第24章病毒與細(xì)胞的相互作用

1、臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:第第2424章章 病毒與細(xì)胞的相互作用病毒與細(xì)胞的相互作用制作：臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院制作：臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 微生物與免疫學(xué)教研室微生物與免疫學(xué)教研室臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:第第2424章章 病毒與細(xì)胞的相互作用病毒與細(xì)胞的相互作用第一節(jié)第一節(jié) 病毒的細(xì)胞培養(yǎng)病毒的細(xì)胞培養(yǎng)第二節(jié)第二節(jié) 病毒與細(xì)胞的相互作用病毒與細(xì)胞的相互作用臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生

2、命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:目的要求：目的要求： 1 1、掌握病毒的細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)和、掌握病毒的細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)和 方法方法 以及病毒與以及病毒與細(xì)胞的相互作用機(jī)制。細(xì)胞的相互作用機(jī)制。 2 2、了解病毒持續(xù)性感染的機(jī)制和干擾素的產(chǎn)生和、了解病毒持續(xù)性感染的機(jī)制和干擾素的產(chǎn)生和作用機(jī)理作用機(jī)理 。 重點(diǎn)：病毒的細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)、方法和病毒與細(xì)胞重點(diǎn)：病毒的細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)、方法和病毒與細(xì)胞的相互作用機(jī)理的相互作用機(jī)理 難點(diǎn)：病毒與細(xì)胞的相互作用機(jī)理和病毒持續(xù)性感難點(diǎn)：病毒與細(xì)胞的相互作用機(jī)理和病毒持續(xù)性感染的機(jī)制和干擾素的產(chǎn)生

3、和作用機(jī)理染的機(jī)制和干擾素的產(chǎn)生和作用機(jī)理 臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:第一節(jié)第一節(jié) 病毒的細(xì)胞培養(yǎng)病毒的細(xì)胞培養(yǎng)p病毒是嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生微生物，培養(yǎng)病毒病毒是嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生微生物，培養(yǎng)病毒必須使用細(xì)胞。根據(jù)病毒的不同選用敏感動(dòng)必須使用細(xì)胞。根據(jù)病毒的不同選用敏感動(dòng)物物（動(dòng)物接種）（動(dòng)物接種）、雞胚、雞胚（雞胚接種）（雞胚接種）或離體或離體細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)（細(xì)胞培養(yǎng)）（細(xì)胞培養(yǎng)）。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mail:

4E-mail:一、動(dòng)物接種一、動(dòng)物接種p接種后通常以動(dòng)物發(fā)病、死亡作為感接種后通常以動(dòng)物發(fā)病、死亡作為感染的指標(biāo)。染的指標(biāo)。p按病毒侵襲部位不同選擇適當(dāng)?shù)慕臃N按病毒侵襲部位不同選擇適當(dāng)?shù)慕臃N途徑。嗜神經(jīng)病毒接種在小鼠的腦內(nèi)。途徑。嗜神經(jīng)病毒接種在小鼠的腦內(nèi)。痘苗病毒和單純皰疹病毒接種于家兔痘苗病毒和單純皰疹病毒接種于家兔角膜。角膜。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:p動(dòng)物接種的優(yōu)缺點(diǎn)：動(dòng)物接種的優(yōu)缺點(diǎn)：l 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備；不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備； 技術(shù)簡單；

5、技術(shù)簡單； 易成功易成功l 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：個(gè)體差異大個(gè)體差異大 價(jià)格昂貴價(jià)格昂貴 數(shù)量有限數(shù)量有限 需要隔離畜舍需要隔離畜舍臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:二、雞胚接種二、雞胚接種p一種比較經(jīng)濟(jì)簡便的方法。一種比較經(jīng)濟(jì)簡便的方法。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:l雞胚接

