防止藥劑蒸汽揮發(fā)，每一藥劑重復(fù)三次，每處理一株，對照用清水、重復(fù)三次，將已施藥的花生苗用紙袋套住，插在盛有清水的試管中，排列在試管架上，各處理間不要接觸，24小時后解開紙袋，

6、統(tǒng)計助蟲平均死亡率，比較各藥劑的內(nèi)吸毒效。2、藥液培養(yǎng)法：先將供試藥配成10ppm水溶液，分別注入試管內(nèi)，每管20ml,對照用清水，重復(fù)三次，挑取生長發(fā)育一致，葉片帶財量較一致（2025頭）的花生苗12株，插入液面10cm處，精確計算苗上朗蟲的數(shù)目后，用紙?zhí)鬃。?4小時后統(tǒng)計平均死亡率。實驗報告:將實驗結(jié)果整理成表，并比較幾種藥劑的內(nèi)吸作用，判斷哪種藥劑不是內(nèi)吸劑。實驗九殺蟲劑熏蒸作用毒力測定基本原理:在適當(dāng)氣溫下，利用有毒的氣體、液體或固體揮發(fā)產(chǎn)生的蒸氣毒殺害蟲（或病菌），稱為熏蒸。熏蒸時，毒劑主要以氣態(tài)從昆蟲的氣門進(jìn)入氣管，再分布到全身的氣管，然后到達(dá)神經(jīng)作用部位.因此測定熏蒸毒力的裝置都

7、必須基于同一原則，即試蟲在一密閉容器中不能和固態(tài)或液態(tài)的毒劑直接接觸。毒劑只能以氣態(tài)和試蟲接觸。常見熏蒸作用的測定方法有二重皿法、干燥器法、廣口瓶法、藥紙熏蒸法和三角瓶法：實驗材料:供試藥劑；（1）50椒敵畏EG（2）50叫拉硫磷EC,（3）90%敵百蟲結(jié)晶。試應(yīng)；赤擬谷盜用具：培養(yǎng)皿12個，干燥器4個，移液管0.2ml13支,濾紙、量筒、燒杯、紗布等。實驗方法:1、二重皿熏蒸法：藥劑配制：每組實驗藥劑稀釋成有效f）一上皿成分含量0.5%藥液，各20ml（用水稀友久一蟲釋）。.紗布處理；在培養(yǎng)皿底內(nèi)加入5ml供試藥液，三工一一藥皿口蓋紗布或紗網(wǎng)蓋1張，將試蟲20飛下皿30頭放在紗布或紗網(wǎng)上，再

8、蓋相同口徑的培養(yǎng)皿底，使其密閉對合（如圖），各藥劑重復(fù)3次，對照用清水，半小時、1小時、5小時后，觀察計算平均死亡率。2、干燥器熏蒸法：取供試蟲60頭分放三個小燒杯中，杯口用紗布扎緊（三個重復(fù)）放在干燥器磁板上，再將供試藥劑稀釋成有成分含量為0.1%藥液20ml,放入干燥器底部，對照用清水，蓋好干燥器蓋，一定時間后，在通風(fēng)處迅速取出試蟲，統(tǒng)計死亡率。3、廣口瓶法：用兩個廣口瓶（250ml）,在一個廣口瓶中放入一定數(shù)量的目標(biāo)昆蟲，另一個廣口瓶中放入定量藥劑，用橡皮塞和多個玻璃管把廣口瓶連接，震蕩，使藥劑揮發(fā)，氣體均勻分散，作用一定時間后，將目標(biāo)昆蟲移入干凈器皿中，放入新鮮飼料，蓋上紗布，規(guī)定時間

