藥物分析 第二章鑒別

1、第二章藥物的鑒別試驗第二章藥物的鑒別試驗 基基 本要求本要求 一一、掌握鑒別試驗的原理、掌握鑒別試驗的原理、基本方法基本方法 二、熟悉鑒別試驗的影響因素與注意事項二、熟悉鑒別試驗的影響因素與注意事項 三、了解鑒別試驗方法的驗證。三、了解鑒別試驗方法的驗證。 它是藥檢工作的首藥檢工作中的它是藥檢工作的首藥檢工作中的首先項任務(wù)首先項任務(wù)，只有在只有在藥物鑒別無誤的情況下，才能進(jìn)行藥物的雜質(zhì)檢查、含量藥物鑒別無誤的情況下，才能進(jìn)行藥物的雜質(zhì)檢查、含量測定。測定。 藥物鑒別試驗是用來證實貯藏在有標(biāo)簽容器中的藥物藥物鑒別試驗是用來證實貯藏在有標(biāo)簽容器中的藥物是否為其所表示的藥物，而不是對未知物進(jìn)行定性分

2、析，是否為其所表示的藥物，而不是對未知物進(jìn)行定性分析，因為這些鑒別試驗雖有一定的因為這些鑒別試驗雖有一定的專屬性專屬性，但不具備進(jìn)行未知但不具備進(jìn)行未知無確證的條件，故無確證的條件，故不能不能鑒別未知物。鑒別未知物。舉列舉列: :天麻天麻 鑒別要點鑒別要點: :鶯哥嘴鶯哥嘴 橫點紋橫點紋( (市場有人有土豆市場有人有土豆做假做假) ) 第一節(jié)藥物鑒別試驗的定義與目的第一節(jié)藥物鑒別試驗的定義與目的 2010版凡例中對藥物鑒別的定義為：鑒別項下規(guī)定的試驗方法，僅反映該藥品某些物理、化學(xué)或生物學(xué)等性質(zhì)的特征，不完全代表對該藥品化學(xué)結(jié)構(gòu)的確證。 化學(xué)藥物的結(jié)構(gòu)確證是確認(rèn)所制備原料藥的結(jié)構(gòu)是否正確，適用

3、于未知化合物的鑒別或目標(biāo)對象的結(jié)構(gòu)確認(rèn)。第二節(jié)第二節(jié) 藥物鑒別的項目藥物鑒別的項目藥物的鑒別試驗包括：性狀和鑒別藥物的鑒別試驗包括：性狀和鑒別一、性狀（一、性狀（definition)聚集狀態(tài)、晶形聚集狀態(tài)、晶形 外觀外觀色澤色澤臭、味臭、味: 、 極易溶：極易溶：1份溶質(zhì)在不到份溶質(zhì)在不到1份溶劑中溶解份溶劑中溶解 易溶：易溶： 1份溶質(zhì)在份溶質(zhì)在1份份不到不到10份溶劑中溶解份溶劑中溶解 溶解溶解: 1份溶質(zhì)在份溶質(zhì)在10份份不到不到30份溶劑中溶解份溶劑中溶解 溶解度溶解度 略溶略溶: 1份溶質(zhì)在份溶質(zhì)在30份份不到不到100份溶劑中溶解份溶劑中溶解 微溶微溶: .在在100份份不到不到

4、1000份溶劑中溶解份溶劑中溶解 極微溶解極微溶解:在在1000份份不到不到10000份溶劑中溶解份溶劑中溶解 幾乎不溶或不溶：幾乎不溶或不溶：10000份溶劑中不完全溶份溶劑中不完全溶 物理常數(shù)物理常數(shù): 相對密度、餾程、熔點、比旋度、吸收系數(shù)相對密度、餾程、熔點、比旋度、吸收系數(shù) 、 折光率、黏度、酸值、碘值、皂化值、羥值折光率、黏度、酸值、碘值、皂化值、羥值 第一法：測定易碎的固體藥品第一法：測定易碎的固體藥品 熔點熔點 第二法：測定不易碎的固體藥品（脂肪酸、石蠟等）第二法：測定不易碎的固體藥品（脂肪酸、石蠟等） 第三法：測定凡士林或其他類似的物質(zhì)第三法：測定凡士林或其他類似的物質(zhì) 熔點