6、種的優(yōu)缺點(diǎn)：雞胚接種的優(yōu)缺點(diǎn)：p優(yōu)點(diǎn)：技術(shù)簡單、來源充沛、價(jià)格低廉、優(yōu)點(diǎn)：技術(shù)簡單、來源充沛、價(jià)格低廉、數(shù)量可大，不需特殊設(shè)備數(shù)量可大，不需特殊設(shè)備p缺點(diǎn)：很多病毒不能適應(yīng)，主要是哺乳缺點(diǎn)：很多病毒不能適應(yīng)，主要是哺乳動(dòng)物的病毒。動(dòng)物的病毒。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:三、細(xì)胞培養(yǎng)三、細(xì)胞培養(yǎng)p細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)(cell culture)是指利用機(jī)械、酶或是指利用機(jī)械、酶或化學(xué)方法使動(dòng)物組織或傳代細(xì)胞分散成單化學(xué)方法使動(dòng)物組織或傳代細(xì)胞分散成單個(gè)乃至個(gè)乃至2 24 4個(gè)細(xì)胞團(tuán)懸液進(jìn)行培養(yǎng)。個(gè)

7、細(xì)胞團(tuán)懸液進(jìn)行培養(yǎng)。 臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:(一一)細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：p每個(gè)細(xì)胞生理特性基本一致，對(duì)病毒易每個(gè)細(xì)胞生理特性基本一致，對(duì)病毒易感性相等感性相等p無個(gè)體差異，準(zhǔn)確性和重復(fù)性好無個(gè)體差異，準(zhǔn)確性和重復(fù)性好p嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作p細(xì)胞培養(yǎng)本身就能顯示病毒的生長特征細(xì)胞培養(yǎng)本身就能顯示病毒的生長特征p應(yīng)用空斑技術(shù)可進(jìn)行病毒的克隆化應(yīng)用空斑技術(shù)可進(jìn)行病毒的克隆化臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mail:1

8、3666399213 E-mail:（二）細(xì)胞的類型（二）細(xì)胞的類型&根據(jù)細(xì)胞來源、染色體特征及傳代次數(shù)，可分根據(jù)細(xì)胞來源、染色體特征及傳代次數(shù)，可分為三種類型：為三種類型：1.原代細(xì)胞原代細(xì)胞(primary cell)：動(dòng)物組織經(jīng)胰蛋白酶：動(dòng)物組織經(jīng)胰蛋白酶消化處理，使細(xì)胞分散而獲得的單個(gè)細(xì)胞，再消化處理，使細(xì)胞分散而獲得的單個(gè)細(xì)胞，再生長于培養(yǎng)器皿中。大多數(shù)組織均可制備原代生長于培養(yǎng)器皿中。大多數(shù)組織均可制備原代細(xì)胞，但生長的快慢及難易程度不一。細(xì)胞，但生長的快慢及難易程度不一。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mail:1366

9、6399213 E-mail:（二）細(xì)胞的類型（二）細(xì)胞的類型2.二倍體細(xì)胞二倍體細(xì)胞(diploid cell strain)：將長成單層：將長成單層的原代細(xì)胞消化分散成單個(gè)細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)的原代細(xì)胞消化分散成單個(gè)細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)傳代，其染色體數(shù)與原代細(xì)胞一樣，保持其傳代，其染色體數(shù)與原代細(xì)胞一樣，保持其二倍染色體數(shù)目的細(xì)胞，稱為二倍體細(xì)胞。二倍染色體數(shù)目的細(xì)胞，稱為二倍體細(xì)胞。但巨噬細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等體外培養(yǎng)時(shí)一般不但巨噬細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等體外培養(yǎng)時(shí)一般不分裂，很難獲得二倍體細(xì)胞株。分裂，很難獲得二倍體細(xì)胞株。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-ma

10、ilE-mail:（二）細(xì)胞的類型（二）細(xì)胞的類型3.傳代細(xì)胞系傳代細(xì)胞系(diploid cell line)：能在體外持續(xù)增殖傳代的細(xì)：能在體外持續(xù)增殖傳代的細(xì)胞，大多數(shù)由癌細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而成，染色體數(shù)胞，大多數(shù)由癌細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而成，染色體數(shù)目不正常，為異倍體。目不正常，為異倍體。p 優(yōu)點(diǎn)：傳代及培養(yǎng)方便優(yōu)點(diǎn)：傳代及培養(yǎng)方便p 缺點(diǎn)：對(duì)有的分離野毒（樣本中的病毒）不敏感缺點(diǎn)：對(duì)有的分離野毒（樣本中的病毒）不敏感p 由于擔(dān)心致腫瘤的潛在危險(xiǎn)，傳代細(xì)胞一般不能用于制由于擔(dān)心致腫瘤的潛在危險(xiǎn)，傳代細(xì)胞一般不能用于制備疫苗。備疫苗。p 常用傳代細(xì)胞系：常用傳

