畜禽繁殖與改良教案

1、 2014 學(xué)年 秋季 學(xué)期 第 16 周 總課時(shí)：2課程名稱畜禽繁殖與改良時(shí)間2014年12月1日星期星期一任課教師白緒珍職稱中學(xué)一級(jí)節(jié)次第5-6節(jié) 班 級(jí)三年級(jí)養(yǎng)殖班授課時(shí)數(shù) 2教具安排多煤體教學(xué)題目第9章 動(dòng)物繁殖新技術(shù)第一節(jié) 胚胎移植技術(shù)教學(xué)方法提問法、講授法、練習(xí)法教學(xué)內(nèi)容目標(biāo)要求教學(xué)內(nèi)容：掌握胚胎移植的生理基礎(chǔ)和處理程序掌握胚胎移植的基本原則了解現(xiàn)代動(dòng)物繁殖新技術(shù)重點(diǎn)難點(diǎn)：掌握胚胎移植的生理基礎(chǔ)和處理程序了解現(xiàn)代動(dòng)物繁殖新技術(shù)情感目標(biāo)能力點(diǎn)：培養(yǎng)學(xué)生熱愛生命、關(guān)愛生活的情趣專業(yè)素質(zhì)滲透點(diǎn)：通過講解“胚胎移植技術(shù)”讓學(xué)生了解生物界基本結(jié)構(gòu)的統(tǒng)一性，使學(xué)生初步建立唯物主義進(jìn)化論意識(shí)。【

2、教學(xué)過程組織】清點(diǎn)人數(shù)（12分鐘）復(fù)習(xí)導(dǎo)入：卵巢囊腫有哪幾種情況？（13分鐘）Ø 進(jìn)入新課一、胚胎移植的意義（ 20分鐘）1充分發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖潛力 縮短優(yōu)了良母畜的繁殖周期同時(shí)可產(chǎn)生更多的后代。2.縮短世代間隔，及早進(jìn)行后裔測(cè)定能 通過重復(fù)超數(shù)排卵，不斷移植，使后代總數(shù)大大地增加，可及早地對(duì)后代進(jìn)行后裔測(cè)定，MOET育種已成為現(xiàn)代育種工作的有力手段。3.增加雙胎率 在肉牛業(yè)和肉羊業(yè)中通過胚胎移植增加雙胎率。不但提高了供體母畜的繁殖率，同時(shí)也提高了受體母畜的繁殖率，從而大大提高了生產(chǎn)效率。4.保存品種資源 胚胎長期保存是保存動(dòng)物品種資源的理想方法。冷凍胚胎和冷凍精液共同構(gòu)成動(dòng)物優(yōu)良

3、性狀的基因庫。5.防止疾病傳播 在養(yǎng)豬業(yè)中，采用胚胎移植技術(shù)代替剖腹取仔的方法可培育無特異病原體（SPE）豬群。6.使不孕母畜獲得生育能力 對(duì)于不能妊娠的母畜，可以根據(jù)具體情況專門作為供體或受體，繼續(xù)發(fā)揮其繁殖作用。7.促進(jìn)基礎(chǔ)理論研究 胚胎移植技術(shù)為動(dòng)物繁殖生理學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、細(xì)胞學(xué)、胚胎學(xué)、免疫學(xué)、動(dòng)物育種學(xué)和進(jìn)化等學(xué)科開辟了新的試驗(yàn)研究途徑。8.滿足畜牧業(yè)現(xiàn)代化的需要 胚胎移植可以使優(yōu)良母畜的繁殖效率接近或達(dá)到生物學(xué)最高限度，并且能夠迅速改進(jìn)家畜的品質(zhì)。二、胚胎移植的基本原則（20分鐘）（一）胚胎移植前后供體和受體所處環(huán)境的同一性1.在分類學(xué)上的同屬性 在分類學(xué)上屬于同一個(gè)種。2.

4、生理上的一致性 一般供、受體發(fā)情同步差要求在±24h以內(nèi)。3.解剖部位的一致性 胚胎采自供體的輸卵管就移到受體的輸卵管，采自供體的子宮角就移至受體的子宮角。（二）胚胎發(fā)育的期限胚胎采集和移植的期限（胚胎日齡）不能超過發(fā)情周期黃體的壽命， （三）胚胎的質(zhì)量在胚胎移植全部操作過程中，胚胎不應(yīng)受任何不良因素的影響。（四）供、受體的狀況1.生產(chǎn)性能和經(jīng)濟(jì)價(jià)值 供體的生產(chǎn)性能要高于受體，經(jīng)濟(jì)價(jià)值要大于受體，這樣才能體現(xiàn)胚胎移植的優(yōu)越性。2.全身及生殖器官的生理狀況 供、受體應(yīng)健康、營養(yǎng)良好、體質(zhì)健壯，特別是生殖器官應(yīng)具有正常生理機(jī)能，否則會(huì)影響胚胎移植效果。三、胚胎移植技術(shù)（28分鐘）胚胎移植

5、的過程，在各種家畜基本相同，都是要經(jīng)過供體、受體的選擇，供體超排處理，受體同期發(fā)情處理，配種（輸精），收集胚胎（采卵）和移植胚胎（移卵）等步驟。（一）供體和受體的選擇1.供體的選擇（1）生產(chǎn)性能高，經(jīng)濟(jì)價(jià)值大，具備遺傳優(yōu)勢(shì)，在育種上有價(jià)值。（2）既往繁殖史正常，無遺傳缺陷，具有良好的繁殖能力，且分娩順利。（3）體質(zhì)健壯，膘情適度。2.受體的選擇 受體母畜可選用非優(yōu)良品種個(gè)體，但應(yīng)具有良好的繁殖性能和健康體況，可選擇與供體發(fā)情周期同步的母畜為受體。（二）藥品和器械的準(zhǔn)備1.藥品 FSH、HCG、PGF2a；麻醉劑；生鹽理水、75%酒精、2%碘酒、青霉素。2.器械 10ml和1ml注射器、手術(shù)刀、