9、內(nèi)觀察目標(biāo)昆蟲的中毒死亡情況。4、藥紙熏蒸法：在三角瓶（500-1000ml）的瓶塞上，用大頭針固定0.5-1.0cm的濾紙片，在濾紙片上滴加1-2ul的敵敵畏原油或其他熏蒸劑，然后將麻醉的家蠅放入瓶內(nèi)，蓋上瓶塞，25c溫度下，一定時間后，觀察試蟲的擊倒中毒反應(yīng)。5、三角瓶法：在三角瓶底部放入含有一定量熏蒸劑的濾紙片（4X4cm）,用紗布袋包一定數(shù)量的試蟲，然后，把布袋固定在瓶塞上，讓布袋懸掛在三角瓶中，25c溫度下，一定時間后，觀察試蟲的中毒和死亡情況。實驗報告:列表記錄試驗結(jié)果，比較各種藥劑的毒力并分析哪種供試藥劑沒有熏蒸作用。第四部分除草劑生物測定除草劑的生物測定技術(shù)是指利用生物體（主要

10、指有害生物）對除草劑的反應(yīng)，來測定除草劑的毒性及效果的基本方法，是發(fā)展除草劑生產(chǎn)和使用不可缺少的工作，是研究除草劑特性的重要手段，也是水中、土壤中殘留除草劑分析的有用工具。實驗十九種子萌發(fā)鑒定指示植物的種子（常用黃瓜、高粱、燕麥）在藥劑處理過的砂土內(nèi)萌發(fā)，一般不以萌發(fā)率作為評判指標(biāo)，而是在萌發(fā)后一定時間內(nèi)測定根和莖的長度，并以此作評判標(biāo)準(zhǔn)。激素型除草劑，如2,4-D類，一般采用這種方法。在一定范圍內(nèi)，根和莖的伸長和除草劑的濃度呈相關(guān)性，因而可用作除草劑的定量測定，靈敏度較高。屬于這類的測定方法如下：1、除草劑培養(yǎng)皿法培養(yǎng)皿法簡單易行。國內(nèi)大多采用瓊脂、土、砂、濾紙為培養(yǎng)基質(zhì)，用敏感植物的根長抑

11、制率或芽長抑制率與藥劑濃度進(jìn)行回歸，從而測出藥劑的EC50O試驗中發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)皿測定土壤處理劑較為合適，但對莖葉處理劑的測定結(jié)果與田間試驗結(jié)果有較大的差異。本試驗通過用培養(yǎng)皿法測定土壤處理劑的活性。實驗材料培養(yǎng)皿、濾紙、稗草種子、保鮮膜、光照培養(yǎng)箱、乙草胺實驗方法1、 將稗草種子催芽34d,待稗草種子露白后備用。2、 把甲草胺用水按系列濃度稀釋法，稀釋成6個不同濃度的藥液。3、 在鋪有一張圓濾紙、直徑為9cm的培養(yǎng)皿中加入各個濃度的彳f測藥液5m1。4、 精選整齊剛露白的稗草種子8粒于培養(yǎng)皿中，蓋好保鮮膜。每個處理重復(fù)3次。5、 將培養(yǎng)皿放入LRH-250G型光照培養(yǎng)箱（廣東省醫(yī)療器械廠），在27

12、c下培養(yǎng)4d。6、 用空白作對照。結(jié)果整理用直尺測量稗草的芽長，精確到毫米。抑制率（%=對照組芽（根）長-處理組芽長對照組芽（根）長實驗報告:記錄實驗結(jié)果，完成實驗報告。求出抑制率,并計算EC50。2、黃瓜幼苗形態(tài)法黃瓜幼苗形態(tài)法是測定激素型除草劑和植物生長調(diào)節(jié)劑活性的經(jīng)典方法。測定原理是以不同劑量的藥劑所引起黃瓜幼苗形態(tài)上的不同變化來測定樣品活性。該法具有操作簡單，靈敏度高（可測出0.05ppm）的特點。將樣品配成一系列濃度的丙酮溶液，用直徑11cm的濾紙在其中浸透，取出吹干，放入直徑12cm的培養(yǎng)皿中，再在濾紙上鋪二張同樣大小的未浸藥的濾紙。挑選飽滿度一致黃瓜種子，在5%的漂白粉液中消毒半