5、系指一種物質(zhì)按規(guī)定方法測定，由固體熔化成液體的溫度或融熔同時分解的溫度或在熔化時初熔至全熔經(jīng)歷的溫度范圍。 測定熔點的藥品，應(yīng)是遇熱晶型不轉(zhuǎn)化，其初熔點和終熔點容易分辨； 融熔同時分解是指某一藥品在一定溫度產(chǎn)生氣泡、上升、變色或渾濁等現(xiàn)象。 藥品的熔點與分子結(jié)構(gòu)有關(guān)，當(dāng)構(gòu)成晶格的單位（對有機化合物來說一般是分子，無機化合物的是離子或原子組成）受熱，動能增加到足以克服各單位間相互作用力即格子力，晶格崩潰渙散，這時的 溫度就是固體的熔點。每種純的固體有機化合物都有自己的獨特的晶型結(jié)構(gòu)和分子間力，因此要熔化固體，就需要一定的熱能，所以每種固體物質(zhì)都有獨特的熔點。 熔點在一定程度上反映了物質(zhì)固態(tài)時的格

6、子力大小。凡這種力越大，其熔點越高。格子力大小受分子間作用力的 本性、分子結(jié)構(gòu)與性狀以及晶格類型三種因素的支配，因此有些結(jié)晶性固體物質(zhì)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)相同，但晶型不同，熔點也就不同。 熔點是多數(shù)有機藥物的重要物理常數(shù) 一般未注明者均指“第一法” 測定時根據(jù)供試品熔融同時分解與否，調(diào)節(jié)傳溫液的升溫為2.5-3.0min或1.01.5 min。要求報告: 初熔-供試品在毛細(xì)管內(nèi)開始局部液 化出現(xiàn)明顯液滴時的溫度。 全熔-供試品全部液化時的溫度 注意：（1）化合物分子中引入能形成氫鍵的官能 團(tuán)后，其熔點升高；（2）同系物中，熔點隨分子量的增大而升 高；（3）分子結(jié)構(gòu)越對稱，越有利于排成整齊 形式，造成更

7、大的格子力，則熔點越 高。 比旋度：比旋度：指在一定波長下，偏振光透過指在一定波長下，偏振光透過1dm且每且每1ml中含有中含有 旋光性物質(zhì)旋光性物質(zhì)1g的溶液時測得的旋光度?？捎糜阼b的溶液時測得的旋光度。可用于鑒 別藥物、檢查藥物的純度和含量測定。別藥物、檢查藥物的純度和含量測定。 nTD = 100/dL 摩爾吸收系數(shù)摩爾吸收系數(shù)=A/CL 吸收系數(shù)吸收系數(shù) 百分吸收系數(shù)（百分吸收系數(shù)（Ch.P收載的方法）收載的方法）E1%1cm=A/CL 是指依據(jù)一類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或理化特性，是指依據(jù)一類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或理化特性，通過化學(xué)反應(yīng)鑒別藥物的真?zhèn)巍Ｍㄟ^化學(xué)反應(yīng)鑒別藥物的真?zhèn)?。注意注?只能證實

8、是某一類藥只能證實是某一類藥,而不能證實是哪一種藥而不能證實是哪一種藥?ChP附錄中有：附錄中有：丙二酰脲類丙二酰脲類、托烷生物堿類托烷生物堿類、 芳香芳香 第一胺類第一胺類、有機氟類等有機氟類等、二、一般鑒別試驗二、一般鑒別試驗 （general identification test）1.1.有機氟化物有機氟化物有機氟有機氟氧瓶燃燒氧瓶燃燒無機氟離子無機氟離子pH4.3 茜素氟藍(lán)茜素氟藍(lán)硝酸亞鈰硝酸亞鈰藍(lán)紫色藍(lán)紫色絡(luò)合物絡(luò)合物2. 有機酸鹽有機酸鹽(1) 水楊酸水楊酸水楊酸水楊酸 + FeCl3中性條件中性條件弱酸性條件弱酸性條件紅色配位化合物紅色配位化合物紫色配位化合物紫色配位化合物(2

