實驗三 瓊脂免疫電泳實驗ppt課件

1、實驗三實驗三 瓊脂免疫電泳實驗瓊脂免疫電泳實驗實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?了解免疫電泳的原理和用途。 掌握免疫電泳的操作過程和方法。 掌握免疫電泳實驗結(jié)果的分析方法，并對粗提的蛋白進行檢測。 免疫電泳為區(qū)帶電泳與雙向免疫擴散的結(jié)合。先利用區(qū)帶電泳技術(shù)將不同電荷和分子量的蛋白抗原在瓊脂內(nèi)分離，然后在與電泳方向平行的方向上開槽，加入抗血清。37下使兩者擴散，各區(qū)帶蛋白在相應(yīng)的位置與抗體反應(yīng)形成弧形沉淀線。免疫電泳原理圖解見圖。實驗原理實驗原理免疫電泳原理圖解實驗材料：牛血清粗提蛋白瓊脂糖巴比妥緩沖液PH8.6，離子強度0.05）兔抗牛血清（1配制配制1.2的瓊脂，加熱使之融化。的瓊脂，加熱使之融化。 （巴比

2、妥緩沖液配制）（巴比妥緩沖液配制）（2吸取吸取34 mL瓊脂溶液，均勻涂布到載玻片上，注意瓊脂溶液，均勻涂布到載玻片上，注意要馬上用吸管尖把瓊脂表面整平，若有氣泡立刻除去，并立要馬上用吸管尖把瓊脂表面整平，若有氣泡立刻除去，并立即于中間橫放一根毛細(xì)管，待凝，制成即于中間橫放一根毛細(xì)管，待凝，制成2mm的瓊脂板。的瓊脂板。（3取打孔器在圖示的位置打孔圖），此二孔位置要對稱。取打孔器在圖示的位置打孔圖），此二孔位置要對稱。于酒精燈上小心烘烤，使瓊脂與玻璃板貼緊。于酒精燈上小心烘烤，使瓊脂與玻璃板貼緊。操作步驟操作步驟2mm2mm圖2 膠板打孔及挖槽示意圖（4用微量加樣器加入用微量加樣器加入1020

3、uL的粗提蛋白的粗提蛋白和牛血清和牛血清 ，不要溢出可加入指示劑），不要溢出可加入指示劑） 。（5把載玻片放到電泳槽中，倒入巴比妥緩沖液，把載玻片放到電泳槽中，倒入巴比妥緩沖液，瓊脂板兩端用濾紙與緩沖液搭橋，接通電源，電壓瓊脂板兩端用濾紙與緩沖液搭橋，接通電源，電壓10-12v/cm電泳電泳1-2h。（6樣品中有藍(lán)色染料，當(dāng)藍(lán)色接近另一端時，終樣品中有藍(lán)色染料，當(dāng)藍(lán)色接近另一端時，終止電泳，小心取出載玻片。止電泳，小心取出載玻片。（7用刀片在膠體的中央，劃兩道平行線。刀刻要用刀片在膠體的中央，劃兩道平行線。刀刻要深及底部，兩道平行線間隔不可大于深及底部，兩道平行線間隔不可大于3 mm。用大。用大頭針挑去瓊脂。頭針挑去瓊脂。（8加入人全血清，放入濕盒中，加入人全血清，放入濕盒中，37 下擴散下擴散24h。本卷須知本卷須知（1澆載玻片時，玻片應(yīng)保持水平，瓊脂 面要盡量鋪平。（2加樣應(yīng)一次加滿，并防止樣品溢出孔 外。（3電泳過程中注意防止發(fā)熱，以免影響 電泳結(jié)果。（4電泳時要使濾紙與凝膠密切接觸， 不可有縫隙。思考題思考題（1畫出沉淀線的形態(tài)、數(shù)量和位置，并予以簡要說明。（2與相關(guān)的免疫學(xué)試驗進行比較，探討免疫電泳的主要優(yōu)點。 PH8.6巴比妥緩沖液配制：巴比妥緩沖液配制： 巴比妥酸巴比妥酸 0.92g -100