11、代細(xì)胞系：HeLe(人子宮癌細(xì)胞人子宮癌細(xì)胞)，Vero(非洲綠猴非洲綠猴腎細(xì)胞腎細(xì)胞)，BHK21(乳倉鼠腎細(xì)胞乳倉鼠腎細(xì)胞)，PK15(豬腎細(xì)胞豬腎細(xì)胞)等等臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:（三）細(xì)胞培養(yǎng)的方法（三）細(xì)胞培養(yǎng)的方法p常用的有靜置培養(yǎng)和旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)兩種常用的有靜置培養(yǎng)和旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)兩種1. 1.靜置培養(yǎng)靜置培養(yǎng)(stationary culture)：實(shí)驗(yàn)室常用。將：實(shí)驗(yàn)室常用。將消化分散的細(xì)胞懸液裝瓶，消化分散的細(xì)胞懸液裝瓶，5%CO5%CO2 2溫箱靜置培養(yǎng)，溫箱靜置培養(yǎng)，數(shù)天后細(xì)

12、胞沉降并貼附在玻面上生長分裂，最數(shù)天后細(xì)胞沉降并貼附在玻面上生長分裂，最后長成單層。哺乳動(dòng)物和禽類的細(xì)胞培養(yǎng)溫度后長成單層。哺乳動(dòng)物和禽類的細(xì)胞培養(yǎng)溫度一般為一般為3737。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:（三）細(xì)胞培養(yǎng)的方法（三）細(xì)胞培養(yǎng)的方法2. 2.旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)(roller culture)：大規(guī)模生產(chǎn)疫苗。：大規(guī)模生產(chǎn)疫苗。細(xì)胞在玻瓶內(nèi)生長時(shí)，玻瓶不斷緩慢旋轉(zhuǎn)，細(xì)胞在玻瓶內(nèi)生長時(shí)，玻瓶不斷緩慢旋轉(zhuǎn)，細(xì)胞貼附于玻瓶四周，長成單層。細(xì)胞貼附于玻瓶四周，長成單層。p基本方法與靜置培養(yǎng)基本

13、相同，不同之處是基本方法與靜置培養(yǎng)基本相同，不同之處是培養(yǎng)的細(xì)胞不斷緩慢旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)的細(xì)胞不斷緩慢旋轉(zhuǎn)（5-10r/h）。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:（三）細(xì)胞培養(yǎng)的方法（三）細(xì)胞培養(yǎng)的方法p 另外為滿足某些特定需要可采取懸浮培養(yǎng)和微載體培養(yǎng)另外為滿足某些特定需要可采取懸浮培養(yǎng)和微載體培養(yǎng)兩種兩種1.懸浮培養(yǎng)懸浮培養(yǎng)(suspension culture)：攪拌使細(xì)胞處于懸浮狀態(tài)，：攪拌使細(xì)胞處于懸浮狀態(tài)，并不斷補(bǔ)充營養(yǎng)和矯正并不斷補(bǔ)充營養(yǎng)和矯正PH值，使之生長或存活，適用于值，使之生長或存活，

14、適用于不需要貼壁生長的細(xì)胞系。如不需要貼壁生長的細(xì)胞系。如NS-1（一種骨髓瘤細(xì)胞系）（一種骨髓瘤細(xì)胞系）1.微載體培養(yǎng)微載體培養(yǎng)(microcarrier culture)：在懸浮培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，：在懸浮培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，結(jié)合微載體的培養(yǎng)技術(shù)，微載體直徑在結(jié)合微載體的培養(yǎng)技術(shù)，微載體直徑在100-200m的微的微粒，對(duì)細(xì)胞無毒，細(xì)胞附著其上生長成單層，由于單位粒，對(duì)細(xì)胞無毒，細(xì)胞附著其上生長成單層，由于單位體積表面積大，所獲得的細(xì)胞數(shù)多。對(duì)規(guī)?；?xì)胞生產(chǎn)體積表面積大，所獲得的細(xì)胞數(shù)多。對(duì)規(guī)模化細(xì)胞生產(chǎn)和疫苗生產(chǎn)有較大吸引力。和疫苗生產(chǎn)有較大吸引力。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王

