分離以尿素為氮源的微生物ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)2 2 分離以尿素為氮分離以尿素為氮 源的微生物源的微生物 細(xì)菌 尿素 NH3 中性 堿性 酚紅顏色： 黃色 紅色( (變色范圍變色范圍 pH6.4-8.2) pH6.4-8.2)任務(wù)任務(wù)1：怎么從土壤中分離出它們呢？：怎么從土壤中分離出它們呢？利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。配制培養(yǎng)基 尿素培養(yǎng)基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 瓊脂糖 0.5g 酚紅 0.25g 尿素 10ml選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基瓊脂是未被純化的混合物瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定量的含氮化合內(nèi)含一定量的含氮化合物物（1將土壤中的固氮菌分離出來（2將土壤中自養(yǎng)微生物分離

2、出來舉一反三（3篩選出抗青霉素的微生物（4篩選出耐高濃度食鹽的微生物2 2、要驗(yàn)證以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基、要驗(yàn)證以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基對(duì)土壤中的細(xì)菌確實(shí)具有選擇作用，他對(duì)土壤中的細(xì)菌確實(shí)具有選擇作用，他該如何設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。該如何設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。思索：思索： 配制培養(yǎng)基 尿素培養(yǎng)基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 瓊脂糖 0.5g 酚紅 0.25g 尿素 10ml LB培養(yǎng)基 蛋白胨： 0.25g 酵母粉： 0.12g NaCl： 0.25g 瓊脂糖： 0.5g 對(duì)照組對(duì)照組選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)組3 3、請(qǐng)你提供一種方法，判斷分解、請(qǐng)你提供一種方法，判斷

3、分解尿素的細(xì)菌確實(shí)能將尿素分解成氨。尿素的細(xì)菌確實(shí)能將尿素分解成氨。思索：思索： 方法：在以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基方法：在以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑中加入酚紅指示劑, ,接種培養(yǎng)該細(xì)菌，假接種培養(yǎng)該細(xì)菌，假設(shè)設(shè)指示劑變紅，說明該種菌分解了尿素。指示劑變紅，說明該種菌分解了尿素。二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)?zāi)康? : 使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細(xì)菌使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細(xì)菌( (有脲有脲酶酶) ) 通過指示劑酚紅顏色的變化檢知培養(yǎng)基通過指示劑酚紅顏色的變化檢知培養(yǎng)基pHpH的變化的變化( (脲酶催化的化學(xué)反應(yīng)脲酶催化的化學(xué)反應(yīng)) ) 統(tǒng)計(jì)被檢測的土壤中含有的以尿素為氮源

4、的微生統(tǒng)計(jì)被檢測的土壤中含有的以尿素為氮源的微生物的數(shù)量物的數(shù)量三、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：三、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：（一哪些土壤中含有這種以尿素為氮源的微生物多？（一哪些土壤中含有這種以尿素為氮源的微生物多？（選材的問題）（選材的問題）（二此實(shí)驗(yàn)用到的選擇培養(yǎng)基必需含有哪些物質(zhì)？（二此實(shí)驗(yàn)用到的選擇培養(yǎng)基必需含有哪些物質(zhì)？（三可用什么指標(biāo)認(rèn)定不同土壤中選擇出的微生物（三可用什么指標(biāo)認(rèn)定不同土壤中選擇出的微生物對(duì)尿素分解能力的高低？對(duì)尿素分解能力的高低？（四統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)量可用哪些方法？（四統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)量可用哪些方法？沒硬化，腐殖質(zhì)豐富的土壤沒硬化，腐殖質(zhì)豐富的土壤碳源、尿素、無機(jī)鹽、水、

