電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用ppt課件

1、電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用的作用小組成員 高玉梅 于 虹 郭 峰 劉 陽 張 杰 指導(dǎo)教師 吳 巖 教 授 2019級電子顯微鏡技術(shù)碩士研究生課程電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用一、電子顯微鏡技術(shù)一、電子顯微鏡技術(shù) 二、診斷病理學(xué)二、診斷病理學(xué) 三、電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用三、電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用四、討論四、討論（一概念（一概念電子顯微鏡技術(shù)：也稱電子顯微技術(shù) 或電子顯微術(shù) 概念概念電子顯微鏡技術(shù) 電鏡精密儀器 樣品制備技術(shù) 1、電子顯微鏡、電子顯微鏡 ：是用電子束成像的顯微鏡，電子：是用電子束成像的顯

2、微鏡，電子顯微鏡是一種高精密度的電子光學(xué)儀器，它具有較顯微鏡是一種高精密度的電子光學(xué)儀器，它具有較高分辨率本領(lǐng)和放大倍數(shù)，是觀察和研究物質(zhì)微觀高分辨率本領(lǐng)和放大倍數(shù)，是觀察和研究物質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)的重要工具。結(jié)構(gòu)的重要工具。 發(fā)明背景：它是在發(fā)現(xiàn)電子束具有波動性質(zhì)及利發(fā)明背景：它是在發(fā)現(xiàn)電子束具有波動性質(zhì)及利用磁場改變電子束行徑，在上述理論的指導(dǎo)下發(fā)用磁場改變電子束行徑，在上述理論的指導(dǎo)下發(fā)明出的。明出的。電子顯微鏡主要分為兩種類型：一種是觀察樣品電子顯微鏡主要分為兩種類型：一種是觀察樣品內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)的透射電子顯微鏡，另一種是揭示內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)的透射電子顯微鏡，另一種是揭示樣品表面形貌的掃描電子顯微鏡

3、。樣品表面形貌的掃描電子顯微鏡。電子顯微鏡特征：電鏡與光鏡的區(qū)別電子顯微鏡特征：電鏡與光鏡的區(qū)別掃描電鏡與透射電鏡比較：（見下表）掃描電鏡與透射電鏡比較：（見下表）掃描電鏡和透射電鏡比較掃描電鏡和透射電鏡比較項目掃描電鏡透射電鏡分辨本領(lǐng)70100 2 發(fā)大倍數(shù)2040萬倍萬倍100萬倍萬倍加速電壓150 KV幾十千伏幾百千伏幾十千伏幾百千伏圖像特點景深長、三維立體結(jié)構(gòu)景深長、三維立體結(jié)構(gòu)景深小、兩維平面結(jié)構(gòu)景深小、兩維平面結(jié)構(gòu)樣品制備固定固定-脫水脫水-臨界點干燥臨界點干燥-噴涂金屬噴涂金屬固定固定-脫水脫水-包埋包埋-超薄切片超薄切片-重金屬染色重金屬染色樣品尺寸1cm350100nm切片切

4、片樣品損傷光斑直徑只有幾十埃的電子束在光斑直徑只有幾十埃的電子束在樣品上掃描，對樣品損傷極小樣品上掃描，對樣品損傷極小大約大約1m直徑電子束打到樣品上，造成一直徑電子束打到樣品上，造成一定程度損傷定程度損傷樣品成像信號二次電子、背散射電子二次電子、背散射電子透射電子透射電子發(fā)大倍數(shù)調(diào)節(jié)用衰減器改變掃描線圈電流，進用衰減器改變掃描線圈電流，進行放大率調(diào)節(jié)行放大率調(diào)節(jié)調(diào)整中間鏡電流改變放大率調(diào)整中間鏡電流改變放大率決定分辨率因素入射電子束直徑?jīng)Q定圖像分辨率。入射電子束直徑?jīng)Q定圖像分辨率。加速電壓、透鏡縮小率、電源穩(wěn)定度加速電壓、透鏡縮小率、電源穩(wěn)定度及像差決定電子束斑直徑及像差決定電子束斑直徑加速

5、電壓、電源穩(wěn)定度、像差、樣品厚度加速電壓、電源穩(wěn)定度、像差、樣品厚度等影響分辨率等影響分辨率本圖片來自中科科儀本圖片來自中科科儀2、樣品制備、樣品制備透射電鏡樣品制備的常用方法：包括超薄切片、冷凍復(fù)型、透射電鏡樣品制備的常用方法：包括超薄切片、冷凍復(fù)型、負(fù)染色等。負(fù)染色等。 掃描電鏡樣品制備：比透射電鏡樣品制備簡單。除保存樣品掃描電鏡樣品制備：比透射電鏡樣品制備簡單。除保存樣品表面形貌結(jié)構(gòu)外，只要求樣品干燥并能導(dǎo)電，而不需包埋和表面形貌結(jié)構(gòu)外，只要求樣品干燥并能導(dǎo)電，而不需包埋和切片。制備方法與透射電鏡樣品制備方法一樣切片。制備方法與透射電鏡樣品制備方法一樣 。電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作