9、) 酒石酸鹽酒石酸鹽供試品溶液（中性）供試品溶液（中性）+ 氨制硝酸銀氨制硝酸銀水浴中水浴中 銀鏡銀鏡3.3.芳香第一胺類芳香第一胺類供試品供試品+ 稀鹽酸稀鹽酸 亞硝酸鈉亞硝酸鈉堿性堿性 - -萘酚試液萘酚試液紅色到猩紅色紅色到猩紅色 4.4.托烷生物堿類托烷生物堿類 此類生物堿中具有莨菪酸結(jié)構(gòu)，有此類生物堿中具有莨菪酸結(jié)構(gòu)，有VitaliVitali反應(yīng)反應(yīng), ,顯紫色。顯紫色。 5.5.無機金屬鹽（無機金屬鹽（Na, K, Ca)Na, K, Ca) 焰色反應(yīng)：焰色反應(yīng)：NaNa顯鮮黃色；顯鮮黃色；K K顯紫色；顯紫色；CaCa顯磚紅色顯磚紅色 銨鹽：銨鹽： 供試品供試品 + NaOH

10、氨臭氨臭使?jié)駶櫟氖節(jié)駶櫟募t色石蕊紅色石蕊試紙變藍(lán)試紙變藍(lán)使硝酸亞汞試液濕使硝酸亞汞試液濕潤的濾紙顯黑色潤的濾紙顯黑色6. 無機酸根無機酸根 氯化物：氯化物： Cl- + Ag+ AgCl 乳白色乳白色 硫酸鹽：硫酸鹽： SO42- + Ba2+ BaSO4 白色白色三、專屬鑒別試驗三、專屬鑒別試驗 (specific identification test) 證實某一種藥物的依據(jù)，是根據(jù)每一種藥物的化證實某一種藥物的依據(jù)，是根據(jù)每一種藥物的化 學(xué)結(jié)構(gòu)的差異或理化性質(zhì)的不同，選用某些特有的靈敏學(xué)結(jié)構(gòu)的差異或理化性質(zhì)的不同，選用某些特有的靈敏 的定性反應(yīng)，來鑒別藥物的真?zhèn)巍５亩ㄐ苑磻?yīng)，來鑒別藥物的

11、真?zhèn)巍?綜上所述，一般鑒別試驗是以某些類別藥物的共同化學(xué)結(jié)構(gòu)為依據(jù)，根據(jù)其相同的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行藥物真為的鑒別，以區(qū)別不同類別的藥物。專屬鑒別試驗是在一般鑒別試驗的基礎(chǔ)上，利用各種藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)差異，來鑒別藥物，以區(qū)別同類藥物或具有相同化學(xué)結(jié)構(gòu)部分的各個藥物單體，達(dá)到最終確證藥物真?zhèn)蔚哪康?。第三?jié)第三節(jié) 鑒別方法鑒別方法一、化學(xué)鑒別法一、化學(xué)鑒別法 三氯化鐵呈色反應(yīng)三氯化鐵呈色反應(yīng)(Ar-OH, Ar-OCOCH3) 異羥戊酸鐵反應(yīng)異羥戊酸鐵反應(yīng)(Ar-COOH;-COOR) 1. 顯色反應(yīng)鑒別法顯色反應(yīng)鑒別法 茚三酮呈色反應(yīng)茚三酮呈色反應(yīng)(脂肪氨基，脂肪氨基，氨基酸）氨基酸） 重氮化重氮化-

12、偶合呈色反應(yīng)偶合呈色反應(yīng)(Ar-NH2;-NHCOR) 氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng) 與金屬離子的沉淀反應(yīng)與金屬離子的沉淀反應(yīng) 2. 沉淀生成鑒別法沉淀生成鑒別法 與硫氰化鉻銨的沉淀反應(yīng)與硫氰化鉻銨的沉淀反應(yīng) 其它沉淀反應(yīng)其它沉淀反應(yīng)(如生物堿沉淀劑）如生物堿沉淀劑） 藥物本身在可見光下發(fā)射熒光藥物本身在可見光下發(fā)射熒光 藥物溶液加硫酸后在可見光下發(fā)射熒光藥物溶液加硫酸后在可見光下發(fā)射熒光 3. 熒光反應(yīng)鑒別法熒光反應(yīng)鑒別法 藥物與溴反應(yīng)后，在可見光下發(fā)出熒光藥物與溴反應(yīng)后，在可見光下發(fā)出熒光 藥物與間苯二酚溴反應(yīng)后，發(fā)射出熒光藥物與間苯二酚溴反應(yīng)后，發(fā)射出熒光