5、酚紅碳源、尿素、無機(jī)鹽、水、酚紅培養(yǎng)基紅色的深淺培養(yǎng)基紅色的深淺稀釋涂布平板法，顯微鏡直接計(jì)數(shù)法稀釋涂布平板法，顯微鏡直接計(jì)數(shù)法三、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：三、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：（五用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，菌落數(shù)在（五用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，菌落數(shù)在30-30030-300計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)。重復(fù)性原則重復(fù)性原則對(duì)照原則對(duì)照原則（排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)的可信度）做一系列濃度梯度實(shí)驗(yàn)，探究合適的稀釋度做一系列濃度梯度實(shí)驗(yàn)，探究合適的稀釋度（六實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要遵循的原則：（六實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要遵循的原則：（二制備細(xì)菌懸液制備成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀釋液配制菌懸液1個(gè)

6、個(gè)99ml無菌水無菌水 2個(gè)個(gè)4.5ml無菌水無菌水得得10-2, 10-3, 10-4的菌懸液的菌懸液1g土壤土壤倒平板 需要倒3個(gè)LB平板，9個(gè)尿素平板LB(對(duì)照)尿素10-310-410-5每個(gè)稀釋度每個(gè)稀釋度 1個(gè)個(gè)LB對(duì)照平板對(duì)照平板 3個(gè)尿素平板個(gè)尿素平板(平行重復(fù)組平行重復(fù)組)接種 取0.1ml菌懸液涂布分離高濃度高濃度低濃度，換槍頭低濃度，換槍頭低濃度低濃度高濃度，可不用換槍頭高濃度，可不用換槍頭涂布分離37倒置培養(yǎng)按濃度捆成一摞按濃度捆成一摞恒溫恒溫37培育培育10-4 、 10-3,、 10-2利用血球計(jì)數(shù)板的缺點(diǎn)利用血球計(jì)數(shù)板的缺點(diǎn):不能區(qū)分死菌與活菌不能區(qū)分死菌與活菌不

7、適于對(duì)運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌計(jì)數(shù)不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌計(jì)數(shù)需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡底下難以觀察個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡底下難以觀察5.5.在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，A A同學(xué)從對(duì)應(yīng)同學(xué)從對(duì)應(yīng)106106培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上篩選出大約篩選出大約150150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約5050個(gè)菌落。個(gè)菌落。A A同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生原因可能有同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生原因可能有( )( ) 由于土樣不同由于土樣不同 由于培養(yǎng)基污染由于培養(yǎng)基污染 由于操作失誤由于操作失誤 沒有設(shè)置對(duì)照沒有設(shè)置對(duì)照 A A B B C C D DA 練習(xí)題

8、練習(xí)題1 1、選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許、選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許 種類的微生物種類的微生物生長，同時(shí)生長，同時(shí) 和和 其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基。 阻止阻止 特定特定抑制抑制2 2、常用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。當(dāng)樣品、常用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。當(dāng)樣品的的 足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)于樣品稀釋液中的一個(gè) 。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，就能推測出樣

9、品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在一般選擇菌落數(shù)在 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。此外，測定的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。此外，測定微生物數(shù)量的常用方法還有微生物數(shù)量的常用方法還有 直接計(jì)數(shù)。直接計(jì)數(shù)。 顯微鏡顯微鏡 稀釋度稀釋度細(xì)菌細(xì)菌30-30030-3003 3、在同一稀釋度下，至少對(duì)、在同一稀釋度下，至少對(duì)3 3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出求出 ，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。細(xì)菌的數(shù)目。 平均數(shù)平均數(shù) 4 4、用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀、用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)

10、應(yīng)稀釋倍數(shù)為釋倍數(shù)為106106的培養(yǎng)基中得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的選項(xiàng)的培養(yǎng)基中得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的選項(xiàng)是是 A A涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230230 B B涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215215和和260260，取平均值，取平均值238238 C C涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是2121、212212和和256256，取，取平均值平均值163163 D D涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是2l02l0、240240和和250250，取，取平均值平均值233233D 5.5.在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，A A同學(xué)從對(duì)應(yīng)同學(xué)從對(duì)應(yīng)106106培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上篩