15、自然E-mailE-mail:第二節(jié)第二節(jié) 病毒與細(xì)胞的相互作用病毒與細(xì)胞的相互作用p殺細(xì)胞感染殺細(xì)胞感染p非殺細(xì)胞感染非殺細(xì)胞感染 引致持續(xù)感染，對(duì)細(xì)胞代謝無影響。引致持續(xù)感染，對(duì)細(xì)胞代謝無影響。p產(chǎn)生干擾素產(chǎn)生干擾素 臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:p 病毒的種類千差萬別，宿主的細(xì)胞的種類也多達(dá)病毒的種類千差萬別，宿主的細(xì)胞的種類也多達(dá)200200多種，病毒與宿主細(xì)胞之間的作用的表現(xiàn)形式各異。多種，病毒與宿主細(xì)胞之間的作用的表現(xiàn)形式各異。一

16、、病毒與細(xì)胞相互作用的類型一、病毒與細(xì)胞相互作用的類型 病毒感染可分為病毒感染可分為殺細(xì)胞殺細(xì)胞及及非殺細(xì)胞非殺細(xì)胞兩大類。并非所兩大類。并非所有的病毒感染都能產(chǎn)生和釋放子代病毒顆粒。宿主細(xì)有的病毒感染都能產(chǎn)生和釋放子代病毒顆粒。宿主細(xì)胞感染病毒發(fā)生的變化可能是細(xì)胞死亡或細(xì)胞轉(zhuǎn)化，胞感染病毒發(fā)生的變化可能是細(xì)胞死亡或細(xì)胞轉(zhuǎn)化，也可能是病毒非生產(chǎn)性感染，或稱頓挫感染。也可能是病毒非生產(chǎn)性感染，或稱頓挫感染。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:p某些種類的細(xì)胞是允許性的，可讓病毒完某些種類的細(xì)胞是允許性

17、的，可讓病毒完成復(fù)制過程；而另一些則阻斷了病毒的復(fù)成復(fù)制過程；而另一些則阻斷了病毒的復(fù)制過程的某個(gè)環(huán)節(jié)，此類細(xì)胞稱為非允許制過程的某個(gè)環(huán)節(jié)，此類細(xì)胞稱為非允許性的。性的。p病毒感染允許性及非允許性細(xì)胞均可產(chǎn)生病毒感染允許性及非允許性細(xì)胞均可產(chǎn)生細(xì)胞的病理變化。細(xì)胞的病理變化。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:p 最重要的非生產(chǎn)性的病毒與細(xì)胞的相互作用是持續(xù)最重要的非生產(chǎn)性的病毒與細(xì)胞的相互作用是持續(xù)感染。感染。p 持續(xù)感染（持續(xù)感染（persistent infection）：是指持續(xù)長時(shí)：是指持

18、續(xù)長時(shí)間的感染。在感染過程中不形成感染性的病毒顆粒，間的感染。在感染過程中不形成感染性的病毒顆粒，可能是病毒的基因組被整合到宿主細(xì)胞可能是病毒的基因組被整合到宿主細(xì)胞DNA內(nèi)，內(nèi)，或以附加體形式存在?；蛞愿郊芋w形式存在。p 潛伏感染的細(xì)胞在某些情況下并不釋放病毒顆粒，潛伏感染的細(xì)胞在某些情況下并不釋放病毒顆粒，在被激活的情況下則可變?yōu)樯a(chǎn)性的。在被激活的情況下則可變?yōu)樯a(chǎn)性的。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail: 二、病毒引致的殺細(xì)胞變化二、病毒引致的殺細(xì)胞變化( (一一) )細(xì)胞病變細(xì)胞病變(cy