6、剪子、鑷子、止血鉗、創(chuàng)布、縫合針、線及手術(shù)臺(tái)；沖胚管、移胚管、顯微鏡、表面皿、凹玻片、拔胚針等。（三）供體的超數(shù)排卵 超排技術(shù)通常用于單胎家畜，其目的是讓優(yōu)良母畜排出大量卵子，充分發(fā)揮其繁殖潛力，是胚胎移植中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。1.超排方法（1）PMSG或FSH超排 給供體母畜注射PMSG或FSH，發(fā)情開始后1216h和2024h各配種（輸精）一次，并于第一次配種后靜脈注射HCG或LH，以便排出更多卵子。激素的應(yīng)用時(shí)間和劑量因家畜種類不同而有差異。（2）配合應(yīng)用前列腺素（PG） PG的用法通常是在應(yīng)用PMSG以后大約48h進(jìn)行肌注。牛的用量因PG種類而異，PGF2a為30mg，15甲基PGF2a為

7、 2mg,氯前列烯醇為500mg；綿羊和山羊的用量為牛的一半。（3）PMSG與抗PMSG配合使用 抗PMSG可以消除PMSG的殘留作用，明顯增加可用胚胎數(shù)，提高超排效果。2.超排效果的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 超排是胚胎移植中最難控制的一個(gè)環(huán)節(jié)，在實(shí)踐中只要能使一半以上處理母畜達(dá)到滿意結(jié)果，則認(rèn)為超排是成功的。隨堂練習(xí)（35分鐘）通過對(duì)當(dāng)堂課內(nèi)容的總結(jié)來了解學(xué)生的掌握情況，并對(duì)學(xué)生有困惑的地方進(jìn)行再一次的講解。1超數(shù)排卵的方法有 、 、 2.胚胎移植的意義有 、 、 、 、 、 、 、 3胚胎移植的基本原則有 、 、 、 小結(jié)：采用學(xué)生互相提問方式（310分鐘）如：A學(xué)生問：“超數(shù)排卵的方法有？由B學(xué)生回答等

8、課后作業(yè)：（12分鐘）1.胚胎移植的基本程序是什么？2.在胚胎移植時(shí)如何選擇供體和受體？3.如何對(duì)供供進(jìn)行超數(shù)排卵？板書設(shè)計(jì)：第一節(jié) 胚胎移植技術(shù)一、胚胎移植的意義二、胚胎移植的基本原則（一）胚胎移植前后供體和受體所處環(huán)境的同一性（二）胚胎發(fā)育的期限（三）胚胎的質(zhì)量（四）供、受體的狀況三、胚胎移植技術(shù)（一）供體和受體的選擇（二）藥品和器械的準(zhǔn)備（三）供體的超數(shù)排卵 教后感：利用多媒體輔助展示教學(xué)過程中遇到的抽象問題，多媒體設(shè)計(jì)直觀性，這充分調(diào)動(dòng)了學(xué)生的積極性、主動(dòng)性和創(chuàng)造性，從而更容易地達(dá)到了教學(xué)目的，使學(xué)生在愉快、輕松的環(huán)境中獲得知識(shí)，培養(yǎng)了技能 。 2014 學(xué)年 秋季 學(xué)期 第 16 周

9、 總課時(shí)：4課程名稱畜禽繁殖與改良時(shí)間2014年12月5星期星期5任課教師白緒珍職稱中學(xué)一級(jí)節(jié) 次第4-5節(jié)班 級(jí)三年級(jí)養(yǎng)殖班授課時(shí)數(shù)2教具安排多煤體教學(xué)題目第九章動(dòng)物繁殖新技術(shù)第一節(jié) 胚胎移植技術(shù)教學(xué)方式演示法、講授法、練習(xí)法教學(xué)內(nèi)容目標(biāo)要求教學(xué)內(nèi)容：.掌握受體的同期發(fā)情處理方法。.掌握采胚方法和移胚方法。重點(diǎn)難點(diǎn)：受體的同期發(fā)情處理 胚胎的采集和移胚情感目標(biāo)： 能力點(diǎn)：掌握胚胎的采集和移植專業(yè)素質(zhì)滲透點(diǎn)：通過講解“胚胎的移植”的基本知識(shí)，讓學(xué)生了解畜禽體生長的一般規(guī)律，使學(xué)生建立科學(xué)的認(rèn)識(shí)觀教學(xué)過程組織：清點(diǎn)人數(shù)（12分鐘）復(fù)習(xí)導(dǎo)入：卵巢囊腫有哪幾種情況？（35分鐘）Ø進(jìn)入新課（

10、四）、受體的同期發(fā)情（ 20分鐘）當(dāng)前比較理想的同期發(fā)情藥物是前列腺素及其類似物，其劑量因PG種類和用法不同而異。15-甲基 PGF2a 2mg肌注，氯前列烯醇500mg肌注。各種家畜實(shí)施超排處理的具體方法見本書第5章家畜繁殖技術(shù)中的發(fā)情控制技術(shù)部分。（五）供體的發(fā)情鑒定和配種超排處理結(jié)束后，要密切觀察供體的發(fā)情征狀，為確保卵子受精，一般在發(fā)情812h輸精一次，以后間隔812h再輸精一次，并且要加大輸精量。（六）胚胎采集在配種或輸精后適當(dāng)時(shí)間，從超排供體回收胚胎，準(zhǔn)備給受體移植，稱胚胎采集或胚胎回收，簡(jiǎn)稱采胚。1.沖胚液和培養(yǎng)液的配制 現(xiàn)在多采用杜氏磷酸鹽緩沖液（PBS），不但可用于沖洗、采集

