急性有機(jī)磷中毒動物機(jī)能指標(biāo)的動態(tài)觀察與測定

1、急性有機(jī)磷中毒動物機(jī)能指標(biāo)的動態(tài)觀察與測定 一 課題背景知識回顧 近年來，急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒（AOPP）患者逐年增多，對AOPP的防治成了國內(nèi)外研究的一個熱點(diǎn)課題。 有機(jī)磷酸酯類進(jìn)入機(jī)體后，與血漿膽堿酯酶（AChE）生成難以水解的磷?；憠A酯酶，使 AChE 失去水解ACh的能力，導(dǎo)致不同程度的中毒表現(xiàn)。一 課題背景知識回顧 有機(jī)磷中毒時對AChE的抑制作用已闡明，但中毒過程中逐步出現(xiàn)的M樣，M N樣和中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的輕、中、重度中毒表現(xiàn)。通常只是以測定的AChE值為判定AOPP的中毒程度及指導(dǎo)搶救用藥的常規(guī)方法。目前臨床上的傳統(tǒng)搶救方法是抗膽堿藥阿托品和膽堿酯酶復(fù)能劑氯磷定配伍。一

2、課題背景知識回顧 臨床上在急性有機(jī)磷中毒搶救方面工作都比較單一地依賴于血漿ChE值作為診斷依據(jù)，且在搶救過程中對該項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測也鮮見報道。 探索急性有機(jī)磷中毒及給予藥物解救后多個指標(biāo)的動態(tài)變化進(jìn)行監(jiān)測記錄，能夠幫助我們進(jìn)一步了解中毒及解救藥物作用機(jī)理，指導(dǎo)臨床治療。二 探索性研究成果階段性匯報（一）實(shí)驗(yàn)方案 材料及方法（一）試劑 0.1%硫酸阿托品、5%敵百蟲、1%肝素、2.5%解磷定、75%酒精、膽堿酯酶試劑盒（南京建成生物研究所）、血糖試紙 材料及方法（二）儀器 血糖儀（Sure Step）、恒溫水浴、分光光度計(jì)、離心機(jī)、微量移液管（50-200L、200-1000L）、試管架、一次

3、性小試管若干（10ml）、兔固定箱、注射器（5ml、10ml）、量筒（100ml）、燒杯（150ml）、玻璃棒、保溫瓶、試劑瓶、測瞳尺（可用游標(biāo)卡尺代替）、刀片、棉球 材料及方法（三）實(shí)驗(yàn)動物及分組 實(shí)驗(yàn)動物：家兔，體重22.5kg 動物分組：分阿托品急救組和解磷定急救 組，每組4個動物 材料及方法（四）動物模型建立 預(yù)實(shí)驗(yàn)： a.取家兔2只，編號，稱重。觀察呼吸等各項(xiàng)指標(biāo)； b.將其中一個兔固定于兔箱內(nèi)，以醮有酒精的棉球擦拭兔耳緣靜脈，使血管擴(kuò)張，充血明顯時，用刀片橫斷耳緣靜脈，取一小滴滴到血糖試紙上測定正常情況下血糖，然后讓血液自然滴入試管（管中預(yù)先滴入2滴肝素，自然干燥后備用）中，供測正

4、常膽堿酯酶活性用（測定膽堿酯酶活性備用血取出來后馬上放進(jìn)冰水中冷凍，保持酶活性，待整個實(shí)驗(yàn)全部血樣取完后統(tǒng)一測定酶活性）。 c.按照2.0ml/kg的標(biāo)準(zhǔn)從耳緣靜脈處注射5%敵百蟲，觀察記錄表所示各項(xiàng)指標(biāo)，中毒癥狀明顯時按照b步驟中的方法取血測定血糖和備血測定膽堿酯酶； d.出現(xiàn)重度中毒現(xiàn)象時，立即給家兔注射0.1%硫酸阿托品1ml/kg、當(dāng)癥狀出現(xiàn)明顯緩解時取血測定血糖、備血測定膽堿酯酶活性； e.換用另外一只家兔，按照同樣的方法步驟（d步驟注射2.5%解磷定）進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。 f.測定膽堿酯酶活性（步驟參考試劑盒使用說明書）； 通過預(yù)實(shí)驗(yàn)過程主要摸索清楚出現(xiàn)中毒的大概時間、中毒的癥狀，以便適當(dāng)