19、topathic effect,CPE)p由病毒感染導(dǎo)致的細(xì)胞損傷。由病毒感染導(dǎo)致的細(xì)胞損傷。CPE能在光能在光學(xué)顯微鏡下觀察。學(xué)顯微鏡下觀察。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:&50%50%組織細(xì)胞感染量組織細(xì)胞感染量（TCID50）p能夠使半數(shù)組織細(xì)胞在能夠使半數(shù)組織細(xì)胞在一定條件下發(fā)生細(xì)一定條件下發(fā)生細(xì)胞病變胞病變的的病毒量病毒量。用于判定病毒的毒力。用于判定病毒的毒力。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mail:1366639921

20、3 E-mail:&細(xì)胞病變的表現(xiàn)因病毒與細(xì)胞的種類而異，有多種形式細(xì)胞病變的表現(xiàn)因病毒與細(xì)胞的種類而異，有多種形式細(xì)胞圓縮：細(xì)胞圓縮：如痘病毒和呼腸孤病毒等；如痘病毒和呼腸孤病毒等；細(xì)胞聚合：細(xì)胞聚合：如腺病毒；如腺病毒； 形成合胞體：形成合胞體：細(xì)胞融合形成，如副粘病毒和皰疹病毒；細(xì)胞融合形成，如副粘病毒和皰疹病毒； 細(xì)胞腫大：細(xì)胞腫大：包涵體：包涵體：有些病毒可能形成。有些病毒可能形成。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:CPE細(xì)胞腫大細(xì)胞腫大細(xì)胞圓縮細(xì)胞圓縮 形成合胞體形成合胞體臨沂

21、大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:正常細(xì)胞正常細(xì)胞CPECPECPE觀察觀察臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:CPECPE觀察觀察正常單層正常單層A72A72細(xì)胞細(xì)胞接種犬冠狀病毒（接種犬冠狀病毒（CCVCCV）后形成后形成合胞體的的單層合胞體的的單層A72A72細(xì)胞細(xì)胞臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:細(xì)胞

22、折光性細(xì)胞折光性，變圓，局部，變圓，局部全層，死亡脫落，如：全層，死亡脫落，如：腸道病毒。腸道病毒。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:細(xì)胞聚集成叢，似葡萄串狀，細(xì)胞間常有細(xì)絲狀間橋細(xì)胞聚集成叢，似葡萄串狀，細(xì)胞間常有細(xì)絲狀間橋連接，細(xì)胞變圓或膨大，如：腺病毒。連接，細(xì)胞變圓或膨大，如：腺病毒。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:細(xì)胞融合形成多核的巨細(xì)胞，稱為細(xì)胞融合形成多核的巨細(xì)胞，稱為“合胞體合胞體”

23、，如副粘、牛白，如副粘、牛白血病病毒等。血病病毒等。 臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:胞漿內(nèi)有空泡形成，如：猴病毒胞漿內(nèi)有空泡形成，如：猴病毒SV40、呼腸孤病毒等。、呼腸孤病毒等。 臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:(1)(1)病毒對(duì)宿主細(xì)胞膜的影響病毒對(duì)宿主細(xì)胞膜的影響p 一些具有有融合活性的表面蛋白的有囊膜病一些具有有融合活性的表面蛋白的有囊膜病毒能夠啟動(dòng)細(xì)胞之間的融合，形成多核細(xì)胞毒能夠啟動(dòng)

24、細(xì)胞之間的融合，形成多核細(xì)胞如合胞體病毒。如合胞體病毒。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:p 合胞體合胞體（syncytia）：）：是病毒感染后導(dǎo)致感染細(xì)胞及相是病毒感染后導(dǎo)致感染細(xì)胞及相鄰細(xì)胞細(xì)胞膜融合的產(chǎn)物，表現(xiàn)為若干細(xì)胞的相鄰細(xì)胞鄰細(xì)胞細(xì)胞膜融合的產(chǎn)物，表現(xiàn)為若干細(xì)胞的相鄰細(xì)胞膜消失，成為多核巨細(xì)胞。膜消失，成為多核巨細(xì)胞。 臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:(2)(2)病毒對(duì)細(xì)胞骨架的影響病毒