11、胚胎，還用于體外培養(yǎng)、冷凍保存和解凍胚胎。沖胚液犢牛血清含量一般為3%（1%5%），培養(yǎng)液血清含量為20%（1%50%）。犢牛血清需加熱（56水浴30min）滅活。2.采胚時(shí)間 根據(jù)配種時(shí)間、排卵的大致時(shí)間、胚胎的運(yùn)行速度、胚胎的發(fā)育階段、畜種、胚胎所處部位及采胚方法等因素來確定是適宜的采胚時(shí)間。3.采胚方法 采胚方法分為手術(shù)法和非手術(shù)法兩種。手術(shù)法適用于各種動(dòng)物，尤其是綿羊、山羊、豬及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；非手術(shù)法僅適用于牛、馬等大家畜，且只能在胚胎進(jìn)入子宮后進(jìn)行。（1）手術(shù)法采胚A 母畜保定 一種方法是用全身或后軀麻醉，母畜進(jìn)行仰臥保定。另一種方法是用局部麻醉，使母畜站立于六柱欄中保定。兩者的保定姿勢(shì)

12、均為前低后高的方式。B 麻醉 全身麻醉可用普魯卡因、酒精等；局部后軀麻醉用普魯卡因、利多卡因進(jìn)行腰薦或尾椎硬膜外腔注射，手術(shù)部位再以利多卡因作皮膚浸潤麻醉。C 手術(shù)部位 母?？稍谌榉恐聊毧字g的白線上剖腹，切口長約10cm；羊在乳房左側(cè)切口，切口長度46cm。D 采胚 主要包括有輸卵管沖胚法、子宮角沖胚法和輸卵管子宮角沖胚法三種。配教材圖圖9-2、圖9-3ES防止手術(shù)部粘連的方法不要用金屬器械挾持生殖器官。所用手套、棉花、紗布等術(shù)前要用生理鹽水浸濕，以防粘附于生殖器官上。在生殖器官表面撒涂低濃度肝素液、樟腦油等，以防止其表面附著血或血凝塊。縫合要牢固、緊密，防止術(shù)后發(fā)生疝癥。（2）非手術(shù)法采胚

13、 由于手術(shù)法采胚在生產(chǎn)應(yīng)用中受到限制，目前在馬、牛等大家畜都用采胚管進(jìn)行非手術(shù)法采胚，一般在配種后7（68）天進(jìn)行。供體牛的保定和麻醉同手術(shù)法采胚，采胚時(shí)先用擴(kuò)張棒對(duì)子宮頸進(jìn)行擴(kuò)張（青年牛尤為必要）。采胚管消毒后，將無菌不銹鋼導(dǎo)桿插入采胚管內(nèi)。將采胚管經(jīng)子宮頸緩慢導(dǎo)入一側(cè)子宮角基部，由助手抽出部分不銹導(dǎo)桿，操作者繼續(xù)向前推進(jìn)采胚管，當(dāng)達(dá)到子宮角大彎附近時(shí)，助手從進(jìn)氣口注入1225ml氣體。當(dāng)氣囊位置和充氣量合適時(shí)，抽出全部不銹鋼導(dǎo)桿。助手用注射器吸取事先加溫至37的沖胚液，從采胚管的進(jìn)水口推進(jìn)，進(jìn)入子宮角內(nèi)，再將沖胚液連同胚抽回注射器內(nèi)，如此反復(fù)沖洗和回收56次，將每次回收的沖胚液收入集胚器內(nèi)

14、，并置于37的恒溫箱或無菌檢胚室內(nèi)等待檢胚。一側(cè)子宮角沖胚結(jié)束后，按上邊方法再?zèng)_洗另一側(cè)子宮角。配教材圖9-44.檢胚 檢胚應(yīng)在2025的無菌操作室內(nèi)進(jìn)行。在立體顯微鏡下，檢查收集到的胚胎數(shù)，并用一細(xì)檢胚吸管將胚胎移至新鮮培養(yǎng)液內(nèi)，在放大40200倍的復(fù)式顯微鏡下，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，選出適合于移植的正常胚胎。配教材圖9-5、圖9-6（七）胚胎保存1.常溫保存 指在常溫（1525）下保存胚胎。通常采用含20%犢牛血清的PBS保存液，可保存胚胎48h。2.低溫保存 指在010的較低溫度下保存胚胎的方法。在此溫度下，胚胎細(xì)胞分裂暫停，新陳代謝速度顯著減慢，所以較常溫保存的存活時(shí)間要長。3.冷凍保存 指

15、在干冰（-79）和液氮（-196）中保存胚胎。其最大優(yōu)點(diǎn)是胚胎可以長期保存，而對(duì)其活力無影響。胚胎冷凍方法有以下幾種：（1）逐步降溫法 這是一種傳統(tǒng)方法，本法的優(yōu)點(diǎn)是解凍后胚胎存活率較高，但操作程序比較復(fù)雜。（2）一步細(xì)管法 即在細(xì)管內(nèi)用非滲透性蔗糖溶液一步脫除抗凍劑（甘油）的方法。其特點(diǎn)是從解凍到移植的全過程簡(jiǎn)單易行，利于在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。（3）玻璃化法 用這種方法冷凍時(shí)，胚胎內(nèi)外液體能同時(shí)玻璃化，不會(huì)形成冰晶，能較好地保護(hù)胚胎。（八）胚胎移植胚胎移植就是將采取的可用胚胎移給受體母畜，亦稱卵的移植，簡(jiǎn)稱移卵。1.移胚部位 早期胚胎少于8細(xì)胞時(shí)，一般應(yīng)移植于輸卵管，多于8細(xì)胞應(yīng)移植于子宮角。2

16、.移胚方法 與采胚方法相似，也分為手術(shù)法與非手術(shù)法兩種，前者適用于不能進(jìn)行直腸操作的中小家畜，后者適用于大家畜。（1）手術(shù)法移植 與采胚方法相似，對(duì)母畜進(jìn)行保定、麻醉。以山羊?yàn)槔?，先在其乳房一?cè)作一平行于腹中線的切口，暴露輸卵管和子宮角，再將胚胎注入輸卵管或子宮角。無論是子宮內(nèi)移植還是輸卵管移植，都要避免把空氣注入。移植完畢后將輸卵管及子宮角送回腹腔，按回收手術(shù)中的要求縫合腹壁創(chuàng)口，術(shù)后做好移植記錄。（2）非手術(shù)法移胚 非手術(shù)法移胚只適用于牛、馬等大家畜。與采胚相似，先將母畜保定麻醉后，再移胚。3.影響胚胎移植妊娠率的因素（1）胚胎因素 包括胚胎質(zhì)量、日齡、移植胚胎的數(shù)量、提供胚胎的供體、胚胎