6、用電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用一、電子顯微鏡技術(shù)一、電子顯微鏡技術(shù)二、診斷病理學(xué)二、診斷病理學(xué)三、電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用三、電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用四、討論四、討論二診斷病理學(xué)概述二診斷病理學(xué)概述病理學(xué)是研究疾病病因、發(fā)病機制、形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能、代病理學(xué)是研究疾病病因、發(fā)病機制、形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能、代謝變化的一門基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及其與臨床醫(yī)學(xué)之間的橋梁學(xué)科。謝變化的一門基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及其與臨床醫(yī)學(xué)之間的橋梁學(xué)科。 主要包括基礎(chǔ)病理學(xué)、實驗病理學(xué)及診斷病理學(xué)主要包括基礎(chǔ)病理學(xué)、實驗病理學(xué)及診斷病理學(xué)(以往稱以往稱外科病理學(xué)或臨床病理學(xué)外科病理學(xué)或臨床病理學(xué)) 。各級醫(yī)院病理科所從事的工。各級

7、醫(yī)院病理科所從事的工作主要是診斷病理學(xué)。作主要是診斷病理學(xué)。 病理檢查內(nèi)容通常包括活體組織檢查、手術(shù)切除標(biāo)本檢查、病理檢查內(nèi)容通常包括活體組織檢查、手術(shù)切除標(biāo)本檢查、術(shù)中冰凍檢查、細(xì)胞學(xué)檢查、尸體解剖檢查等。術(shù)中冰凍檢查、細(xì)胞學(xué)檢查、尸體解剖檢查等。 病理檢查的手段很多病理檢查的手段很多,如如:HE 常規(guī)檢查、特殊染色常規(guī)檢查、特殊染色(組織化組織化學(xué)學(xué)) 、免疫組化、原位分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)、免疫組化、原位分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)( PCR) 、電子顯微鏡檢查、病理圖像分析、流式細(xì)胞儀檢查、細(xì)胞電子顯微鏡檢查、病理圖像分析、流式細(xì)胞儀檢查、細(xì)胞培養(yǎng)、傳真病理學(xué)培養(yǎng)、傳真病理學(xué)( telepa

8、thology) 等。等。 電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用一、電子顯微鏡技術(shù)一、電子顯微鏡技術(shù)二、診斷病理學(xué)二、診斷病理學(xué)三、電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用三、電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用四、討論四、討論三電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用三電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用（一電鏡檢查起決定性作用（一電鏡檢查起決定性作用（二電鏡檢查起參考和修正作用（二電鏡檢查起參考和修正作用（三電鏡檢查起驗正作用（三電鏡檢查起驗正作用三電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上三電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用的作用（一電鏡檢查起決定性作用：電鏡發(fā)現(xiàn)特異性超微結(jié)構(gòu)（一電鏡檢查起決定性

9、作用：電鏡發(fā)現(xiàn)特異性超微結(jié)構(gòu)信息做出最后病理診斷。信息做出最后病理診斷。 例：男例：男,39 歲歲,發(fā)現(xiàn)右側(cè)頸部無痛腫物發(fā)現(xiàn)右側(cè)頸部無痛腫物1 年余年余,花生米大花生米大,取腫物做活檢。光鏡取腫物做活檢。光鏡:增大的淋巴結(jié)增大的淋巴結(jié),結(jié)構(gòu)紊亂結(jié)構(gòu)紊亂,但仍殘留濾但仍殘留濾泡與淋巴竇泡與淋巴竇,竇腔及淋巴索充以大量胞質(zhì)豐富的嗜伊紅細(xì)竇腔及淋巴索充以大量胞質(zhì)豐富的嗜伊紅細(xì)胞胞,直徑約直徑約20 m。核圓。核圓,卵圓或扭曲狀。間有增生的淋巴卵圓或扭曲狀。間有增生的淋巴細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞。電鏡細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞。電鏡:大細(xì)胞排列疏松、無連接、大細(xì)胞排列疏松、無連接、胞質(zhì)寬廣胞質(zhì)寬廣,見有似網(wǎng)球拍或柄

10、的雙膜結(jié)構(gòu)見有似網(wǎng)球拍或柄的雙膜結(jié)構(gòu)(Birbeck 顆粒顆粒) ,證明光鏡下嗜伊紅大細(xì)胞為朗格漢斯細(xì)胞證明光鏡下嗜伊紅大細(xì)胞為朗格漢斯細(xì)胞(圖圖1) 。診斷為。診斷為淋巴結(jié)朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增生癥。電鏡診斷具有獨特淋巴結(jié)朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增生癥。電鏡診斷具有獨特的確診價值。的確診價值。圖圖1朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增生癥朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增生癥:見雙見雙模構(gòu)成的似網(wǎng)球拍狀的模構(gòu)成的似網(wǎng)球拍狀的Birbeck 顆粒。顆粒。 EM 10 000 注：圖片取自注：圖片取自 張瑞祥張瑞祥,齊潔敏齊潔敏, 張潔茹張潔茹等等.235例疑難病理標(biāo)本的電鏡診斷價值例疑難病理標(biāo)本的電鏡診斷價值 . 臨床與實