25、對(duì)細(xì)胞骨架的影響p 許多病毒的感染會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞骨架纖維系統(tǒng)（細(xì)胞許多病毒的感染會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞骨架纖維系統(tǒng)（細(xì)胞骨架由維絲、中介絲及維管組成）的瓦解骨架由維絲、中介絲及維管組成）的瓦解 。由于。由于細(xì)胞骨架在維持細(xì)胞形態(tài)中起一定作用，所以病細(xì)胞骨架在維持細(xì)胞形態(tài)中起一定作用，所以病毒引起細(xì)胞骨架的改變是受染細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化的原毒引起細(xì)胞骨架的改變是受染細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化的原因之一。因之一。 臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:& 病毒引致的細(xì)胞凋亡和壞死病毒引致的細(xì)胞凋亡和壞死p 細(xì)胞的死亡則是因病毒感染引起

26、了細(xì)胞的生理性死細(xì)胞的死亡則是因病毒感染引起了細(xì)胞的生理性死亡所致，亦即程序性死亡，或稱為凋亡亡所致，亦即程序性死亡，或稱為凋亡(apoptosis)。p 凋亡與壞死的細(xì)胞有不同的形態(tài)變化，凋亡細(xì)胞的凋亡與壞死的細(xì)胞有不同的形態(tài)變化，凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化。內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活，染色質(zhì)濃縮、邊緣化。內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活，將細(xì)胞將細(xì)胞DNA降解成降解成180-200dp的片段，可在瓊脂糖凝的片段，可在瓊脂糖凝膠電泳時(shí)出現(xiàn)特征性的電泳帶，稱之為膠電泳時(shí)出現(xiàn)特征性的電泳帶，稱之為“梯帶梯帶”。壞死的細(xì)胞沒有內(nèi)切酶激活所致的變化。壞死的細(xì)胞沒有內(nèi)切酶激活所致的變化。p 凋亡是宿主細(xì)胞的重要防

27、御機(jī)制，細(xì)胞壞死總是在凋亡是宿主細(xì)胞的重要防御機(jī)制，細(xì)胞壞死總是在病毒復(fù)制完成之后發(fā)生。病毒復(fù)制完成之后發(fā)生。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail: 病毒引起的細(xì)胞調(diào)亡病毒引起的細(xì)胞調(diào)亡臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:&空斑試驗(yàn)空斑試驗(yàn)p將將適當(dāng)濃度適當(dāng)濃度的病毒懸液加入單層細(xì)胞培養(yǎng)的病毒懸液加入單層細(xì)胞培養(yǎng)中，當(dāng)病毒吸附細(xì)胞后，再覆蓋一層融化中，當(dāng)病毒吸附細(xì)胞后，再覆蓋一層融化的瓊脂。病毒在細(xì)

28、胞內(nèi)復(fù)制后產(chǎn)生局限性的瓊脂。病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制后產(chǎn)生局限性病灶，病灶逐漸擴(kuò)大，肉眼也能看見，此病灶，病灶逐漸擴(kuò)大，肉眼也能看見，此即即空斑試驗(yàn)空斑試驗(yàn)。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:CELLSl 空斑是由一個(gè)感染性病毒粒子復(fù)制形成的，類似于細(xì)空斑是由一個(gè)感染性病毒粒子復(fù)制形成的，類似于細(xì)菌的菌落，稱為空斑形成單位菌的菌落，稱為空斑形成單位(Plaque-formin

29、g unit，PFU)。病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升含有的。病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU來表示。來表示。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:l空斑試驗(yàn)的用途：空斑試驗(yàn)的用途：1. 1. 測定病毒數(shù)量測定病毒數(shù)量2. 2.