13、 藥物其它反應(yīng)后，發(fā)射出熒光藥物其它反應(yīng)后，發(fā)射出熒光 制備衍生物：制備衍生物： 藥物試劑藥物試劑 具有熒光的衍生物具有熒光的衍生物 胺類、酰脲類、酰胺類藥物經(jīng)強堿處理胺類、酰脲類、酰胺類藥物經(jīng)強堿處理 生成氨氣生成氨氣 ( NH3 ；NH(C2H5)2) 含硫藥物經(jīng)強酸處理后，加熱，生成硫含硫藥物經(jīng)強酸處理后，加熱，生成硫 4. 氣體生成反應(yīng)鑒別法氣體生成反應(yīng)鑒別法 化氫氣體化氫氣體(H2S+Pb2+ PbS +2H+) 含碘有機藥物，加熱。生成紫色碘蒸汽含碘有機藥物，加熱。生成紫色碘蒸汽 含醋酸酯和乙酰胺類藥物酸水解后，加含醋酸酯和乙酰胺類藥物酸水解后，加 乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯乙醇可產(chǎn)生乙酸

14、乙酯5、制備衍生物測定熔點法、制備衍生物測定熔點法 藥物試劑藥物試劑 新化合物有一定新化合物有一定mp; 藥物酸化或堿化生成游離酸或堿。操作繁瑣費時藥物酸化或堿化生成游離酸或堿。操作繁瑣費時 間，應(yīng)用較少。間，應(yīng)用較少。二、光譜鑒別法二、光譜鑒別法 測定最大吸收波長，或同時測定最小吸收波長測定最大吸收波長，或同時測定最小吸收波長 規(guī)定濃度的供試液在最大吸收波長測定吸收度規(guī)定濃度的供試液在最大吸收波長測定吸收度1.紫外光譜鑒別法紫外光譜鑒別法 規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法 規(guī)定吸收波長和吸收度比值法規(guī)定吸收波長和吸收度比值法 經(jīng)化學(xué)處理后經(jīng)化學(xué)處理后, 測定其反應(yīng)產(chǎn)物吸收光譜

15、特性測定其反應(yīng)產(chǎn)物吸收光譜特性例例P77 壓片法壓片法2. 紅外光譜鑒別法紅外光譜鑒別法 糊法糊法 膜法膜法 溶液法溶液法在用在用IR光譜進(jìn)行鑒別試驗時，光譜進(jìn)行鑒別試驗時，ChP2010采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照法采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照法 TLC 法法 （Rf樣樣Rf對對） 三、三、 色譜鑒別法色譜鑒別法 PC法法 HPLC法法 （tR樣樣tR對對） GC法法 在ChP2010中，對TLC鑒別法在斑點的顏色、位置、與斑點大小方面做出了明確要求：1、供試品與同濃度對照品顏色（或熒光）與位置（Rf）應(yīng)一致，斑點大小應(yīng)大致相同；2、供試品與對照品等體積混合，應(yīng)顯示單一，斑點緊密；或供試品溶液的主斑點與上述混合液的

16、主斑點的顏色與位置一致，大小相似；3、選用與供試品化學(xué)結(jié)構(gòu)相似藥物對照品或雜質(zhì)對照品，兩者的比移值應(yīng)不同；4、上述兩種溶液等體積混合，應(yīng)顯示兩個清晰分離的斑點。注意事項：1、由于受薄層板質(zhì)量、邊緣效應(yīng)等因素的影響，實際操作中有時會遇到同一物質(zhì)在同一薄層板上的Rf值不一的情況，操作中可增加將供試品溶液與對照品溶液等量混合，點樣后出現(xiàn)單一斑點作為鑒別依據(jù)。2、單獨使用TLC鑒別時，需要進(jìn)行色譜系統(tǒng)適應(yīng)性試驗內(nèi)容，對斑點的比移值和分離效能進(jìn)行考察。必要時進(jìn)行靈敏度考察。3、TLC法除色譜行為外，還可將斑點顏色作為鑒別依據(jù)，由以上兩個因素把握供試品與對照品的同一性，簡單易行，是一個鑒別的好方法。四、原