11、驗病理學(xué)雜志臨床與實驗病理學(xué)雜志;2019 ;155）（二電鏡檢查起參考和修正作用：電鏡獲得的信息對光鏡結(jié)果予以補充或修正,最終做出最后病理診斷。 例：男,因左頜下淋巴結(jié)腫大就診。經(jīng)淋巴結(jié)活檢,病理診斷為淋巴組織增生。不久頜下淋巴結(jié)又腫大,再次淋巴結(jié)(頜下) 活檢病理診斷為惡性淋巴瘤(免疫母細(xì)胞型) 。電鏡:瘤細(xì)胞大、多邊形或不規(guī)則形,核質(zhì)比大,核膜彎曲,不規(guī)則或奇特的內(nèi)陷,核常染色質(zhì)豐富,網(wǎng)欄狀大核仁。少許胞質(zhì)突,胞質(zhì)內(nèi)核糖體豐富,其他細(xì)胞器稀少。質(zhì)膜間見發(fā)育不良的橋粒樣連接(圖2) 。最后病理診斷為頜下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌。隨后臨床發(fā)現(xiàn)鼻咽癌原發(fā)灶。此例電鏡有確診價值。圖圖2 轉(zhuǎn)移癌轉(zhuǎn)移癌:瘤細(xì)胞

12、大、長圓形瘤細(xì)胞大、長圓形,胞核大、梭形胞核大、梭形,核膜不平滑核膜不平滑,顯著增大的核質(zhì)比質(zhì)膜顯著增大的核質(zhì)比質(zhì)膜間有橋粒樣連接間有橋粒樣連接,胞質(zhì)含少許欠發(fā)達的細(xì)胞器胞質(zhì)含少許欠發(fā)達的細(xì)胞器,網(wǎng)欄狀大核仁網(wǎng)欄狀大核仁,兩團染色質(zhì)間顆粒。兩團染色質(zhì)間顆粒。EM 10 000 注：圖片取自 張瑞祥,齊潔敏, 張潔茹等.235例疑難病理標(biāo)本的電鏡診斷價值 . 臨床與實驗病理學(xué)雜志;2019 ;155）（三電鏡檢查起驗正作用：超微結(jié)構(gòu)信息進一步證實、豐富了光鏡的組織學(xué)診斷 例：男,30 歲,肝穿活檢。光鏡診斷:慢遷肝。雖未見典型碎屑樣壞死,但不除外活動性變化。電鏡見肝細(xì)胞大,疏松,細(xì)胞周圍間隙加大

13、,有微絨毛化,滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生,內(nèi)含管狀體,肝竇內(nèi)充塞膠原纖維。有的區(qū)域見部分肝細(xì)胞胞質(zhì)有胞溶,周圍有淋巴細(xì)胞浸潤。最后電鏡診斷:慢性遷延性乙型病毒性肝炎有輕微活動(圖3) 。電鏡有確診價值。圖圖3 慢性遷延性乙型病毒性肝炎慢性遷延性乙型病毒性肝炎:滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生,腔內(nèi)含量多的乙肝表面抗腔內(nèi)含量多的乙肝表面抗原管狀體。原管狀體。EM 8 000注：圖片取自 張瑞祥,齊潔敏, 張潔茹等.235例疑難病理標(biāo)本的電鏡診斷價值 . 臨床與實驗病理學(xué)雜志;2019 ;155）電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用一、電子顯微鏡技術(shù)一、電子顯微鏡技術(shù)二、診斷病理學(xué)

14、二、診斷病理學(xué)三、電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用三、電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用四、討論四、討論四、討論國內(nèi)外對電鏡診斷的價值,在腫瘤應(yīng)用方面報道較多,Gyorkey 等65 %。文獻中電鏡診斷價值的比率高低不同。主要原因是病例的選擇不太相同,使用標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計的方法也不同還有檢查者的光鏡診斷水平或側(cè)重點不同等因素也有關(guān) 應(yīng)用電鏡做最后病理診斷工作應(yīng)用電鏡做最后病理診斷工作,有以下幾點注意：有以下幾點注意：(1) 由于電鏡費用較高,制作程序繁雜,應(yīng)有選擇地送電鏡檢查。有的臨床醫(yī)師,認(rèn)為電鏡是優(yōu)于光鏡的先進技術(shù)而盲目送檢,如胃鏡取胃黏膜活檢無選擇的送電鏡檢查,造成資源、人力和財力的浪費。(2) 電鏡標(biāo)本要求盡可能活體取材,立即投入預(yù)冷的固定液中固定,以利完好地保存細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。 (3) 涉及病原學(xué)診斷,特別是懷疑病毒、支原體、衣原體等微生物感染的標(biāo)本應(yīng)充分使用電鏡。 (4) 作為輔助手段應(yīng)用電鏡時應(yīng)