30、 純化病毒純化病毒 單個(gè)空斑作懸液，梯度稀釋后再作空斑，單個(gè)空斑作懸液，梯度稀釋后再作空斑，可獲得病毒克隆?？色@得病毒克隆。3. 3. 鑒定病毒鑒定病毒 不同病毒的空斑具有不同的特征。不同病毒的空斑具有不同的特征。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:三、包涵體三、包涵體(inclusion body)p定義：是某些病毒感染細(xì)胞產(chǎn)生的特征性定義：是某些病毒感染細(xì)胞產(chǎn)生的特征性的形態(tài)變化，在普通光學(xué)顯微鏡下可見胞的形態(tài)變化，在普通光學(xué)顯微鏡下可見胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)的呈嗜酸性或嗜堿性染色、漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)的呈

31、嗜酸性或嗜堿性染色、大小數(shù)量不等的圓形或不規(guī)則形的團(tuán)塊狀大小數(shù)量不等的圓形或不規(guī)則形的團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)，稱為包涵體。結(jié)構(gòu)，稱為包涵體。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:l包涵體的性質(zhì)包涵體的性質(zhì)p 病毒成分的蓄積，如狂犬病毒的病毒成分的蓄積，如狂犬病毒的NegriNegri氏體氏體p 大量晶格樣排列的病毒顆粒組成，如腺病毒的包涵體大量晶格樣排列的病毒顆粒組成，如腺病毒的包涵體p 細(xì)胞變性的產(chǎn)物，不含病毒，如皰疹病毒的包涵體細(xì)胞變性的產(chǎn)物，不含病毒，如皰疹病毒的包涵體臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)

32、院 王自然王自然E-mailE-mail:p意義意義診斷（涂片或組織切片）診斷（涂片或組織切片）某某些病毒的診斷依據(jù)些病毒的診斷依據(jù)發(fā)現(xiàn)包涵體即可確發(fā)現(xiàn)包涵體即可確診診狂犬病，小腦或大腦海馬角有內(nèi)基狂犬病，小腦或大腦海馬角有內(nèi)基氏小體（圓形或卵圓形的嗜酸性小體）氏小體（圓形或卵圓形的嗜酸性小體）CC漿內(nèi)；喉氣管炎漿內(nèi)；喉氣管炎CC核內(nèi)。副流感病核內(nèi)。副流感病毒毒型，型，C C漿內(nèi)、核內(nèi)都有。漿內(nèi)、核內(nèi)都有。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:臨沂大

33、學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:狂犬病毒包涵體狂犬病毒包涵體（Negri body）臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:能產(chǎn)生包涵體的重要的畜禽病毒能產(chǎn)生包涵體的重要的畜禽病毒臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mail:1366

34、6399213 E-mail:四、病毒引致的非殺細(xì)胞變化四、病毒引致的非殺細(xì)胞變化p 非殺細(xì)胞病毒的感染通常引致持續(xù)感染，對(duì)細(xì)胞非殺細(xì)胞病毒的感染通常引致持續(xù)感染，對(duì)細(xì)胞的新陳代謝并無大礙，但同時(shí)還會(huì)產(chǎn)生并釋放子的新陳代謝并無大礙，但同時(shí)還會(huì)產(chǎn)生并釋放子代病毒顆粒。代病毒顆粒。p 持續(xù)感染的細(xì)胞大多能繼續(xù)生長并分裂。持續(xù)感染的細(xì)胞大多能繼續(xù)生長并分裂。p 大多持續(xù)感染的細(xì)胞發(fā)生慢性漸進(jìn)性變化，最終大多持續(xù)感染的細(xì)胞發(fā)生慢性漸進(jìn)性變化，最終死亡。死亡。臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 王自然王自然E-mailE-mail:五、細(xì)胞抗病毒的五、細(xì)胞抗病毒的RNA干擾干擾pRNA干擾干擾(RNA interference，RNAi)是指是指細(xì)胞利用內(nèi)源或外源的小分子雙股細(xì)胞利用內(nèi)源或外源的小分子雙股RNA片片段，特異性地降解同源基因的段，特異性地降解同源基因的mRNA，從，從而導(dǎo)致靶基因轉(zhuǎn)錄后的基因沉默而導(dǎo)致靶基因轉(zhuǎn)錄后的基因沉默 (post translational genesilence,P