17、在體外培養(yǎng)的時(shí)間、鮮胚和凍胚等。（2）母體因素 包括供、受體發(fā)情同期化程度，受體的孕酮水平，受體的營養(yǎng)，子宮、卵巢的生理狀況等。（3）其他因素 包括自然發(fā)情與人工誘導(dǎo)發(fā)情，移植器污染程度以及操作者熟練程度等。（35分鐘）1 檢胚的方法為 2 胚胎保存的方法有 、 、 3 胚胎移植的部位有 4 手術(shù)法移植胚胎的方法有 、 ,非手術(shù)法移胚的方法有 、 5 影響胚胎移植妊娠率的因素有 小結(jié)：采用學(xué)生互相提問方式（310分鐘）如：A學(xué)生問：“胚胎的保存方法有？由B學(xué)生回答課后作業(yè)：(12分鐘)1、復(fù)習(xí)本節(jié)所講內(nèi)容；2、簡(jiǎn)述胚胎移植的基本過程板書設(shè)計(jì):第一節(jié) 胚胎移植技術(shù)（四）受體的同期發(fā)情（五）供體的

18、發(fā)情鑒定和配種（六）胚胎采集1.沖胚液和培養(yǎng)液的配制2.采胚時(shí)間3.采胚方法（1）手術(shù)法采胚（2）非手術(shù)法采胚4.檢胚（七）胚胎保存1.常溫保存2.低溫保存3.冷凍保存（八）胚胎移植1.移胚部位2.移胚方法3.影響胚胎移植妊娠率的因素（1）胚胎因素（2）母體因素（3）其他因素教后感：本節(jié)課采用多媒體輔助教學(xué)，完成了本節(jié)課的教學(xué)目標(biāo)，課堂中學(xué)生合作精神得到了發(fā)揚(yáng)，不足：學(xué)生知識(shí)點(diǎn)的掌握有待加強(qiáng) 2014 學(xué)年 秋季 學(xué)期 第 17 周 總課時(shí)：6課程名稱畜禽繁殖與改良時(shí)間2014年12月8星期星期一任課教師白緒珍職稱中學(xué)一級(jí)節(jié) 次第5-6節(jié)班 級(jí)三年級(jí)養(yǎng)殖班授課時(shí)數(shù)2教具安排多煤體教學(xué)題目第九章

19、動(dòng)物繁殖新技術(shù)第二節(jié) 胚胎生物工程技術(shù)教學(xué)方式演示法、講授法、練習(xí)法教學(xué)內(nèi)容目標(biāo)要求教學(xué)內(nèi)容：.了解體外受精及性別控制技術(shù).關(guān)于卵核移植與動(dòng)物克隆技術(shù)(3).動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)重點(diǎn)難點(diǎn)：體外受精技術(shù) 胚胎分割與嵌合技術(shù)情感目標(biāo)：能力點(diǎn)：培養(yǎng)學(xué)生用發(fā)展有眼光看待萬物思想意識(shí)專業(yè)素質(zhì)滲透點(diǎn)：通過講解“胚胎生物工程技術(shù)”的基本知識(shí)，讓學(xué)生了解畜禽養(yǎng)殖前沿技術(shù)，使學(xué)生建立科學(xué)的世界觀教學(xué)過程組織：清點(diǎn)人數(shù)（12分鐘）復(fù)習(xí)導(dǎo)入：（35分鐘）胚胎保存的方法？ 胚胎移植的方法進(jìn)入新課一、體外受精技術(shù)（ 20分鐘）（一）、體外受精的意義1、充分發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖力2、評(píng)價(jià)公畜的繁殖性能3、作為其他相關(guān)研究的手段（

20、二）體外受精技術(shù)1、精子采集與獲能處理（1）精子采集：可采用射出精子或附睪尾精子（2）精子獲能：精子可在體內(nèi)子宮中獲能，也可在體外獲能2、卵母細(xì)胞采集與成熟培養(yǎng)（1）卵母細(xì)胞采集將動(dòng)物物的卵巢取出，用生理鹽水沖洗后，放入盛有生理鹽水的保溫瓶內(nèi)運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室待用，用注射針頭抽出卵母細(xì)胞（2）卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)：將卵母細(xì)胞放在培養(yǎng)液中，在溫度39和5% CO2氣相條件下培養(yǎng)24小時(shí)左右，當(dāng)卵母細(xì)胞達(dá)到成熟時(shí)，卵黃周隙排出第一極體。3、精卵體外受精 將成熟培養(yǎng)的卵母細(xì)胞先用精液洗滌3次，然后放入卵母細(xì)胞，再加入獲能精子，置于CO2培養(yǎng)箱孵育。4、受精的判定出現(xiàn)下列現(xiàn)象為受精：精子穿入卵內(nèi)、精子頭部膨大、精

21、子頭部和尾部在卵細(xì)胞質(zhì)內(nèi)存在、第二極體的排出、原核的形成和正常的卵裂等現(xiàn)象即確定為受精5、體外受精（早期胚胎）的培養(yǎng)發(fā)育二、性別控制技術(shù)（一）胚胎性別控制技術(shù)1、X、Y精子的分離（1）理論依據(jù)（2）分離方法2、改變受精環(huán)境3、卵子的無性繁殖（二）、胚胎性別鑒定技術(shù)1、細(xì)胞學(xué)方法（1）胚胎分割（2）羊胚預(yù)培養(yǎng)及有絲分裂阻滯（3）制作染色體標(biāo)本（4）染色及鏡檢 2、生物化學(xué)微量分析法3、免疫學(xué)方法（1）、細(xì)胞毒性分析法（2）、間接免疫熒光法4、分子生物學(xué)方法三、卵核稱植與動(dòng)物克隆技術(shù)（一）核移植與克隆的意義1、研究細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的遺傳作用2、研究配子發(fā)生過程中核的印跡作用3確定動(dòng)物早期胚胎發(fā)育期間