17、子吸收法（AAS法）五、核磁共振法（NMR法）六、質(zhì)譜法（MS法）七、X射線粉末衍射法八、指紋圖譜與特征圖譜鑒別法八、指紋圖譜與特征圖譜鑒別法P91 通過對所得到的能夠體現(xiàn)中藥整體特性的圖譜識通過對所得到的能夠體現(xiàn)中藥整體特性的圖譜識別，提供一種能夠比較全面的控制中藥質(zhì)量的方法，從化別，提供一種能夠比較全面的控制中藥質(zhì)量的方法，從化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)的角度保證中藥制劑的穩(wěn)定和可靠。學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)的角度保證中藥制劑的穩(wěn)定和可靠。 具體是采用指紋圖譜模式，將中藥內(nèi)在物質(zhì)特性轉(zhuǎn)具體是采用指紋圖譜模式，將中藥內(nèi)在物質(zhì)特性轉(zhuǎn)化為常規(guī)數(shù)據(jù)信息，用于中藥鑒別和質(zhì)量評價?；癁槌Ｒ?guī)數(shù)據(jù)信息，用于中藥鑒別和質(zhì)量評價。注意：注

18、意：1、中藥尤其是復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，如果要求中藥成分分、中藥尤其是復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，如果要求中藥成分分 析圖譜始終不變是不合邏輯的；析圖譜始終不變是不合邏輯的； 2、不同制藥企業(yè)對同種藥材工藝不能保證一致，要求同一、不同制藥企業(yè)對同種藥材工藝不能保證一致，要求同一 個品種用同一個指紋圖譜來進(jìn)行質(zhì)量控制幾乎是做不到。個品種用同一個指紋圖譜來進(jìn)行質(zhì)量控制幾乎是做不到。 3、特征圖譜通常是指主要有效成分的特征峰譜圖，而指紋、特征圖譜通常是指主要有效成分的特征峰譜圖，而指紋 圖譜除了有效成分的特征峰外，還包括更多內(nèi)容、更專圖譜除了有效成分的特征峰外，還包括更多內(nèi)容、更專 一性。一性。 九、生物學(xué)法

19、九、生物學(xué)法P89 是利用藥效學(xué)和分子生物學(xué)等有效是利用藥效學(xué)和分子生物學(xué)等有效 技術(shù)來鑒技術(shù)來鑒定藥物品質(zhì)的方法。定藥物品質(zhì)的方法。十、顯微鑒別法十、顯微鑒別法P88 主要用于中藥及其制劑的鑒別，通常采用顯主要用于中藥及其制劑的鑒別，通常采用顯微鏡對藥材的切片（飲片）、粉末、解離組織或微鏡對藥材的切片（飲片）、粉末、解離組織或表面制片，以及含飲片粉末的制劑中飲片組織、表面制片，以及含飲片粉末的制劑中飲片組織、細(xì)胞或含物等特征進(jìn)行鑒別的方法。細(xì)胞或含物等特征進(jìn)行鑒別的方法。第四節(jié)第四節(jié) 鑒別試驗條件及方法驗證鑒別試驗條件及方法驗證（一）溶液的濃度一）溶液的濃度 溶液的濃度主要指被鑒別物質(zhì)的濃度，其大小影響結(jié)果的判斷。溶液的濃度主要指被鑒別物質(zhì)的濃度，其大小影響結(jié)果的判斷。 （如化學(xué)法中要觀察沉淀、顏色；（如化學(xué)法中要觀察沉淀、顏色；UV法中法中max, A, E1%1cm)（二）溶液的溫度（二）溶液的溫度 溫度過高可使產(chǎn)物分解，導(dǎo)致顏色變淺，甚至觀察不到結(jié)果。溫度過高可使產(chǎn)物分解，導(dǎo)致顏色變淺，甚至觀察不到結(jié)果。 （三）溶液的酸堿度三）溶液的酸堿度 試反應(yīng)物處于活化狀態(tài)、反應(yīng)產(chǎn)物處于穩(wěn)定和