13、小時，取出晾干，每皿排放20粒，并加入12ml蒸儲水（據(jù)該方法建立者Sudi測定，此時皿內(nèi)樣品的實際濃度比原來浸濾紙時降低10倍），蓋好皿蓋，置25c恒溫下黑暗培養(yǎng)6天，取出觀察黃瓜幼苗的形態(tài)。將2,4-D的一系列濃度下黃瓜幼苗形態(tài)畫成“標(biāo)準(zhǔn)圖譜”（就象化學(xué)分析中的標(biāo)準(zhǔn)曲線一樣），然后用測定樣品的黃瓜幼苗形態(tài)去和標(biāo)準(zhǔn)圖譜對比，就可確定2,4-D類除草劑的含量或比較待測樣品的除草活性大小。3、高粱法（皿內(nèi)法）高粱法適合于非光合作用抑制劑的生物測定。它具有操作簡便、培養(yǎng)期間不用管理、周期短，測定范圍廣，重現(xiàn)性好等優(yōu)點，因而被國內(nèi)外許多實驗室采用。先將高粱種子放在濕濾紙上，24c溫度下萌發(fā)1520h

14、,待長出胚芽12mHi時取用。配制一系列濃度的待測樣品溶液，將16mm某濃度的樣品溶液放入124g石英砂中，仔細(xì)拌均。將此濕的石英砂裝入9cm直徑的培養(yǎng)皿中，刮平使與皿邊對齊。選10粒準(zhǔn)備好的萌動高粱種子，排列于砂表面，胚部向上而幼根沿同一方向排成一行，蓋上皿中，將培養(yǎng)皿豎立傾斜15度放入24c溫箱，黑暗中經(jīng)1618h,將根尖的位置用蠟筆標(biāo)于皿蓋上，經(jīng)過24h,取出培養(yǎng)皿，從標(biāo)記處測量根延伸的長度，精確到毫米。上海植物生理所對此法作了些改進(jìn)：用直徑9cm的培養(yǎng)皿，裝滿干燥黃砂，刮平，每皿加入30ml藥液，正好使全皿干砂浸透，然后用有10個齒的“齒板”在皿的適當(dāng)位置輕輕壓出10個小坑，以便每皿能

15、排10粒根長12cm（選用根尖尚未長出根鞘者）的萌發(fā)高粱種子。為了縮短時間，在排種培養(yǎng)的前1天，讓上述準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿，置于34c保溫過夜，使砂溫提高，8h后即可劃道標(biāo)記幼根起點，再過1416小時，待對照根長30mm左右即可測量。吳文君采用小麥種子代替高粱，亦取得滿意結(jié)果，但對2,4-D類除草劑來說，小麥不如高粱敏感，其靈敏度比高粱差1個數(shù)量級。4、小麥根長法在直彳仝為9cm的培養(yǎng)皿內(nèi)鋪滿一層小玻璃球（直徑為0.5cm）,移入10ml不同濃度的待測藥液，放入10粒露白的小麥種子，重復(fù)三次，以蒸儲水為對照，在2025C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-7d后取出，測量根長，計算抑制率和IC50值。本法可用來比較殺單

16、子葉雜草的除草劑間的活力，如氟樂靈、除草通、綠麥隆等。5、稗草胚軸法在50ml燒杯中，加入5ml不同濃度的除草劑溶液，放入10粒發(fā)芽整齊、大小一致的稗草籽，在種子周圍撒些干凈石英砂，以防幼苗浮起。以蒸儲水為對照，重復(fù)3次，置于28-30C恒溫箱中培養(yǎng)，4d后測定稗草胚軸長度，計算IC50。本法適于測定氯乙酰胺類除草劑，如甲草胺、異丙甲草胺等，靈敏度可達(dá)0.01ppm。6、玉米法選取玉米種子在20c下黑暗催芽48h,得胚根長達(dá)15mm時，選均勻一致的種子，放人裝有含除草劑土樣的燒杯或培養(yǎng)皿中，保持適宜濕度，在20c下暗處培養(yǎng)5d后取出，測定根長。以系列標(biāo)準(zhǔn)濃度除草劑處理得到的根長制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品處理過的玉米所測結(jié)果與之比較，可測