5、地確定取血測定點(diǎn)，并熟悉操作； g.按照前面的步驟和預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索出來的取血點(diǎn)，分成阿托品急救組和解磷定急救組（每組4個家兔，雌雄各半）進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。（二）實(shí)驗(yàn)結(jié)果中毒及解救體征變化趨勢 給敵百蟲后 家兔呼吸變得急促，瞳孔變小，唾液分泌增多，排便增多。幾分鐘后，家兔四肢開始癱軟，行動不便并出現(xiàn)肌顫。隨著中毒時間延長，以上觀察指標(biāo)變化更為明顯。瞳孔繼續(xù)變小，并有發(fā)散現(xiàn)象；唾液大量增多，部分家兔淚腺分泌增多；排便頻繁且逐漸呈稀糊狀；呼吸更為急促，部分家兔可聞及濕羅音。肌顫明顯加劇，四肢癱軟。其精神狀況逐漸變差，目光渙散，最后意識模糊，甚至完全喪失。 阿托品解救 瞳孔迅速變大；唾液和淚腺分泌較前明顯減少

6、，排便減少，呈稀糊狀；以上指標(biāo)逐漸恢復(fù)到正常水平。其呼吸急促，可聞及明顯濕羅音。肌顫較前減緩，但沒有消失，四肢仍然完全癱軟無力，不能站立；精神狀況逐漸恢復(fù)，意識清醒。 解磷定解救 呼吸較前平緩，未聞及濕羅音；唾液和淚腺分泌減少，排便減少；以上指標(biāo)逐漸恢復(fù)到正常水平。其瞳孔大小基本不變，但發(fā)散現(xiàn)象消失；精神狀況有所改善，但總體情況比第一組的差。注射足量解磷定后，肌顫馬上消失，部分家兔后期再次出現(xiàn)輕微肌顫。其行動能力有所恢復(fù) CHE活力變化SPSS結(jié)果血糖變化SPSS結(jié)果結(jié)果分析 癥狀部分 急性有機(jī)磷中毒癥狀復(fù)雜多樣，輕度者以M樣癥狀為主，中度者可同時出現(xiàn)M樣和N樣癥狀。嚴(yán)重者除M樣和N樣癥狀外，

7、還有顯著的CNS癥狀。模型的建立是給大劑量的敵百蟲使得家兔經(jīng)歷由M到CNS樣癥狀的變化然后解救。M樣癥狀 M受體存在于大多數(shù)副交感神經(jīng)節(jié)后纖維和少數(shù)交感神經(jīng)節(jié)后纖維所支配的效應(yīng)器細(xì)胞膜上。當(dāng)M受體被乙酰膽堿激活時，將產(chǎn)生一系列副交感神經(jīng)興奮的效應(yīng)，表現(xiàn)為平滑肌痙攣和腺體分泌增加，故引起唾液和淚腺分泌增多，排便頻繁且逐漸呈稀糊狀以及瞳孔縮小等體征改變。分布于支氣管和肺的M受體興奮時，一方面使呼吸道的分泌物大量增多部分積聚于肺泡；另一方面使肺小血管通透性增加，加重肺泡液量，二者相加造成肺部濕鑼音、肺通氣和換氣障礙。N樣癥狀 隨著中毒程度加深，乙酰膽堿將激活機(jī)體中的N受體，產(chǎn)生N樣癥狀。N受體有N1

8、和N2兩種亞型，前者存在于自主神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元，后者存在于骨骼肌運(yùn)動終板。骨骼肌運(yùn)動終板N1受體被激動時表現(xiàn)為肌束顫動，常先從眼瞼、顏面等處小肌肉開始，逐漸波及全身，最后又轉(zhuǎn)為肌無力，并可導(dǎo)致肌肉麻痹，嚴(yán)重時可因呼吸肌麻痹而死。交感神經(jīng)節(jié)受乙酰膽堿刺激時，其節(jié)后交感神經(jīng)纖維末梢釋放兒茶酚胺使血管收縮，引起血壓增高、心跳加快和心律失常。 CNS作用 一般有機(jī)磷酸酯易揮發(fā)、脂溶性高，可通過血腦屏障而產(chǎn)生CNS作用。常呈雙相反應(yīng)，通常中毒早期以CNS興奮為主，表現(xiàn)為躁動不安、幻覺、譫妄甚至抽搐、驚厥。后期轉(zhuǎn)為抑制，出現(xiàn)意識模糊、共濟(jì)失調(diào)、反射消失、昏迷等癥狀。嚴(yán)重中毒晚期，則出現(xiàn)呼吸中樞麻痹所致的呼吸抑

9、制，甚至呼吸停止和血管運(yùn)動中樞抑制引起的血壓下降甚或循環(huán)衰竭，危及生命。CHE活力部分 中毒：靜脈注射，有機(jī)磷與血液中的酶結(jié)合迅速，所以很快便到達(dá)重度中毒水平（30%） 阿托品解救：CHE活性降低到10%左右 ，猜想是M受體被阻斷，乙酰膽堿的蓄積量進(jìn)一步升高，機(jī)體應(yīng)激性地從血液中轉(zhuǎn)運(yùn)一定量的CHE到神經(jīng)接頭處，以分解突然增多的乙酰膽堿，故測得血液中CHE活性下降。而后，血液中CHE含量降低將促進(jìn)其在機(jī)體內(nèi)的合成，從而使得酶活性恢復(fù)到注射阿托品前的水平。 解磷定解救：恢復(fù)膽堿酯酶活力，直接上升。血糖部分 中毒升高機(jī)理： 有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)人體內(nèi)，作為強(qiáng)烈的應(yīng)激原刺激機(jī)體發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，繼而表現(xiàn)出一系列神