22、核的分化程度4、生產(chǎn)大量克隆動(dòng)物5、克隆動(dòng)物技術(shù)可為生物藥物開發(fā)和珍稀動(dòng)物保護(hù)做出重大南獻(xiàn)（二）、核移植和動(dòng)物克隆的原理（三）操作技術(shù)1、核移植技術(shù)（1）獲取胚胎和卵母細(xì)胞（2）顯微操作（3）電融合（4）培養(yǎng)（5）移植以產(chǎn)生克隆綿羊?yàn)槔?，克隆技術(shù)步驟大致如下：（1） 將胚盤細(xì)胞培養(yǎng)在飼養(yǎng)層上，建立長久的細(xì)胞系（2） 除去受體卵母細(xì)胞的核及含有中期板的少量細(xì)胞質(zhì)（3） 從全能細(xì)胞系取出1個(gè)細(xì)胞與去核卵母細(xì)胞融合（4） 將重建的胚胎移植給臨時(shí)受體羊，并在7天后鑒定其發(fā)育情況（5） 將發(fā)育成的桑椹胚和囊胚移植給其他綿羊，使其發(fā)育到產(chǎn)出羔羊四、胚胎分割技術(shù)（一）胚胎分割技術(shù)1、胚胎分割的方法（1）對(duì)2

23、-16細(xì)胞期胚胎，用顯微鏡操作儀上的玻璃針或刀片，將每個(gè)卵裂或兩個(gè)卵裂球?yàn)橐唤M或4個(gè)卵裂球?yàn)橐唤M進(jìn)行分割，分別放入一個(gè)空透明帶內(nèi)，然后進(jìn)行移植（2）與上述方法相同，將桑椹胚或早期囊胚一分為二或一分四，將每塊細(xì)胞團(tuán)移入一登上空透明帶內(nèi)，然后進(jìn)行移植2、胚胎分割的程序（1）用促性腺激素促使牛、羊超數(shù)排卵（2）通過外科手述取出2、4、8等分裂球的胚胎（3）將秀明帶中的卵裂球分離，用吸管吸出（4）將分離的分裂球放入其他動(dòng)物預(yù)先掏空的秀明帶中，在每個(gè)透明帶中放入12個(gè)卵裂球（5）將分割后的胚胎埋藏于瓊脂中，放入羊或其他動(dòng)物輸卵管中培養(yǎng)3-4天（6）將胚胎沖洗出來經(jīng)鑒定后，再作移植用（二）胚胎嵌合技術(shù)1、

24、嵌合體的制作方法（1）早期胚胎聚合法采集胚胎除去透明帶胚胎的聚合聚合胚胎的培養(yǎng)嵌合體的移植嵌合體的鑒定（2）分裂球聚合法（3）囊胚注入法2、嵌合體的標(biāo)記及鑒定方法五、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)（一）外源基因?qū)氲闹饕椒?、原核顯微注射法2、反轉(zhuǎn)錄病毒感染胚胎法3、胚胎干細(xì)胞法子、精子載體法（二）基因?qū)氲膽?yīng)用前景1、動(dòng)物育種2、生產(chǎn)動(dòng)物蛋白六、胚胎干細(xì)胞技術(shù)（一）、形態(tài)與功能特點(diǎn)1、形態(tài)學(xué)特征2、功能特征（二）胚胎干細(xì)胞建系技術(shù)要點(diǎn)1、飼養(yǎng)層的制備及分化抑制物的選擇2、早期胚胎及PGC的選擇和分離3、早期胚胎及PGC的培養(yǎng)和ESC的分離傳代4、ESC的鑒定及保存（35分鐘）1體外受精的意義為 2胚胎性別

25、鑒定技術(shù) 、 、 、 3核移植技術(shù) 4核移植及動(dòng)物克隆的意義是 。 5嵌合體的制作方法 論 小結(jié)：采用學(xué)生互相提問方式（310分鐘）如：A學(xué)生問：“體外受精技術(shù)包括？由B學(xué)生回答課后作業(yè)：(12分鐘)1、復(fù)習(xí)本節(jié)所講內(nèi)容；2、簡(jiǎn)述胚胎移植的基本過程板書設(shè)計(jì):第二節(jié) 胚胎生物工程技術(shù)簡(jiǎn)介一、體外受精技術(shù)（ 20分鐘）（一）、體外受精的意義（二）體外受精技術(shù)1、精子采集與獲能處理2、卵母細(xì)胞采集與成熟培養(yǎng)3、精卵體外受精4、受精的判定5、體外受精（早期胚胎）的培養(yǎng)發(fā)育二、性別控制技術(shù)（一）胚胎性別控制技術(shù)（二）、胚胎性別鑒定技術(shù)三、卵核稱植與動(dòng)物克隆技術(shù)（一）核移植與克隆的意義（二）、核移植和動(dòng)物

26、克隆的原理（三）操作技術(shù)四、胚胎分割技術(shù)（一）胚胎分割技術(shù)（二）胚胎嵌合技術(shù)五、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)（一）外源基因?qū)氲闹饕椒ǎǘ┗驅(qū)氲膽?yīng)用前景六、胚胎干細(xì)胞技術(shù)（一）、形態(tài)與功能特點(diǎn)（二）胚胎干細(xì)胞建系技術(shù)要點(diǎn)教后感：本節(jié)課采用講授法，及討論法。課前準(zhǔn)備也十分充分，讓學(xué)生充分發(fā)揮自己的優(yōu)勢(shì)， 促進(jìn)學(xué)生學(xué)習(xí)方式的改變，注意了學(xué)生的學(xué)習(xí)動(dòng)機(jī)、興趣、習(xí)慣、信心等非智力因素的培養(yǎng)不足之處：在教學(xué)過程的組織中應(yīng)該注意時(shí)間的把控 2014 學(xué)年 秋季 學(xué)期 第 17 周 總課時(shí)：8課程名稱畜禽繁殖與改良時(shí)間2014年12月12星期星期五任課教師白緒珍職稱中學(xué)一級(jí)節(jié) 次第4-5節(jié)班 級(jí)三年級(jí)養(yǎng)殖班授課時(shí)

27、數(shù)2教具安排多煤體教學(xué)題目第九章動(dòng)物繁殖新技術(shù)復(fù)習(xí)教學(xué)方式講授法、歸納法、練習(xí)法教學(xué)內(nèi)容目標(biāo)要求復(fù)習(xí)內(nèi)容：.胚胎移植的生理基礎(chǔ)和處理程序.胚胎移植的基本原則(3).現(xiàn)代動(dòng)物繁殖新技術(shù)重點(diǎn)難點(diǎn)：胚胎移植的生理基礎(chǔ)和處理程序 胚胎移植技術(shù)情感目標(biāo)：能力點(diǎn)：培養(yǎng)學(xué)生團(tuán)結(jié)、互助的精神專業(yè)素質(zhì)滲透點(diǎn)：通過講解“動(dòng)物繁殖新技術(shù)”的基本知識(shí)，讓學(xué)生了解畜禽養(yǎng)殖前沿技術(shù)，使學(xué)生建立科學(xué)的世界觀教學(xué)過程組織：清點(diǎn)人數(shù)（12分鐘）復(fù)習(xí)導(dǎo)入：（35分鐘）卵核移植是指？ 動(dòng)物克隆是指？進(jìn)入復(fù)習(xí)一、胚胎移植的意義（ 20分鐘）1充分發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖潛力 2.縮短世代間隔，及早進(jìn)行后裔測(cè)定能 3.增加雙胎率 4.保存品

28、種資源 5.防止疾病傳播 6.使不孕母畜獲得生育能力 7.促進(jìn)基礎(chǔ)理論研究 8.滿足畜牧業(yè)現(xiàn)代化的需要 二、胚胎移植的基本原則（一）胚胎移植前后供體和受體所處環(huán)境的同一性1.在分類學(xué)上的同屬性 在分類學(xué)上屬于同一個(gè)種。2.生理上的一致性 一般供、受體發(fā)情同步差要求在±24h以內(nèi)。3.解剖部位的一致性 胚胎采自供體的輸卵管就移到受體的輸卵管，采自供體的子宮角就移至受體的子宮角。（二）胚胎發(fā)育的期限胚胎采集和移植的期限（胚胎日齡）不能超過發(fā)情周期黃體的壽命， （三）胚胎的質(zhì)量在胚胎移植全部操作過程中，胚胎不應(yīng)受任何不良因素的影響。（四）供、受體的狀況1.生產(chǎn)性能和經(jīng)濟(jì)價(jià)值 2全身及生殖器

29、官的生理狀況三、胚胎移植技術(shù)（一）供體和受體的選擇1.供體的選擇（1）生產(chǎn)性能高，經(jīng)濟(jì)價(jià)值大，具備遺傳優(yōu)勢(shì)，在育種上有價(jià)值。（2）既往繁殖史正常，無遺傳缺陷，具有良好的繁殖能力，且分娩順利。（3）體質(zhì)健壯，膘情適度。2.受體的選擇 受體母畜可選用非優(yōu)良品種個(gè)體，但應(yīng)具有良好的繁殖性能和健康體況，可選擇與供體發(fā)情周期同步的母畜為受體。（二）藥品和器械的準(zhǔn)備1.藥品 FSH、HCG、PGF2a；麻醉劑；生鹽理水、75%酒精、2%碘酒、青霉素。2.器械 10ml和1ml注射器、手術(shù)刀、剪子、鑷子、止血鉗、創(chuàng)布、縫合針、線及手術(shù)臺(tái)；沖胚管、移胚管、顯微鏡、表面皿、凹玻片、拔胚針等。（三）供體的超數(shù)排卵

30、 超排技術(shù)通常用于單胎家畜，其目的是讓優(yōu)良母畜排出大量卵子，充分發(fā)揮其繁殖潛力，是胚胎移植中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。1.超排方法（1）PMSG或FSH超排 給供體母畜注射PMSG或FSH，發(fā)情開始后1216h和2024h各配種（輸精）一次，并于第一次配種后靜脈注射HCG或LH，以便排出更多卵子。激素的應(yīng)用時(shí)間和劑量因家畜種類不同而有差異。（2）配合應(yīng)用前列腺素（PG） PG的用法通常是在應(yīng)用PMSG以后大約48h進(jìn)行肌注。牛的用量因PG種類而異，PGF2a為30mg，15甲基PGF2a為 2mg,氯前列烯醇為500mg；綿羊和山羊的用量為牛的一半。（3）PMSG與抗PMSG配合使用 抗PMSG可以消除

31、PMSG的殘留作用，明顯增加可用胚胎數(shù)，提高超排效果。2.超排效果的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 超排是胚胎移植中最難控制的一個(gè)環(huán)節(jié)，在實(shí)踐中只要能使一半以上處理母畜達(dá)到滿意結(jié)果，則認(rèn)為超排是成功的。（四）、受體的同期發(fā)情（ 20分鐘）當(dāng)前比較理想的同期發(fā)情藥物是前列腺素及其類似物，其劑量因PG種類和用法不同而異。15-甲基 PGF2a 2mg肌注，氯前列烯醇500mg肌注。 （五）供體的發(fā)情鑒定和配種超排處理結(jié)束后，要密切觀察供體的發(fā)情征狀，為確保卵子受精，一般在發(fā)情812h輸精一次，以后間隔812h再輸精一次，并且要加大輸精量。（六）胚胎采集在配種或輸精后適當(dāng)時(shí)間，從超排供體回收胚胎，準(zhǔn)備給受體移植，稱胚胎采