10、經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)引起的機(jī)體各種機(jī)能代謝方面的變化。 N樣作用時，交感神經(jīng)興奮，通過受體刺激胰島細(xì)胞，使胰高血糖素分泌增加。而交感神經(jīng)興奮還可使兒茶酚胺釋放增多，從而通過受體抑制胰島素分泌，結(jié)果表現(xiàn)為血中胰島素減少和胰高血糖素增加，造成急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒患者血糖濃度升高。 機(jī)體應(yīng)激時，通過下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸的興奮而使糖皮質(zhì)激素分泌增加，糖皮質(zhì)激素促進(jìn)蛋白質(zhì)分解，使氨基酸轉(zhuǎn)移至肝，糖異生過程加強(qiáng)，從而使血糖升高。 阿托品解救：M受體被阻斷，使得N樣受體激活而沒有與之拮抗的M樣作用。血糖持續(xù)升高。癥狀緩解之后，機(jī)體功能的紊亂緩解，血糖降回正常水平。 解磷定解救：膽堿酯酶活性恢復(fù)很大程度，迅速分解

11、最先到達(dá)的M樣受體接頭處的ACHE，使得血糖急劇上升。后逐步擴(kuò)散到神經(jīng)接頭處，乙酰膽堿的堆積狀況得到改善，機(jī)體功能恢復(fù)，血糖回落。結(jié)論 血糖作為動態(tài)檢測指標(biāo)是可行的。（三）實(shí)驗(yàn)小結(jié) 1. 實(shí)驗(yàn)前應(yīng)做足充分準(zhǔn)備，包括試劑的準(zhǔn) 備和儀器的調(diào)節(jié)；2. 由于給藥方式的不妥，使得血糖與經(jīng)典的膽堿酯酶的活性在中毒階段無法體現(xiàn)出相關(guān)性，這是實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)的地方。 3. 阿托品的作用使得CHE的活力出現(xiàn)短暫的降低，原因只是推測，并沒有依據(jù)可循。其有關(guān)機(jī)理的探討還有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。 4.血糖的變化趨勢十分明顯，但是并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，建議加大樣本量。主要參考文獻(xiàn)1.陳克敏 主編. 實(shí)驗(yàn)生理科學(xué)教程. 北京：科學(xué)出版

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14、 2002 Nov；23（11）一 課題背景知識回顧 近年來，急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒（AOPP）患者逐年增多，對AOPP的防治成了國內(nèi)外研究的一個熱點(diǎn)課題。 有機(jī)磷酸酯類進(jìn)入機(jī)體后，與血漿膽堿酯酶（AChE）生成難以水解的磷?；憠A酯酶，使 AChE 失去水解ACh的能力，導(dǎo)致不同程度的中毒表現(xiàn)。一 課題背景知識回顧 有機(jī)磷中毒時對AChE的抑制作用已闡明，但中毒過程中逐步出現(xiàn)的M樣，M N樣和中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的輕、中、重度中毒表現(xiàn)。通常只是以測定的AChE值為判定AOPP的中毒程度及指導(dǎo)搶救用藥的常規(guī)方法。目前臨床上的傳統(tǒng)搶救方法是抗膽堿藥阿托品和膽堿酯酶復(fù)能劑氯磷定配伍。一 課題背景知識回顧 臨床上在急性有機(jī)磷中毒搶救方面工作都比較單一地依賴于血漿ChE值作為診斷依據(jù)，且在搶救過程中對該項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測也鮮見報道。 探索急性有機(jī)磷中毒及給予藥物解救后多個指標(biāo)的動態(tài)變化進(jìn)行監(jiān)測記錄，能夠幫助我們進(jìn)一步了解中毒及解救藥物作用機(jī)理，指導(dǎo)臨床治療。 材料及方法（二）儀器 血糖儀（Sure Step）、恒溫水浴、分光光度計(jì)、離心機(jī)、微量移液管（50-200L、200-1000L）、試管架、一次性小試管若干（10ml）、兔固定箱、注射器（5ml、10ml）、量筒（100ml）、燒杯（150ml）、玻璃棒、保溫瓶、試劑瓶、測瞳尺（可用游標(biāo)卡尺代替）、刀片、棉球（二）實(shí)驗(yàn)結(jié)果 阿托