32、集或胚胎回收，簡(jiǎn)稱采胚。1.沖胚液和培養(yǎng)液的配制 現(xiàn)在多采用杜氏磷酸鹽緩沖液（PBS），不但可用于沖洗、采集胚胎，還用于體外培養(yǎng)、冷凍保存和解凍胚胎。沖胚液犢牛血清含量一般為3%（1%5%），培養(yǎng)液血清含量為20%（1%50%）。犢牛血清需加熱（56水浴30min）滅活。2.采胚時(shí)間 根據(jù)配種時(shí)間、排卵的大致時(shí)間、胚胎的運(yùn)行速度、胚胎的發(fā)育階段、畜種、胚胎所處部位及采胚方法等因素來確定是適宜的采胚時(shí)間。3.采胚方法 采胚方法分為手術(shù)法和非手術(shù)法兩種。手術(shù)法適用于各種動(dòng)物，尤其是綿羊、山羊、豬及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；非手術(shù)法僅適用于牛、馬等大家畜，且只能在胚胎進(jìn)入子宮后進(jìn)行。（1）手術(shù)法采胚A 母畜保定 一

33、種方法是用全身或后軀麻醉，母畜進(jìn)行仰臥保定。另一種方法是用局部麻醉，使母畜站立于六柱欄中保定。兩者的保定姿勢(shì)均為前低后高的方式。B 麻醉 全身麻醉可用普魯卡因、酒精等；局部后軀麻醉用普魯卡因、利多卡因進(jìn)行腰薦或尾椎硬膜外腔注射，手術(shù)部位再以利多卡因作皮膚浸潤麻醉。C 手術(shù)部位 母?？稍谌榉恐聊毧字g的白線上剖腹，切口長約10cm；羊在乳房左側(cè)切口，切口長度46cm。D 采胚 主要包括有輸卵管沖胚法、子宮角沖胚法和輸卵管子宮角沖胚法三種。配教材圖圖9-2、圖9-3ES防止手術(shù)部粘連的方法不要用金屬器械挾持生殖器官。所用手套、棉花、紗布等術(shù)前要用生理鹽水浸濕，以防粘附于生殖器官上。在生殖器官表面撒

34、涂低濃度肝素液、樟腦油等，以防止其表面附著血或血凝塊?？p合要牢固、緊密，防止術(shù)后發(fā)生疝癥。（2）非手術(shù)法采胚 由于手術(shù)法采胚在生產(chǎn)應(yīng)用中受到限制，目前在馬、牛等大家畜都用采胚管進(jìn)行非手術(shù)法采胚，一般在配種后7（68）天進(jìn)行。供體牛的保定和麻醉同手術(shù)法采胚，采胚時(shí)先用擴(kuò)張棒對(duì)子宮頸進(jìn)行擴(kuò)張（青年牛尤為必要）。采胚管消毒后，將無菌不銹鋼導(dǎo)桿插入采胚管內(nèi)。將采胚管經(jīng)子宮頸緩慢導(dǎo)入一側(cè)子宮角基部，由助手抽出部分不銹導(dǎo)桿，操作者繼續(xù)向前推進(jìn)采胚管，當(dāng)達(dá)到子宮角大彎附近時(shí)，助手從進(jìn)氣口注入1225ml氣體。當(dāng)氣囊位置和充氣量合適時(shí)，抽出全部不銹鋼導(dǎo)桿。助手用注射器吸取事先加溫至37的沖胚液，從采胚管的進(jìn)水

35、口推進(jìn)，進(jìn)入子宮角內(nèi)，再將沖胚液連同胚抽回注射器內(nèi)，如此反復(fù)沖洗和回收56次，將每次回收的沖胚液收入集胚器內(nèi)，并置于37的恒溫箱或無菌檢胚室內(nèi)等待檢胚。一側(cè)子宮角沖胚結(jié)束后，按上邊方法再?zèng)_洗另一側(cè)子宮角。配教材圖9-44.檢胚 檢胚應(yīng)在2025的無菌操作室內(nèi)進(jìn)行。在立體顯微鏡下，檢查收集到的胚胎數(shù)，并用一細(xì)檢胚吸管將胚胎移至新鮮培養(yǎng)液內(nèi)，在放大40200倍的復(fù)式顯微鏡下，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，選出適合于移植的正常胚胎。配教材圖9-5、圖9-6（七）胚胎保存1.常溫保存 指在常溫（1525）下保存胚胎。通常采用含20%犢牛血清的PBS保存液，可保存胚胎48h。2.低溫保存 指在010的較低溫度下保存胚

36、胎的方法。在此溫度下，胚胎細(xì)胞分裂暫停，新陳代謝速度顯著減慢，所以較常溫保存的存活時(shí)間要長。3.冷凍保存 指在干冰（-79）和液氮（-196）中保存胚胎。其最大優(yōu)點(diǎn)是胚胎可以長期保存，而對(duì)其活力無影響。胚胎冷凍方法有以下幾種：（1）逐步降溫法 這是一種傳統(tǒng)方法，本法的優(yōu)點(diǎn)是解凍后胚胎存活率較高，但操作程序比較復(fù)雜。（2）一步細(xì)管法 即在細(xì)管內(nèi)用非滲透性蔗糖溶液一步脫除抗凍劑（甘油）的方法。其特點(diǎn)是從解凍到移植的全過程簡(jiǎn)單易行，利于在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。（3）玻璃化法 用這種方法冷凍時(shí)，胚胎內(nèi)外液體能同時(shí)玻璃化，不會(huì)形成冰晶，能較好地保護(hù)胚胎。（八）胚胎移植胚胎移植就是將采取的可用胚胎移給受體母畜，

37、亦稱卵的移植，簡(jiǎn)稱移卵。1.移胚部位 早期胚胎少于8細(xì)胞時(shí)，一般應(yīng)移植于輸卵管，多于8細(xì)胞應(yīng)移植于子宮角。2.移胚方法 與采胚方法相似，也分為手術(shù)法與非手術(shù)法兩種，前者適用于不能進(jìn)行直腸操作的中小家畜，后者適用于大家畜。（1）手術(shù)法移植 與采胚方法相似，對(duì)母畜進(jìn)行保定、麻醉。以山羊?yàn)槔?，先在其乳房一?cè)作一平行于腹中線的切口，暴露輸卵管和子宮角，再將胚胎注入輸卵管或子宮角。無論是子宮內(nèi)移植還是輸卵管移植，都要避免把空氣注入。移植完畢后將輸卵管及子宮角送回腹腔，按回收手術(shù)中的要求縫合腹壁創(chuàng)口，術(shù)后做好移植記錄。（2）非手術(shù)法移胚 非手術(shù)法移胚只適用于牛、馬等大家畜。與采胚相似，先將母畜保定麻醉后，

38、再移胚。3.影響胚胎移植妊娠率的因素（1）胚胎因素 包括胚胎質(zhì)量、日齡、移植胚胎的數(shù)量、提供胚胎的供體、胚胎在體外培養(yǎng)的時(shí)間、鮮胚和凍胚等。（2）母體因素 包括供、受體發(fā)情同期化程度，受體的孕酮水平，受體的營養(yǎng)，子宮、卵巢的生理狀況等。（3）其他因素 包括自然發(fā)情與人工誘導(dǎo)發(fā)情，移植器污染程度以及操作者熟練程度等（35分鐘）1超數(shù)排卵的方法有 、 、 2.胚胎移植的意義有 、 、 、 、 、 、 、 3胚胎移植的基本原則有 、 、 、 4檢胚的方法為 5胚胎保存的方法有 、 、 6 胚胎移植的部位有 7 手術(shù)法移植胚胎的方法有 、 ,非手術(shù)法移胚的方法有 、 影響胚胎移植妊娠率的因素有 小結(jié)：

39、采用學(xué)生互相提問方式（310分鐘）如：A學(xué)生問：“胚胎移植的意義？由B學(xué)生回答課后作業(yè)：(12分鐘)1、復(fù)習(xí)本節(jié)所講內(nèi)容；2、簡(jiǎn)述胚胎移植的基本過程板書設(shè)計(jì):一、胚胎移植的意義二、胚胎移植的基本原則（一）胚胎移植前后供體和受體所處環(huán)境的同一性（二）胚胎發(fā)育的期限（三）胚胎的質(zhì)量（四）供、受體的狀況三、胚胎移植技術(shù)（一）供體和受體的選擇（二）藥品和器械的準(zhǔn)備（三）供體的超數(shù)排卵（四）、受體的同期發(fā)情（五）供體的發(fā)情鑒定和配種（六）胚胎采集（七）胚胎保存（八）胚胎移植教后感：本節(jié)課采用講授法，及討論法。 完成了本節(jié)課的教學(xué)目標(biāo)，同時(shí)也注意了學(xué)生的學(xué)習(xí)動(dòng)機(jī)、興趣、習(xí)慣、信心等非智力因素的培養(yǎng)不足之處

40、：在教學(xué)過程中注意引導(dǎo)式與歸納式的并用2014 學(xué)年 秋季 學(xué)期 第 17 周 總課時(shí)：10課程名稱畜禽繁殖與改良時(shí)間2014年12月14星期星期日任課教師白緒珍職稱中學(xué)一級(jí)節(jié) 次第4-5節(jié)班 級(jí)三年級(jí)養(yǎng)殖班授課時(shí)數(shù)2教具安排多煤體教學(xué)題目第九章動(dòng)物繁殖新技術(shù) 胚胎生物工程技術(shù)復(fù)習(xí)教學(xué)方式講授法、歸納法、練習(xí)法教學(xué)內(nèi)容目標(biāo)要求復(fù)習(xí)內(nèi)容：(1).了解體外受精及性別控制技術(shù)(2).關(guān)于卵核移植與動(dòng)物克隆技術(shù)(3).動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)重點(diǎn)難點(diǎn): 體外受精技術(shù) 胚胎分割與嵌合技術(shù)情感目標(biāo)：能力點(diǎn)：培養(yǎng)學(xué)生團(tuán)結(jié)、互助的精神專業(yè)素質(zhì)滲透點(diǎn)：通過復(fù)習(xí)“胚胎生物工程技術(shù) ”的基本知識(shí)，讓學(xué)生了解畜禽養(yǎng)殖前沿技術(shù)，

41、使學(xué)生建立科學(xué)的世界觀教學(xué)過程組織：清點(diǎn)人數(shù)（12分鐘）復(fù)習(xí)導(dǎo)入：（35分鐘）胚胎的保存方法？ 采胚時(shí)對(duì)供體的要求？進(jìn)入復(fù)習(xí)一、體外受精技術(shù)（ 20分鐘）（一）、體外受精的意義1、充分發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖力2、評(píng)價(jià)公畜的繁殖性能3、作為其他相關(guān)研究的手段（二）體外受精技術(shù)1、精子采集與獲能處理（1）精子采集：可采用射出精子或附睪尾精子（2）精子獲能：精子可在體內(nèi)子宮中獲能，也可在體外獲能2、卵母細(xì)胞采集與成熟培養(yǎng)（1）卵母細(xì)胞采集（2）卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)3、精卵體外受精 4、受精的判定出現(xiàn)下列現(xiàn)象為受精：精子穿入卵內(nèi)、精子頭部膨大、精子頭部和尾部在卵細(xì)胞質(zhì)內(nèi)存在、第二極體的排出、原核的形成和正常的卵裂等現(xiàn)象即確定為受精5、體外受精（早期胚胎）的培養(yǎng)發(fā)育二、性別控制技術(shù)（一）胚胎性別控制技術(shù)1、X、Y精子的分離（1）理論依據(jù)（2）分離方法2、改變受精環(huán)境3、卵子的無性繁殖（二）、胚胎性別鑒定技術(shù)1、細(xì)胞學(xué)方法（1）胚胎分割（2）羊胚預(yù)培養(yǎng)及有絲分裂阻滯（3）制作染色體標(biāo)本（4）染色及鏡檢 2、生物化學(xué)微量分析法